专利名称：柠檬酸乙醇法在去除血清中白蛋白中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及血清高丰度蛋白去除方法，具体涉及血清白蛋白去除的一种新方法。
背景技术：
血液学作为一门医学学科，随着分子生物学及相关技术的发展取得了巨大的进步，在疾病的提前诊断以及确诊方面有很大的应用前景。在临床疾病诊断中，血液成分的变化与疾病的发生发展有着非常重要的关系。近年来，运用蛋白质组学技术对血液进行探索已成为一个研究热点。由于血浆成分极其复杂，因此对其进行有效的分离分析则成为血液蛋白质组学研究的关键所在，然而一些高丰度蛋白却常常会掩盖低丰度蛋白的检测。据有报道，约22种高丰度蛋白质占据了血浆总蛋白的98%。其余1-3%的蛋白则属于低丰度蛋白，其微量的变化都会反映机体的状态，在疾病标记蛋白方面具有很大的前景。血浆中白蛋白占据了蛋白含量的一半以上，其浓度为40mg/ml。因此，血液蛋白质组学研究的首要问题就是如何有效地去除白蛋白。现有方法主要为免疫色谱法，但此法价格昂贵，且对设备要求高，一般实验室难以达到要求。此外还包括一些溶剂沉淀的方法，如DAC法、三氯醋酸(TCA)丙酮法等。但上述方法对白蛋白的去除效果均不是很理想，DAC法对白蛋白去除有限，TCA法虽然去除了较多白蛋白，但同时其他一些微量蛋白质也被除去。本方法与其他方法相比，低毒环保，在最大程度去除血清中白蛋白的同时，尽量减少了微量蛋白的损失，在血清样品处理方面其有广阔的应用前景。
发明内容
本项发明目的是提供柠檬酸在去除血清中白蛋白中的应用本发明所涉及的柠檬酸的化学结构式为
权利要求
1.柠檬酸在去除血清中白蛋白中的应用。
2.如权利1所述的应用，其特征在于所述的柠檬酸为柠檬酸乙醇溶液、甲醇溶液、丙醇溶液、丙酮溶液。
3.—种去除血清中白蛋白的方法，包括如下步骤1)血清在4°C下10000-20000g离心10_20min除去血液中脂质类物质。2)吸取除脂后的血清20μ1加入40-80μ 1提取液，其中所述提取液为含按重量体积比 3-5 %的柠檬酸无水乙醇溶液，涡旋混勻。3)将血清提取液置于_20°C静置10-60min。4)提取液10000-20000g离心10-20min，沉淀保留，上清液转移至新EP管。5)步骤4中沉淀置于旋转蒸发仪上蒸发掉残留有机溶剂，沉淀保存。6)步骤4中上清液置于旋转蒸发仪上蒸干有机溶剂，沉淀保存。
4.如权利3所述方法，其特征在于，步骤1)血清在4°C下15000g离心15min。
5.如权利3所述方法，其特征在于，步骤2)吸取除脂后的血清20μ 1加入60 μ 1提取液，涡旋混勻。
6.如权利3-5所述方法，其特征在于，步骤幻提取液中柠檬酸的浓度为3%，溶剂为无水乙醇。
7.如权利3所述方法，其特征在于，步骤3)将血清提取液置于-20°C静置30min。
8.如权利3所述方法，其特征在于，步骤4)提取液15000g离心15min。
全文摘要
本发明名称是柠檬酸乙醇法在去除血清中白蛋白中的应用，涉及血清高丰度蛋白去除方法，具体涉及血清白蛋白去除的一种新方法。包括如下步骤1)将血清离心去除脂质；2)加入血清蛋白提取液，混匀后置于-20℃冰箱，静置30min；3)样品提取液离心；4)分别收集离心沉淀与上清液。本发明所述的一种去除血清中白蛋白的方法操作简单、价格低廉、所需时间短。
文档编号G01N1/34GK102539218SQ20101059718
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月10日 优先权日2010年12月10日
发明者丛维涛, 张鹏辉, 朱忠欣, 李校堃, 林丽, 洪国赢, 金利泰 申请人:温州医学院