专利名称：一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法
一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法技术领域
本发明属于稻米品质测定方法技术领域，具体涉及一种简易测定直链淀粉含量的方法。
背景技术：
直链淀粉是以α _1，4糖苷键连接而成的数千个单位长的、极少分支的葡萄糖链状分子，其分子结构对淀粉的糊化特性有很大影响，直链淀粉含量一直是衡量稻米品质的一项重要指标。
农业部米质测定标准(ΝΥ147-88)中规定的直链淀粉含量的测定方法，对广大普通育种工作者来说，有操作上的难度，不便于实际利用，主要表现在三个方面一、沸水浴消煮过程容易出现误差被测样品放在IOOml的容量瓶内，加入碱液在沸水浴中进行消煮，容量瓶体积相对较大，一次消煮样品量偏少，并且不同批次间由于水浴温度等问题容易出现误差；二、沸水浴消煮费时每批次样品需要消煮lOmin，如果样品数量较多，，需要耗费大量的消煮时间，难以实现直链淀粉含量的快速测定；三、费水费试剂操作过程中需要两次定容，每次100ml，需要耗费大量的蒸馏水，每容量瓶需要加入Iml醋酸和1. 5ml碘-碘化钾溶液，如果样品量多，试剂需要多次配制，耗费试剂并且也增加了工作时间。为此，我们在农业部标准方法的基础上，对直链淀粉含量测定方法进行了简化和改进。发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法的技术方案，该方法操作简便，成本低廉，相对快速。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于包括以下工艺步骤1)按直链淀粉的标准测定方法，称取直链淀粉含量呈梯度分布的稻米标准样品和待测样品；2)稻米标准样品和待测样品中分别加入乙醇溶液进行分散处理，分散处理后加入氢氧化钠溶液混勻，然后在室温下静置；3)静置完成后，对步骤2)的样品溶液进行定容；4)取步骤3)得到的定容溶液，再加入醋酸、I2-KI溶液和蒸馏水，混勻，静置； 5 )静置后，用分光在620nm波长处读取吸光度值；6)根据标准样品的吸光度值和已知的直链淀粉含量，绘制标准曲线，然后对应标准曲线，计算出待测样品的直链淀粉含量。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤1)中取过 100目筛的稻米标准样品50mg和过100目筛的待测样品50mg。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤2)中稻米标准样品和待测样品中分别加入浓度为95%的乙醇0. 5ml进行分散处理，分散处理后加入浓度为IM的氢氧化钠溶液4. 5ml混勻。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤2)中室温下静置16小时以上。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤3)中将样品溶液定容至50ml。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤4)中吸取 0. 5ml定容液体，加入5ml蒸馏水混勻，然后依次加入浓度为IM的醋酸0. 1ml、I2-KI溶液 0. 2ml及蒸馏水4. 2ml。
所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤4)中静置 20分钟。
本发明操作简单，设计合理，与现有技术相比，本发明的有益效果如下1)很好的避免了农业部标准方法中规定的沸水浴消煮过程由于水浴温度等原因导致不同批次间容易出现误差的问题，尤其适合大批量样品的测定；2)样品在静置碱消化的过程中，操作人员可以离开去进行胶稠度、糊化温度等其它米质指标的测定，更合理的利用和安排时间，提高分析测定效率；3)简易法比农业部标准方法大大节省了试剂和水资源，试剂和蒸馏水的使用约为原来的1/10，对大多数育种单位和个人都比较适合。
本发明与现有的农业部标准方法对比，其具体如下(表1) 表1直链淀粉含量测定简易法和农业部标准方法的对比方法农业部标准方法(HY147-88)简易法称样过60目筛的样品IOOmg,精确至0. Img,故入IOOml容重瓶中试剤—lml 95%乙醇分散样品后，加入9ml(JM)HaOH 处理 .轻轻晃匀后，沸水浴中消煮IOmm,1取出冷却至室溫，定容至IOOml 1 移液■取5ml入IOOml容簠瓶中染色加入约50ml蒸溜水，1喊1._酸，1.5ml I2-KL 定容至 IOOrnl 吸光度涯匀，静置20mm后《(tarn波长处读取吸光度’计算直链淀扮含量过100目筛的样品50mg 精确至 O.lmg,故入50ml容重瓶中 0.5ml 95%乙醇分散样品后，加λ 4.5mlC 聊 NaOH轻轻Λ匀后，塞好塞子，静置Ι ι以上，! 定容至50ml丨吸取0.5ml入20ml试管中加5ml蒸_水，0.ImlC丨歸醒酸，0.2ml I2-KL 4.2ml蒸溜水，总体积为IOmI 涯匀，静置20mm后Wtom波长处读取吸光度，计算直链淀粉含量
图1为农业部标准方法和本发明测得21个样品直链淀粉含量的相关性分析； 图2为农业部标准方法和本发明测得的4个标准样品吸光度值的线性回归关系。
具体实施方式
以下结合说明书附图及试验例对本发明作进一步的说明，本发明一种简易测定直链淀粉含量的方法简称简易法。
试验例1选取21个直链淀粉含量呈梯度分布的样品(3. 4%-27. 0%)经除糙、磨精并制成米粉后，分别60目筛和100目筛后，置于密封袋中室温保存备用。4个稻米标准样品由农业部稻米及制品质量监督检验测试中心提供，含量分别为1. 5%、10· 4%、16· 2%和26. 5%，分别过60目和100目筛后同21个样品一起室温存放。
分别称取过60目筛的样品和标准样品lOOmg，分别加入Iml浓度为95%的乙醇分散样品后，加入9ml浓度为IM的NaOH溶液，轻轻摇勻后，放入沸水浴中消煮lOmin，取出冷却至室温后定容至IOOml ；从容量瓶中移取出5ml液体至另外干净的IOOml容量瓶中，依次向容量瓶中加入50ml水、Iml醋酸、1.5ml的碘-碘化钾溶液(0.2g I2加2g KI蒸馏水溶解后，定容至100ml，现用现配)，定容至100ml，摇勻后静置20min，分光光度计620nm波长处读取吸光度值，根据标准样品的吸光度值和已知的直链淀粉含量计算出样品的直链淀粉含量。
分别称取过100目筛的样品和标准样品50mg，分别放入50ml容量瓶中，分别加入0.5ml浓度为95%的乙醇分散样品后，加入4. 5ml浓度为IM的NaOH溶液，轻轻摇勻后，塞好容量瓶塞子，室温下静置16h以上，定容至50ml ；从容量瓶中移取出0. 5ml液体至干净的 20ml试管中，向试管中加入5ml蒸馏水混勻，然后依次加入0. Iml浓度为IM的醋酸、0. 2ml 的碘-碘化钾溶液(0.2g 12加28 KI蒸馏水溶解后，定容至100ml，现用现配)、4.2ml蒸馏水，摇勻后静置20min，分光光度计620nm波长处读取吸光度值，根据标准样品的吸光度值和已知的直链淀粉含量，绘制标准曲线，然后对应标准曲线，计算出待测样品的直链淀粉含量。
结果表明，两种方法测得的直链淀粉含量呈高度正相关，r2=0. 9908，达极显著水平，如图1所示，两种方法测得的直链淀粉含量最大绝对误差小于1. 1。
实施例1称取过60目筛的标准样品lOOmg，加入Iml 95%的乙醇分散样品后，加入9ml (IM)NaOH 溶液，轻轻摇勻后，放入沸水浴中消煮lOmin，取出冷却至室温后定容至IOOml ；从容量瓶中移取出5ml液体至另外干净的IOOml容量瓶中，依次向容量瓶中加入50ml水、Iml醋酸、1.5ml的碘-碘化钾溶液，定容至100ml，摇勻后静置20min，分光光度计620nm波长处读取吸光度值。
称取过100目筛的标准样品50mg，加入0. 5ml浓度为95%的乙醇分散样品后，加入 4. 5ml浓度为IM的NaOH溶液，轻轻摇勻后，塞好容量瓶塞子，室温下静置16h以上，定容至 50ml ；从容量瓶中移取出0. 5ml液体至干净的20ml试管中，先在试管中加入5ml水混勻，然后依次加入向0. Iml浓度为IM的醋酸、0. 2ml的碘-碘化钾溶液(0. 2g I2加2g KI蒸馏水溶解后，定容至100ml，现用现配)和4. 2ml蒸馏水，摇勻后静置20min，分光光度计620nm波长处读取吸光度值。
结果表明，两种方法测得的标准样品的吸光度值成高度正相关，r2=0. 9997，如图2 所示，并且静置16h以上的样品的吸光度值要高于沸水浴中消煮IOmin的吸光度值。
实施例2称取过100目筛的样品和标准样品50mg，所有样品准备2组，加入0. 5ml浓度为95%的乙醇分散样品后，加入4. 5ml浓度为IM的NaOH溶液，轻轻摇勻后，塞好容量瓶塞子，室温下静置，中间每隔0. 5h观察样品在碱液中的消化情况，若低于16h，则部分高直链淀粉含量的样品在容量瓶底部仍然存有颗粒状样品，静置16h (包含16h)以上，则样品完全透明，此时将其中一组的容量瓶定容至50ml，另一组继续静置至第120h时定容；从定容过的容量瓶中移取出0. 5ml液体至20ml的干净试管中，依次向试管中加入5ml蒸馏水、0. Iml醋酸、0. 2ml 的碘-碘化钾溶液和4. 2ml蒸馏水，摇勻后静置20min，分光光度计620nm波长处读取吸光度值。
结果表明，静置120h的样品直链淀粉含量的测定值较静置16h的基本都减小了， 只有1个样品由原来的3. 4%增加为3. 8%，但总体来说，直链淀粉含量的测定值变化不大(如表2)，最大差值为1. 1%，符合育种工作者筛选材料的实验误差要求。由此可以说明，对于大批量样品测定来说，如果在1天内不能完成，样品塞好塞子在室温下放置，只要测定时配套相应标准样品，即待测样品和标准样品在室温下放置时间一致，2-3天后仍然可以用于测定。
表2简易法静置16小时与静置5天测得直链淀粉含量的比较
权利要求
1.一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于包括以下工艺步骤1)按直链淀粉的标准测定方法，称取直链淀粉含量呈梯度分布的稻米标准样品和待测样品；2)稻米标准样品和待测样品中分别加入乙醇溶液进行分散处理，分散处理后加入氢氧化钠溶液混勻，然后在室温下静置；3)静置完成后，对步骤2)的样品溶液进行定容；4)取步骤3)得到的定容溶液，再加入醋酸、I2-KI溶液和蒸馏水，混勻，静置；5 )静置后，用分光在620nm波长处读取吸光度值；6)根据标准样品的吸光度值和已知的直链淀粉含量，绘制标准曲线，然后对应标准曲线，计算出待测样品的直链淀粉含量。
2.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤1)中取过100目筛的稻米标准样品50mg和过100目筛的待测样品50mg。
3.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤2)中稻米标准样品和待测样品中分别加入浓度为95%的乙醇0. 5ml进行分散处理，分散处理后加入浓度为IM的氢氧化钠溶液4. 5ml混勻。
4.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤2)中室温下静置16小时以上。
5.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤3)中将样品溶液定容至50ml。
6.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤4)中吸取0. 5ml定容液体，加入5ml蒸馏水混勻，然后依次加入浓度为IM的醋酸0. 1ml、 I2-KI溶液0. 2ml及蒸馏水4. 2ml。
7.如权利要求1所述的一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，其特征在于所述的步骤4)中静置20分钟。
全文摘要
一种简易测定稻米直链淀粉含量的方法，属于稻米品质测定方法技术领域。其包括以下步骤1)称取稻米标准样品和待测样品；2)稻米标准样品和待测样品中分别加入乙醇溶液进行分散处理，分散处理后加入氢氧化钠溶液混匀，然后在室温下静置；3)样品溶液进行定容；4)定容溶液再加入醋酸、I2-KI溶液和蒸馏水；5)用分光在620nm波长处读取吸光度值；6)根据标准样品的吸光度值和已知的直链淀粉含量，绘制标准曲线，然后对应标准曲线，计算出待测样品的直链淀粉含量。本发明操作简便，成本低廉，相对快速。
文档编号G01N21/31GK102507479SQ20111036525
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者唐绍清, 焦桂爱, 罗炬, 胡培松, 谢黎虹, 邵高能, 魏祥进 申请人:中国水稻研究所