专利名称：己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法
技术领域：
本发明涉及的是一种电化学分析技术领域的检测方法，特别的是一种己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法。
背景技术：
己烯雌酚(diethylstilbestrol，(E)-3，4-Bis(4-hydroxyphenyl)-3-hexene，DES)诞生于20世纪40年代，为第一个口服有活性的人工合成雌激素。己烯雌酚在人造雌激素中是作用较强的一种。医学上主要用于治疗雌激素缺乏症，但是由于其具有促进动物生长、增加蛋白质沉积和提高饲料转化率的作用，曾经作为促生长剂广泛应用于畜牧养殖业。己烯雌酚在兽医临床上主要用于不明显发情动物的催情，还可用治疗胎衣不下、排出死胎、治疗子宫炎等。自从人们发现动物因食用含DES的饲料在组织中残留给人类健康带来危害以来，世界上绝大多数国家禁止在食品动物中使用DES。2002年我国农业部规定，DES及其盐、酯制剂禁用于所有食品动物的所有用途。但在畜牧养殖业上非法添加DES情况不时出现，因而建立快速、灵敏并能实现现场检测己烯雌酚的方法非常必要。目前国内外文献报道用于DES残留检测的方法很多，主要有免疫学方法如放射免疫法(RIA)酶联免疫吸附法(ELISA)等；色谱学方法如气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、气液色谱法(GLC)等；其它方法如辐射分光光度法、电化学法，生物分析法等。在这些分析方法中，气相色谱-质谱联机法、放射免疫法以及带电子捕获检测器的气相色谱法是目前已有的最能有效、灵敏地测定DES ppb水平含量的检测方法。但这些分析方法均需要大型分析仪器，操作过程繁琐，不能实现现场检测。本发明研制的修饰电极可直接用于现场样品中DES的富积及与便携式电化学传感器组装后进行现场测试。
经对现有技术文献的检索发现，Shenghui Zhang，Kangbing Wu and Shengshui Hu.Voltammetric determination of diethylstilbestrol at carbonpaste electrode using cetrylpyridine bromide as medium.Talanta，2002，58747-754(张胜辉、吴康斌、胡胜水于2002年，在《国际纯粹》58期747页-754页，发表的“以溴代十六烷基吡啶为电子媒介体的碳糊电极上检测己烯雌酚的电化学方法”)。但该方法的缺陷是由于使用碳糊电极，其重复性不佳，且检测限较高，为0.00268μg/g，不能满足检测动物性产品中己烯残留最低检测限的要求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法。本发明的工作电极的修饰过程简单且能重复利用，该修饰电极对己烯雌酚的选择性富积能力强，测试的重现性良好及灵敏度高，检测限可达到0.001μg/g。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括如下步骤第一步，电极的预处理将玻碳电极在麂皮上用TiO2纳米粉按“8”字形打磨，使其成镜面，用蒸馏水冲洗，再用超声波清洗10分钟～30分钟；将清洗后的玻碳电极依次放入体积比为1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分钟～15分钟，然后用蒸馏水冲洗电极；将电极在红外灯下烘干。
第二步，纳米金溶胶液的制备；第三步，聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极的制备可先后分为聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备与聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备两个步骤；第四步，用聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极测试己烯雌酚含量a.在不同的电化学测试杯中分别加入6毫升～10毫升pH6.8的0.01M的磷酸盐缓冲液作为支持溶液，然后在每个小烧杯中分别加入100微升～300微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚标准液或样品待测液。(作标准曲线时，使每个烧杯中己烯雌酚的最终浓度分别为0.06mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.6mg/L、1.2mg/、2.4mg/L，4.8mg/L、6.0mg/L及9.0mg/L。)b.将修饰好的聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极、Ag/AgCL参比电极(市售)及铂电极(市售)连接到MF-1A多功能伏安仪(市售，江苏江分电分析仪器有限公司)上，(调节MF-1A多功能伏安仪的测试参数扫描电位范围为0.0V～0.7V，灵敏度选0.5μA/mV～2μA/mV)富积时间为60秒～120秒，用微分脉冲伏安法(即DPV法，为常规技术)记录己烯雌酚的氧化峰电流值。每测完一个样品，将该修饰电极置于0.2mol/L的氢氧化钠溶液中清洗3分钟～5分钟以除去电极表面己烯雌酚的残留。
c.根据己烯雌酚的浓度值与对应的氧化峰电流绘制出己烯雌酚的标准曲线，并根据标准曲线计算相应样品中己烯雌酚的含量。
所述的第二步，纳米金溶胶液的制备方法，具体是a.将氯金酸溶液加到装有200ml蒸馏水的大烧杯中；b.将烧杯放在电炉上，大火煮沸；c.用移液枪将0.5ml～2ml新配制的1％的柠檬酸三钠边搅拌边加入到正在沸腾的大烧杯内；d.改用中火继续加热；e.观察溶液颜色变化由无色到深紫色，再到紫红色(红葡萄酒色)；f.注意一旦发现溶液颜色有转变为紫红色的趋势，即开始计时，继续煮沸后关火；g.待溶液冷却至室温后，储存于4℃冰箱中，待下一步处理(所得胶体金粒子的平均直径可以在电子显微镜下观察得到，约20nm)。
所述的氯金酸溶液，其取量及浓度是1％氯金酸溶液，0.5ml～1ml。
所述的继续煮沸后关火，其持续的时间是5分钟。
所述的第三步，聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备，具体是取市售的质量百分比浓度为30％～50％的聚乙烯亚胺原液0.5毫升～1毫升，相应地以0.5毫升～1毫升异丙醇作为助溶剂，并用pH6.8浓度为0.01M的磷酸盐缓稀释成0.5％的聚乙烯亚胺溶液。取该溶液5毫升加入到电化学测试池中。在电化学测试池中经过沉积附着，在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜。
所述的在电化学测试池中经过沉积附着，具体是将先玻碳柱状电极(外形直径为8.0mm，反应面直径为6.0mm)与Ag/AgCl参比电极及铂电极构成三电极结构，插入到含有0.5％的聚乙烯亚胺溶液的电化学测试池中，连接MF-1A型多功能伏安仪，进行循环伏安扫描，取出后在红外灯下烘干(或空气中自然晾干)，即在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜；所述的进行循环伏安扫描，条件是在-0.5V～0.5V的范围内，扫描10圈～30圈。
所述的第三步，聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备，具体是将上述聚乙烯亚胺-修饰的电极(即PEI-修饰的电极)浸入胶体金溶液中，用三蒸水清洗后，在空气中自然干燥。最后在已修饰的电极表面直接滴加2μl～6μl的5％的聚乙烯亚胺(即PEI)，在空气中干燥后待用。
所述的浸入胶体金溶液中，时间是3分钟～10分钟。
主要发明的方法原理是首先在预处理过的玻碳电极上用电化学沉积法修饰一层聚乙烯亚胺层，然后将该修饰电极浸入到纳米金胶体溶液中来吸附带负电荷的纳米金离子形成第二修饰层，再在此修饰电极上通过吸附聚乙烯亚胺形成三层“夹心式”玻碳修饰电极，由于这种修饰方法增加了电极的富积能力及增大了电极表面的反应面积，因而增加了该方法检测己烯雌酚的灵敏度及特异性。本发明所采用的核心技术是先将玻碳电极预处理后(主要包括在TiO2纳米粉上抛光、超声清洗及在硝酸、丙酮及蒸馏水中的清洗)，用电化学沉积法在玻碳电极表面沉积一层聚乙烯亚胺膜，然后将该膜浸入纳米金溶液中使溶液中的纳米金颗粒沉积于聚乙烯亚胺膜表面，最后又在纳米金层外面再电沉积一层聚乙类亚胺膜。其中钠米金溶液是用柠檬酸钠还原氯金酸溶液而制得。将该“三明治”式修饰电极与便携式的电化学分析仪组装后，便可用于测试样品中的己烯雌酚的残留。
本发明的应用利用己烯雌酚在聚乙烯亚胺——纳米金修饰电极上发生高效吸附及特征性氧化还原反应，通过氧化微电流测试被检样品中己烯雌酚的含量，该测试方法步骤简单，分析时间短，检测下限可达0.001μg/g，可适用于生物样品中雌激素类物质残留的现场检测。可应用于快速、灵敏、现场检测动物性产品、饲料样品中己烯雌酚的电化学传感器检测，从源头控制动物性食品的安全性。
本发明的有益效果是现有的有关测试雌激素的电化学方法是采用未修饰碳糊电极进行直接测定，检测限达到0.4μg/g，因而该方法的灵敏度低而不适合运用于动物性产品中雌激素的检测。本发明所阐述的方法优点在于工作电极的修饰过程简单且能重复利用，该修饰电极的对己烯雌酚的选择性富积能力强，测试的重现性良好及灵敏度高，检测限可达到0.001μg/g。该方法克服了色谱法检测DES时需要大型仪器及耗费时间及人力的缺点，同时也克服了现有检测己烯雌酚免疫金标试纸条假阳性及假阴性较高的缺点。
图1是本发明实施例1的“三明治”式聚乙烯亚胺——纳米金修饰电极的结构模式。
具体实施例方式
下面对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1本实施例1是在以下实施条件和技术要求条件下实施的(一)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备(1)电极的预处理首先将玻碳电极在麂皮上用TiO2纳米粉按“8”字形打磨好，使其成镜面，用蒸馏水冲洗后，再用超声波清洗10分钟。然后将清洗后的玻碳电极依次放入体积比为1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分钟，用蒸馏水冲洗电极。最后将电极在红外灯下烘干。
(2)纳米金胶体粒子的制备先将0.5ml 1％的氯金酸溶液加到装有200ml蒸馏水的大烧杯中。然后将烧杯放在电炉上，大火煮沸。用移液枪将0.5ml新鲜配制的1％的柠檬酸三钠边搅拌边加入到正在沸腾的大烧杯内，改用中火继续加热。发现溶液颜色有转变为酒红色的趋势，即开始计时继续煮沸5分钟后关火。待溶液冷却至室温后，储存于4℃冰箱中。电子显微镜下观察胶体金粒子的平均直径约为38nm。
(3)聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备取质量百分比浓度为30％的聚乙烯亚胺原液0.5毫升，以0.5毫升异丙醇作为助溶剂，用pH6.8浓度为0.01M的磷酸盐缓稀释成0.5％的聚乙烯亚胺溶液，取该溶液5毫升加入到电化学测试池中。将玻碳柱状电极(外形直径为8.0mm，反应面直径为6.0mm)与Ag/AgCl参比电极及铂电极构成三电极结构，插入到含有0.5％的聚乙烯亚胺溶液的电化学测试池中，连接MF-1A型多功能伏安仪，在-0.5V到0.5V的范围内进行循环伏安扫描10圈，取出后在红外灯下烘干(或空气中自然晾干)，即在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜。
(4)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备将上述PEI-修饰的电极浸入胶体金溶液中3分钟，用三蒸水清洗后，在空气中自然干燥。最后在已修饰的电极表面直接滴加2μl的5％的PEI，在空气中干燥后待用，完成聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备，参见图1所示“三明治”式聚乙烯亚胺——纳米金修饰电极的结构模式，在该结构中，具有阳离子活性剂性质的聚乙烯亚胺可吸附带负电的纳米金颗粒，纳米金颗粒怪又可吸附聚乙烯亚胺层。这样由于夹层中的纳米金与聚乙烯亚胺组合后，大大提高了吸附面积及反应面积，使电流数百倍放大，因而可使检测己烯雌酚的检测限下降。
(二)聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极的测试己烯雌酚电化学分析方法的建立。
(1)标准曲线的绘制①在不同的电化学测试杯(25ml)中分别加入6毫升pH6.8的0.01M的PBS作为支持溶液，然后在每个小烧杯中分别加入100微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚标准液，使每个烧杯中己烯雌酚的最终浓度分别为0.06mg/L、0.12mg/L、0.3mg/L、0.6mg/L、1.2mg/、2.4mg/L，4.8mg/L、6.0mg/L及9.0mg/L。
②将修饰好的聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极、Ag/AgCL参比电极及铂电极连接到MF-1A多功能伏安仪上(江苏江分电分析仪器有限公司)。
③调节仪器测试参数扫描电位范围为0.0V～0.7V。仪器灵敏度选0.5μA/mV，富积时间为60秒，用微分脉冲伏安法(DPV法)记录己烯雌酚的氧化峰电流值。该方法的测试调制参数如下脉冲幅度为50mV，脉冲宽度20ms，脉冲期为200ms，扫描速度50mV.s-1。每测完一个样品，将该修饰电极置于0.2mol/L的氢氧化钠溶液中清洗3分钟以除去电极表面己烯雌酚的残留。
④根据己烯雌酚的浓度值与对应的氧化峰电流绘制出聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极法检测己烯雌酚的标准曲线。
(二)实际样品的测试①样品的前处理从上海市食品质量检验部门获得猪肉冷冻样品30份，于室温下解冻，准确称取5.0g组织置于30mL塑料离心管中，加入10mL乙醚，混匀后旋涡振荡3min，再用超声震荡15分钟，6000r/min离心5min，吸取上清液至30mL玻璃管中，残余物中再加10mL乙醚重复提取一次，合并乙醚相在40℃水浴条件下氮气流吹干。用2mL 70％甲醇溶液溶解残留物，旋涡混匀，加4mL石油醚后再旋涡混匀。静置片刻后吸除上层石油醚，再加石油醚重复提取2次。下层的甲醇相在45℃水浴条件下氮气流吹干。剩余的水溶液再用4mL乙醚提取，充分混匀，静置分层后，吸取上层的乙醚相至10mL玻璃离心管中，重复上述操作一次，合并乙醚相，在0℃水浴下氮气流吹干。以1毫升的1％甲醇水溶液溶解后，冷藏待测。
②测试方法及结果在与测试标准样品相同的测试条件下，取待检样品液100微升，加入电化学测试池，用微分脉冲伏安法记录己烯雌酚的氧化峰电流值。并根据标准曲线计算相应样品中己烯雌酚的含量。测试结果表明，30份样品中，有2份样品中检测到己烯雌酚，含量分别0.025μg/g及0.086μg/g，其它样品均为阴性。经高效液相色谱确证法检测时，只有一份检测到己烯雌酚残留，含量为0.096μg/g。说明该方法的灵敏度要高于色谱法，检测程序简单且检测时间短，每个样品检测时间为3分钟，可用于快速、现场检测生物样品中己烯雌酚残留。
实施例2本实施例2是在以下实施条件和技术要求条件下实施的(一)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备(1)电极的预处理首先将玻碳电极在麂皮上的打磨及蒸水冲洗过程同实施例1。然后用超声波清洗30分钟，再将清洗后的玻碳电极依次放入体积比为1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡15分钟，用蒸馏水冲洗电极。最后将电极在空气中自然晾干。
(2)纳米金胶体粒子的制备先将1.0ml 1％的氯金酸溶液加到装有200ml蒸馏水的大烧杯中。然后将烧杯放在电炉上，大火煮沸。用移液枪将2.0ml新鲜配制的1％的柠檬酸三钠边搅拌边加入到正在沸腾的大烧杯内，改用中火继续加热。发现溶液颜色有转变为紫红色的趋势，即开始计时继续煮沸5分钟后关火。待溶液冷却至室温后，储存于4℃冰箱中。电子显微镜下观察胶体金粒子的平均直径约为22nm。
(3)聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备0.5％的聚乙烯亚胺溶液的配制同实施例1，取该溶液5毫升加入到电化学测试池中。将玻碳柱状电极、Ag/AgCl参比电极及铂电极构成三电极结构，插入到含有0.5％的聚乙烯亚胺溶液的电化学测试池中，连接MF-1A型多功能伏安仪(江苏江分电分析仪器有限公司)，在-0.5V到0.5V的范围内进行循环伏安扫描30圈，取出后在或空气中自然晾干，即可在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜。
(4)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备将上述PEI-修饰的电极浸入胶体金溶液中10分钟，用三蒸水清洗后，在空气中自然干燥。最后在已修饰的电极表面直接滴加6μl的5％的PEI，在空气中干燥后待用。
(二)聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极的测试己烯雌酚电化学分析方法的建立。
(1)标准曲线的绘制标准曲线的绘制方法及步骤同实施例1，不同之处是在本次实施例实施中，运用本次修饰的聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极为测试电极。仪器参数调节如下扫描电位范围为0.0V～0.7V。仪器灵敏度选2.0μA/mV，富积时间为120秒，用微分脉冲伏安法(DPV法)记录己烯雌酚的氧化峰电流值。该方法的测试调制参数如下脉冲幅度为100mV，脉冲宽度40ms，脉冲期为400ms，扫描速度100mV.s-1每测完一个样品，将该修饰电极置于0.2mol/L的氢氧化钠溶液中清洗5分钟以除去电极表面己烯雌酚的残留。
(二)实际样品的测试①样品的前处理样品的采集及前处理过程同实施例1。
②测试方法及结果在与测试标准样品相同的测试条件下，取待检样品液100微升，加入电化学测试池，用微分脉冲伏安法记录己烯雌酚的氧化峰电流值。并根据标准曲线计算相应样品中己烯雌酚的含量。测试结果表明，30份样品中，有2份样品中检测到己烯雌酚，含量分别0.016μg/g及0.058μg/g，其它样品均为阴性。说明同实施例1相比较，灵敏度稍有下降，但仍要高于色谱测定方法，且检测时间短，操作过程比色谱法简单。
实施例3本实施例3是在以下实施条件和技术要求条件下实施的(一)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备(1)电极的预处理首先将玻碳电极在麂皮上的打磨及蒸水冲洗过程同实施例1。然后用超声波清洗20分钟，再将清洗后的玻碳电极依次放入体积比为1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡9分钟，用蒸馏水冲洗电极。最后将电极在空气中自然晾干。
(2)纳米金胶体粒子的制备先将0.75ml 1％的氯金酸溶液加到装有200ml蒸馏水的大烧杯中。然后将烧杯放在电炉上，大火煮沸。用移液枪将1.0ml新鲜配制的1％的柠檬酸三钠边搅拌边加入到正在沸腾的大烧杯内，改用中火继续加热。发现溶液颜色有转变为深红色的趋势，即开始计时继续煮沸5分钟后关火。待溶液冷却至室温后，储存于4℃冰箱中。电子显微镜下观察胶体金粒子的平均直径约为31nm。
(3)聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备0.5％的聚乙烯亚胺溶液的配制同实施例1，取该溶液5毫升加入到电化学测试池中。将玻碳柱状电极、Ag/AgCl参比电极及铂电极构成三电极结构，插入到含有0.5％的聚乙烯亚胺溶液的电化学测试池中，连接MF-1A型多功能伏安仪(江苏江分电分析仪器有限公司)，在-0.5V到0.5V的范围内进行循环伏安扫描20圈，取出后在或空气中自然晾干，即可在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜。
(4)聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备将上述PEI-修饰的电极浸入胶体金溶液中6分钟，用三蒸水清洗后，在空气中自然干燥。最后在已修饰的电极表面直接滴加4μl的5％的PEI，在空气中干燥后待用。
(二)聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极的测试己烯雌酚电化学分析方法的建立。
(1)标准曲线的绘制标准曲线的绘制方法及步骤同实施例1，不同之处是在本次实施例实施中，运用本次修饰的聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极为测试电极。仪器参数调节如下扫描电位范围为0.0V～0.7V。仪器灵敏度选1.0μA/mV，富积时间为90秒，用微分脉冲伏安法(DPV法)记录己烯雌酚的氧化峰电流值。该方法的测试调制参数如下脉冲幅度为25mV，脉冲宽度10ms，脉冲期为100ms，扫描速度25mV.s-1。每测完一个样品，将该修饰电极置于0.2mol/L的氢氧化钠溶液中清洗4分钟以除去电极表面己烯雌酚的残留。
(二)实际样品的测试①样品的前处理样品的采集及前处理过程同实施例1。
②测试方法及结果在与测试标准样品相同的测试条件下，取待检样品液100微升，加入电化学测试池，用微分脉冲伏安法记录己烯雌酚的氧化峰电流值。并根据标准曲线计算相应样品中己烯雌酚的含量。测试结果表明，30份样品中，仍有2份样品中检测到己烯雌酚，含量分别0.083μg/g及0.117μg/g，其它样品仍均为阴性。说明同实施例1及实施例2相比较，灵敏度更高且检测限更低。
权利要求
1.一种己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征在于，包括如下步骤第一步，电极的预处理将玻碳电极在麂皮上用TiO2纳米粉按“8”字形打磨，使其成镜面，用蒸馏水冲洗，再用超声波清洗10分钟～30分钟；将清洗后的玻碳电极依次放入体积比为1∶1的硝酸、丙酮溶液中各浸泡3分钟～15分钟，然后用蒸馏水冲洗电极；将电极在红外灯下烘干；第二步，纳米金溶胶液的制备；第三步，聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极的制备先后分为聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备与聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备两个步骤；第四步，用聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极测试己烯雌酚的含量a.在不同的电化学测试杯中分别加入6毫升～10毫升pH6.8的0.01M的磷酸盐缓冲液作为支持溶液，然后在每个小烧杯中分别加入100微升～300微升的7％乙醇水溶液配制的己烯雌酚标准液或样品待测液；b.将修饰好的聚乙烯亚胺-纳米金修饰玻碳电极、Ag/AgCL参比电极及铂电极连接到MF-1A多功能伏安仪上，富积60秒～120秒，记录己烯雌酚的氧化峰电流值；c.根据己烯雌酚的浓度值与对应的氧化峰电流绘制出己烯雌酚的标准曲线，并根据标准曲线计算相应样品中己烯雌酚的含量。
2.如权利要求1所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的第二步，纳米金溶胶液的制备方法，具体是a.将氯金酸溶液加到装有200ml蒸馏水的大烧杯中；b.将烧杯放在电炉上，大火煮沸；c.用移液枪将0.5ml～2ml新配制的1％的柠檬酸三钠边搅拌边加入到正在沸腾的大烧杯内；d.改用中火继续加热；e.观察溶液颜色变化由无色到深紫色，再到紫红色；f.发现溶液颜色有转变为紫红色的趋势，即开始计时，继续煮沸后关火；g.待溶液冷却至室温后，储存于4℃冰箱中，待下一步处理。
3.如权利要求2所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的氯金酸溶液，其取量及浓度是1％氯金酸溶液，0.5ml～1ml。
4.如权利要求2所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的继续煮沸后关火，其持续的时间是5分钟。
5.如权利要求1所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的第三步，聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备，具体是取质量百分比浓度为30％～50％的聚乙烯亚胺原液0.5毫升～1毫升，相应地以0.5毫升～1毫升异丙醇作为助溶剂，并用pH6.8浓度为0.01M的磷酸盐缓稀释成0.5％的聚乙烯亚胺溶液，取该溶液5毫升加入到电化学测试池中，在该电化学测试池中经过沉积附着，在玻碳电极表面形成一层均匀的聚乙烯亚胺薄膜。
6.如权利要求5所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的在电化学测试池中经过沉积附着，具体是将先玻碳柱状电极与Ag/AgCl参比电极及铂电极构成三电极结构，插入到含有0.5％的聚乙烯亚胺溶液的电化学测试池中，连接MF-1A型多功能伏安仪，进行循环伏安扫描，取出后在红外灯下烘干。
7.如权利要求6所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的进行循环伏安扫描，条件是在-0.5V～0.5V的范围内，扫描10圈～30圈。
8.如权利要求1所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的第三步，聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极的制备，具体是将上述聚乙烯亚胺-修饰的电极浸入胶体金溶液中，用三蒸水清洗后，在空气中自然干燥，最后在已修饰聚乙烯亚胺-纳米金修饰电极表面直接滴加2μl～6μl的5％的聚乙烯亚胺，在空气中干燥后待用。
9.如权利要求8所述的己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，其特征是，所述的浸入胶体金溶液中，时间是3分钟～10分钟。
全文摘要
一种己烯雌酚的玻碳电极修饰的电化学检测方法，属于电化学分析技术领域。具体包括电极的预处理；纳米金溶胶液的制备；聚乙烯亚胺－纳米金修饰玻碳电极的制备先后分为聚乙烯亚胺修饰玻碳电极的制备与聚乙烯亚胺－纳米金修饰电极的制备两个步骤；用聚乙烯亚胺－纳米金修饰电极测试己烯雌酚的含量。本发明的工作电极的修饰过程简单且能重复利用，该修饰电极对己烯雌酚的选择性富积能力强，测试的重现性良好及灵敏度高，检测限可达到0.001μg/g。
文档编号G01N27/413GK101059480SQ20071004047
公开日2007年10月24日 申请日期2007年5月10日 优先权日2007年5月10日
发明者刘国艳, 柴春彦 申请人:上海交通大学