专利名称：一种藏药组合物六味明目制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种藏药组合物制剂的质量检测方法，特别涉及一种藏药组合物六味明目制剂的质量检测方法。
背景技术：
目前，由于生活环境、工作压力、饮食习惯的变化，使众多眼病呈高发状态。国际互联网的普及，不正确的用眼习惯，使视疲劳人群越来越壮大，年增长率达到了 25%。藏医认为眼病的发生在于赤巴亢(肝火上炎)伤及能视赤巴功能和司理传递形体光亮的维命隆功能失调紊乱所致。依据这一理论，由西北高原生物研究所、青海藏医药研究所、金诃藏药等单
位发起，结合传统工艺和现代科技，研制出了治疗白内障、玻璃体混浊、慢性结膜炎及角膜炎等的六味明目丸。六味明目丸收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号WS-10787 (ZD-0787)-2002o六味明目丸是由铁粉(制)、小檗皮、葛缕子、诃子、毛诃子、余甘子等6味药组成的，主治白内障、青光眼、糖尿病性眼底病、黄斑变性、慢性结膜炎、角膜炎、干眼症等眼科类疾病，效果明显。藏医认为，具有调节查赤，清热消朦，养肝明目的功效，用于查赤引起的目赤羞明、迎风流泪、视物模糊。中医认为，清热泻火，平肝明目的功效，用于肝火上炎所致的目赤肿痛、羞明流泪、视物不清。铁粉为六味明目丸配方中君药。《开宝本草》记载铁粉具有安心神，坚骨髓，润肌肤等作用。铁为人体的微量元素，具有促进红细胞生成等重要作用。藏药组合物六味明目丸及其制剂配方中所用铁粉是通过炮制后进行入药，更加有利于吸收。但是铁摄入过多可能造成急性铁中毒，严重者可能造成休克，甚至于死亡。因此为了保证患者的安全用药，应该对铁的含量进行控制，在能达到治疗疾病的同时，不造成其他健康隐患。六味明目丸原标准只有盐酸小檗碱鉴别、盐酸小檗碱含量测定项，没有方中君药铁粉中铁含量测定项，且未对方中诃子、毛诃子、余甘子含有的大量没食子酸进行含量测定，从而不能保证该制剂的安全、有效。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种藏药组合物六味明目制剂的质量检测方法。本发明提供了一种藏药组合物六味明目制剂中铁粉中铁含量的控制方法，没食子酸的含量测定方法，保证铁含量不过量，使得该制剂在有效治疗疾病的同时，确保用药的安全性。铁粉(制)是藏药的常规技术用语，括号中的“制”是按照《青海省藏药炮制规范》(青海省食品药品监督管理局编，青海人民出版社出版的2010年版)里的方法炮制。术语说明六味明目制剂(或叫“六味明目丸及其制剂”)包括六味明目丸及用六味明目丸原料药配方制备的其他制剂，如六味明目颗粒、六味明目胶囊、六味明目片等，各制剂的原料药的配比可以与六味明目丸相同，也可以根据治疗需要进行适当的调整。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种藏药组合物六味明目制剂的质量检测方法，该制剂为由铁粉(制)、小檗皮、葛缕子、诃子、毛诃子、余甘子按药剂学常规方法制成的各种制剂，质量检测方法包括对制剂中铁粉的含量测定方法和/或没食子酸的含量测定方法。本发明对六味明目制剂中铁粉的含量测定作出贡献，其铁粉的含量测定方法是，将待测定制剂灰化后，用浓盐酸溶解，加入甲基橙指示液，滴加二氯化锡溶液将Fe3+还原为 Fe2+，溶液变为淡红色，然后以二苯胺磺酸钠为指示剂，用重铬酸钾标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，以已知的重铬酸钾标准溶液的量计算铁粉的含量。进一步地，所述铁粉的含量测定方法具体步骤为取六味明目丸制剂粉末适量，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温。滴加f5ml硫酸适量，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于50(T700°C炽灼3飞小时，放冷，用50ml浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在6(T70°C左右加热溶解3飞小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量25ml，置250ml锥形瓶中，加入8ml浓盐酸溶液，加热至近沸腾，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加质量份数比5% 二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，则补加I滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液2 10ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液滴定。所述硫磷混酸溶液的制备方法是将150ml体积百分浓度95°/Γ98%浓硫酸在搅拌下缓慢注入500ml水中，冷却后再加入150ml磷酸，用水稀释至1000ml，混匀，即得。本发明对六味明目制剂中没食子酸的含量测定的提供的技术方案是所述没食子酸的含量测定方法是，取没食子酸对照品加入体积份数比50%甲醇水溶液配制成对照品溶液，取待检测制剂加入体积份数比50%甲醇水溶液配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2 6:98 94的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为27(T280nm的高效液相色谱法。进一步地，所述没食子酸的含量测定具体是照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2 6:98 94的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为27(T280nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加体积份数比50%甲醇水溶液制成每Iml含O. Img的溶液，即得；供试品溶液的制备取待检测制剂粉末O. 5^1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比50%甲醇水溶液2(T30ml，密塞，称定重量，超声20 40分钟，放冷，用体积份数比50%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5 10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明优选下面原料药组成的六味明目制剂铁粉(制)132. O重量份、小檗皮132. O重量份、葛缕子132. O重量份、诃子66. 5重量份、毛诃子66. 5重量份、余甘子66. 5重量份。对于上述优选的制剂，质量检测方法是A.铁粉的含量测定取六味明目丸粉末适量，精密称定，将盛有样品的 坩埚置电炉上缓缓炽烧(避免燃烧、膨胀、溢出)，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温。滴加Iml硫酸适量，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600°C炽灼4小时，放冷，用50ml浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65°C左右加热溶解4小时(不时摇动，避免沸腾)，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，力口水稀释至刻度，摇匀，精密量25ml，置250ml锥形瓶中，加入8ml浓盐酸溶液，加热至近沸腾，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加质量份数比5% 二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加I滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液滴定。B.没食子酸的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比4:96的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ；对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加体积份数比50%甲醇水溶液制成每Iml含O. Img的溶液，即得；供试品溶液的制备取藏药组合物六味明目丸粉末lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比50%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用体积份数比50%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。所述铁粉的含量测定项目中铁含量为13. 2mg/g^22. lmg/g ;所述没食子酸的含量测定项目中没食子酸含量(C7H6O5)不得少于I. 83mg/g。所述的制剂是指取藏药组合物六味明目丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。本品没食子酸含量(C7H6O5)不得少于I. 83mg/g。本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/1。本发明第一次对藏药组合物六味明目丸中铁的含量进行了检测，使用操作简便、快速准确的无汞重铬酸钾滴定法对藏药组合物六味明目丸中的铁进行了含量检测，采用高效液相色谱法对藏药组合物六味明目丸中有效成分没食子酸进行了定量测定。本发明方法能够保证藏药组合物六味明目丸的质量，确保该制剂安全、有效、稳定、质量可控。同时本法还可用于六味明目丸的其他制剂，如六味明目颗粒、六味明目胶囊、六味明目片等。为进一步验证本发明的有益效果，本发明提供下述实验例。
实验例I :铁的含量测定实验I.仪器、试药和供试样品仪器ΒΤ12 赛多利斯电子分析天平(德国赛多利斯sartorius公司)；2· 5-10型箱式电阻炉(北京市永光明医疗器械厂);HH-4数显恒温水浴锅(常州荣冠实验分析仪器厂)。主要试剂5% 二氯化锡溶液(称取二氯化锡溶于40ml浓盐酸，加水稀释至100ml。临用前用水稀释一倍，即得)；甲基橙指示液(取甲基橙O. Ig溶于IOOml水中，即得);二苯胺磺酸钠指示液(取二苯胺磺酸钠O. 2g溶于IOOml水中，即得);硫磷混酸溶液(将150ml浓硫酸在搅拌下缓慢注入500ml水中，冷却后再加入150ml磷酸，用水稀释至1000ml，混匀，即得)。重铬酸钾标准溶液(基准试剂于15(Tl60°C干燥2小时，存于干燥器中，准确称取O. 0980g重铬酸钾于250ml烧杯中，加适量水溶解后定量转入IOOOml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，其浓度为O. 002mol/l)。样品六味明目丸(青海金诃藏药药业股份有限公司提供)，批号分别为20100201,20100202,20100203ο 2.样品的灰化将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧(避免燃烧、膨胀、溢出)，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温。滴加硫酸适量，使炭化物全部湿润，以O. 5ml至2ml为优，其中Iml为最优。继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于50(T70(TC炽灼3飞小时。其中以600°C炽灼4小时为最优。炭化目的在于除去藏药制剂中其他药味的干扰，同时使铁转化为Fe3+，便于测定。3.盐酸浓度的选择反应在盐酸(HCl)介质中进行，还原Fe3+时盐酸(HCl)浓度以4mol/l为好，大于6mol/l时Sn2+则先还原甲基橙为无色，使其无法指示Fe3+的还原，同时Cl_浓度过高也可能消耗K2Cr2O7, HCl浓度低于2mol/l则甲基橙褪色缓慢。4.溶样温度的选择溶样温度对铁含量的测定结果有较大影响。溶样温度低于55°C时，溶样缓慢；超过75V HCl挥发太快，浓度降低，溶样不完全。实验表明溶样温度控制在65°C左右效果最佳。5.氧化还原温度的控制在用二氯化锡还原时，温度应控制在70 80°C，并不断摇动。而在最后的氧化滴定中，溶液温度应控制在20 30°C为好，以使反应能较快进行。6.硫磷混酸溶液的选择滴定过程中生成的Fe3+呈黄色，影响终点的观察，若在溶液中加入磷酸(H3PO4),H3PO4与Fe3+生成无色的Fe(HP04)2_，可掩蔽Fe3+。同时由于Fe(HP04)2_的生成，使得Fe3+/Fe2+电对的条件电位降低，滴定突跃增大，指示剂可在突跃范围内变色，从而减少滴定误差。7.原理本品试样经样品灰化、盐酸溶解后，其中的铁转化为Fe3+。在强酸性条件下，Fe3+可通过SnCl2还原为Fe2+。Sn2+将Fe3+还原完毕后，甲基橙也可被Sn2+还原成氢化甲基橙而褪色，因而甲基橙可指示Fe3+还原终点。Sn2+还能继续使氢化甲基橙还原成N，N- 二甲基对苯二胺和对氨基苯磺酸钠。其反应式为
(CH3) 2NC6H4N=NC6H4S03Na+2e+2H+ — (CH3) 2NC6H4NH-NHC6H4S03Na(CH3) 2NC6H4NH-NHC6H4S03Na + 2e_ + 2H+ — (CH3) 2NC6H4NH2+NH2C6H4S03Na这样一来，略为过量的Sn2+也被消除。由于上述反应是不可逆的，因此甲基橙的还原产物不消耗K2Cr207。反应完后，以二苯胺磺酸钠为指示剂，用K2Cr2O7标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，主要反应式如下2FeCl4_+SnCl2_+2Cr=2FeCl42_+SnCl62_6Fe2++Cr2072>14H+=6Fe3++2Cr3++7H208.样品中铁的含量测定取六味明目丸粉末O. 5g，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧(避免燃烧、膨胀、溢出)，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温。滴加Iml硫酸适 量，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600°C炽灼4小时，放冷，用50ml浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65°C左右加热溶解4小时(不时摇动，避免沸腾)，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，力口水稀释至刻度，摇匀，精密量25ml，置250ml锥形瓶中，加入8ml浓盐酸溶液，加热至近沸腾，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加质量份数比5% 二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加I滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液(O. 002mol/l)滴定。每Iml重铬酸钾滴定液(O. 002mol/l)相当于O. 6702mg的铁。结果见表I。表I六味明目丸中铁含量测定结果
权利要求
1.一种六味明目制剂的质量检测方法，该制剂为由铁粉(制)、小檗皮、葛缕子、诃子、毛诃子、余甘子按药剂学常规方法制成的各种制剂，其特征是，质量检测方法包括对制剂中铁粉的含量测定方法和/或没食子酸的含量测定方法。
2.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述铁粉的含量测定方法是，将待测定制剂灰化后，用浓盐酸溶解，加入甲基橙指示液，滴加二氯化锡溶液将Fe3+还原为Fe2+，溶液变为淡红色，然后以二苯胺磺酸钠为指示剂，用重铬酸钾标准溶液滴定至溶液呈紫色即为终点，以已知的重铬酸钾标准溶液的量计算铁粉的含量。
3.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征是，所述铁粉的含量测定方法具体步骤为取六味明目丸制剂粉末适量，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加I飞ml硫酸适量，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于50(T70(TC炽灼3飞小时，放冷，用50ml浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在6(T70°C左右加热溶解3飞小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量25ml，置250ml锥形瓶中，加入8ml浓盐酸溶液，加热至近沸腾，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加质量份数比5% 二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，则补加I滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液2 10ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液滴定。
4.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征是，所述硫磷混酸溶液的制备方法是将150ml体积百分浓度95°/Γ98%浓硫酸在搅拌下缓慢注入500ml水中，冷却后再加入150ml磷酸，用水稀释至1000ml，混匀，即得。
5.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述没食子酸的含量测定方法是，取没食子酸对照品加入体积份数比50%甲醇水溶液配制成对照品溶液，取待检测制剂加入体积份数比50%甲醇水溶液配制成供试品溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2 6:98 94的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为27(T280nm的高效液相色谱法。
6.如权利要求5所述的质量检测方法，其特征是，具体是 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比2 6:98 94的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为27(T280nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加体积份数比50%甲醇水溶液制成每Iml含O. Img的溶液，即得； 供试品溶液的制备取待检测制剂粉末O. 5^1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比50%甲醇水溶液2(T30ml，密塞，称定重量，超声20 40分钟，放冷，用体积份数比50%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5 10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
7.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂的原料药组成为铁粉(制)132. O重量份、小檗皮132. O重量份、葛缕子132. O重量份、诃子66. 5重量份、毛诃子66. 5重量份、余甘子66. 5重量份。
8.如权利要求7所述的质量检测方法，其特征是，所述质量检测方法是 A.铁粉的含量测定 取待检测制剂粉末适量，精密称定，将盛有样品的坩埚置电炉上缓缓炽烧，炽灼至供试品全部炭化，呈黑色，并不再冒烟，放冷至室温；滴加Iml硫酸适量，使炭化物全部湿润，继续加热至蒸汽除尽，白烟冒尽，于600°C炽灼4小时，放冷，用50ml浓盐酸分次洗涤移至250ml具塞锥形瓶中，在65°C左右加热溶解4小时，冷却后将溶液移至250ml容量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量25ml，置250ml锥形瓶中，加入8ml浓盐酸溶液，加热至近沸腾，加入6滴甲基橙指示液后，趁热边摇边滴加质量份数比5% 二氯化锡溶液至溶液变为淡粉色，若摇动后粉色褪去，可补加I滴甲基橙至溶液呈现稳定的淡粉色，迅速用冷水冷却至室温后，加入蒸馏水50ml，硫磷混酸溶液4ml，二苯胺磺酸钠指示液15滴，立即用重铬酸钾滴定液滴定； B.没食子酸的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比4:96的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为275nm ;理论板数按没食子酸峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量，精密称定，加体积份数比50%甲醇水溶液制成每Iml含O. Img的溶液，即得； 供试品溶液的制备取藏药组合物六味明目丸粉末lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比50%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，用体积份数比50%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
9.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，如权利要求8所述的质量检测方法，其特征是，所述铁粉的含量测定项目中铁含量为13. 2mg/g 22. lmg/g ;所述没食子酸的含量测定项目中没食子酸含量不得少于I. 83mg/g。
10.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述的制剂是指取藏药组合物六味明目丸原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。
全文摘要
本发明公开了一种藏药组合物六味明目丸制剂的质量检测方法，该制剂为由铁粉(制)、小檗皮、葛缕子、诃子、毛诃子、余甘子按药剂学常规方法制成的各种制剂，质量检测方法包括对制剂中铁粉的含量测定方法和/或没食子酸的含量测定方法。本发明第一次对藏药组合物六味明目丸中铁的含量进行了检测，使用操作简便、快速准确的无汞重铬酸钾滴定法对藏药组合物六味明目丸中的铁进行了含量检测，采用高效液相色谱法对藏药组合物六味明目丸中有效成分没食子酸进行了定量测定。本发明方法在原标准的基础上，增加了铁的含量检测方法、没食子酸的含量测定方法，能够保证藏药组合物六味明目丸的质量，确保该制剂安全、有效、稳定、质量可控。
文档编号G01N30/02GK102841095SQ20121036759
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者常建晖, 王振, 郑亭亭, 赵丽丽, 魏永义 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司