专利名称：一种水产品性激素残留分析样品的亚临界R134a前处理方法
技术领域：
本发明涉及一种水产品性激素残留分析样品的亚临界流体前处理方法，特别是涉及一种亚临界萃取作为水产品中性激素前处理的方法。
背景技术：
性激素具有强的蛋白质同化作用，能促进畜禽生长，提高饲料转化率，达到大幅度提高动物养殖经济效益的目的，但其在动物性食品中的残留可能会危及消费者的健康，具有潜在的致癌性，所以被大部分国家禁止用于促进动物生长，并不得在食品中检出。然而由于经济利益，很多非法的渔民会在水产品养殖的过程中在饲料中添加一些性激素，以使水产品达到快速生长的目的。动物组织中性激素残留分析的样品前处理方法大多仍采用液-液萃取，固相萃取，超临界CO2萃取等。液-液萃取和固相萃取费时费力，有机溶剂用量大，对环境有污染， 不利于操作人员的健康。超临界(X)2萃取虽然具有效率高、选择性好、绿色环保等一系列显著的优点，但同时也存在着操作压力高、设备造价大、不易推广应用等缺点。近几年新出现的亚临界流体萃取技术，可以在比较低的压力下实现比较好的萃取效果，克服了超临界CO2 萃取存在的一些缺点，因而受到了越来越多的重视。由于1，1，1，2_ 四氟乙烷(RlMa)具有临界条件(Tc = 101. 1 °C，Pc = 4. 06MPa)易于达到、低毒、惰性、不易燃以及不破坏臭氧层(ODP = O)等特点，所以成为亚临界流体的首选。但是，目前国际上对亚临界萃取技术的研究仍主要集中在有关成分的萃取方面， 根据文献检索，到目前为止尚无采用亚临界作为性激素残留分析样品前处理方法研究的公开报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法。性激素残留分析样品的亚临界前处理技术的原理是利用亚临界的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对亚临界流体溶解力的影响而进行的。在亚临界状态下将亚临界液体与鱼肉肌肉组织接触，使其有选择性地把性激素萃取出来。本发明的技术解决方案包括以下步骤取水产品肌肉组织置于研钵中，加入2 5倍量的石英砂00-60目)研磨，然后加1 3倍量的玻璃纤维，混勻、使水产品肌肉组织充分分散，装入萃取釜中。萃取釜底部加一点脱脂棉，防止样品堵塞管道。最后加入3.5mL 共溶剂甲醇到萃取釜中，萃取釜顶部也装入少量脱脂棉防止样品吹出来堵塞管道。先通入 R134a静态萃取20分钟，然后以4 12克/分钟流速通入进行动态萃取，在温度保持25 50°C、压力2 15MPa条件下萃取40 60分钟，进行分离，用甲醇作为收集液。甲醇收集液旋转蒸发至干，用淋洗液溶解，然后用SPE柱净化。最后过0.45 μ m有机滤膜，待HPLC分析。本发明的积极效果在于#13 作为亚临界萃取剂，无毒、副作用及有机物残留。 性激素在亚临界R134a流体中的溶解度大，萃取效率高。相比传统的萃取方法，亚临界萃取操作时间短，有机溶剂用量少，而且可以在比较低的压力下实现比较好的萃取效果，适用于大规模推广应用。采用本发明工艺性激素的提取率在70%以上。
具体实施例方式下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明，在不背离本发明的精神和原则的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的待批权利要求范围内。实施例1用添加有甲基睾酮的饲料喂养罗非鱼一个月，随机捞取一条，取5g罗非鱼肌肉组织置于研钵中，加入15g的石英砂00-60目)研磨，然后加5g的玻璃纤维，混勻、使鱼肉充分分散，装入萃取釜中。萃取釜底部加一点脱脂棉，防止样品堵塞管道。最后加入3.5mL 共溶剂甲醇到萃取釜中，萃取釜顶部也装入少量脱脂棉防止样品吹出来堵塞管道。通入 R134a，在温度31°C、压力5MPa条件下静态萃取20分钟，然后以10克/分钟流速动态萃取40分钟，用甲醇作为收集液。甲醇收集液旋转蒸发至干，用50 %的甲醇水溶液溶解，摇勻，经已调节好的Cw固相萃取小柱吸附，以2mL超纯水冲洗，用2mL甲醇洗脱后收集，过 0. 45 μ m有机滤膜，待HPLC分析。色谱条件检测器紫外-二极管阵列检测器(检测波长M5nm)；色谱柱 XDB-C18 (4. 6mmx250mm, 5 μ m)；流动相甲醇-水(V V = 70 30)，流速 0. 8mL/min ；柱温25°C ；进样量20 μ L0检测含量为鱼肉中甲基睾酮的残留量为0. 135 μ g/g。实施例2从青岛南山水产品市场随机购买10种水产品，包括鲤鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、 大黄鱼、鲈鱼、对虾、刀额新对虾和日本对虾。分别取IOg样品肌肉组织置于研钵中，加入 30g的石英砂00-60目)研磨，然后加IOg的玻璃纤维，混勻，使肌肉组织充分分散，装入萃取釜中。萃取釜底部加一点脱脂棉，防止样品堵塞管道。最后加入3. 5mL共溶剂甲醇到萃取釜中，萃取釜顶部也装入少量脱脂棉防止样品吹出来堵塞管道。通入R134a，在温度31°C、 压力5MPa条件下静态萃取20分钟，然后以10克/分钟流速动态萃取40分钟，用甲醇作为收集液。甲醇收集液旋转蒸发至干，用50%的甲醇水溶液溶解，摇勻，经已调节好的C18固相萃取小柱吸附，以2mL超纯水冲洗，用2mL甲醇洗脱后收集，过0. 45 μ m有机滤膜，待HPLC 分析。色谱条件检测器紫外-二极管阵列检测器(检测波长M5nm)；色谱柱 XDB-C18 (4. 6mmx250mm, 5 μ m)；流动相甲醇-水(V V = 70 30)，流速 0. 8mL/min ；柱温25°C ；进样量20yL。检测结果为鲤鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、大黄鱼、鲈鱼、对虾、刀额新对虾和日本对虾中均未检测到甲基睾酮，只有鲫鱼肌肉组织中检测到甲基睾酮，鲫鱼肌肉组织中甲基睾酮的残留量为0. 082 μ g/g.
权利要求
1.一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法，其特征在于包括以下步骤取鱼肌肉组织置于研钵中，加入石英砂研磨，然后加入玻璃纤维，混勻后装入萃取釜中，最后加入3. 5mL共溶剂甲醇到萃取釜中。通入Rl:34a，在温度25 50°C、压力2 15MPa 条件下静态萃取20分钟，然后以4 12g/分钟流速动态萃取40 60分钟，用甲醇作为收集液。甲醇收集液旋转蒸发至干，用淋洗液溶解，然后用SPE柱净化。最后过0.45μπι有机滤膜，待HPLC分析。
2.根据权利要求1所述的一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法，其特征在于性激素包括丙酸睾酮、甲基睾酮、己烯雌酚、雌二醇、雌三醇、睾酮、孕酮、醋酸甲羟孕酮。
3.根据权利要求1所述的一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法，其特征在于鱼肌肉为新鲜鱼肉，不经干燥处理。
4.根据权利要求1所述的一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法，其特征在于石英砂的加入量为鱼肉质量的2 5倍，石英砂的粒径为40-60目。
5.根据权利要求1所述的一种水产品性激素残留分析样品的亚临界前处理方法，其特征在于玻璃纤维的加入量为鱼肉质量的1 3倍。
全文摘要
本发明涉及一种水产品性激素残留分析样品的亚临界R134a前处理方法。解决了传统方法费时费力，有机溶剂用量大，对环境有污染，不利于操作人员的健康等问题。其特征在于取水产品肌肉组织置于研钵中，加入石英砂研磨，然后加入玻璃纤维，混匀后装入萃取釜中，最后加入3.5mL共溶剂甲醇到萃取釜中。先通入R134a静态萃取20分钟，然后以4～12克/分钟流速通入R134a进行动态萃取，在温度保持25～50℃、压力2～15MPa条件下萃取40～60分钟，用甲醇作为收集液，然后用SPE固相萃取小柱纯化，最后过0.45μm有机滤膜，待HPLC分析。该方法具有操作简单、易于自动控制等特点，不需大量的有机溶剂，R134a可回收利用，有广泛的应用价值。
文档编号G01N30/08GK102445511SQ20111028268
公开日2012年5月9日 申请日期2011年9月22日 优先权日2011年9月22日
发明者江洁, 薛勇, 薛长湖, 韩玉谦, 马勤川 申请人:中国海洋大学