专利名称：一种胆红素的检测方法及检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种胆红素的检测方法，具体地说是一种酶速率法人血清胆红素的检测方法及检测试剂盒，用于体外定量测定人血清、血浆中的胆红素的浓度，属于医用临床生化诊断试剂领域。
背景技术：
胆红素是由四个吡咯环通过分子中央的2-次甲基桥相连而成的复杂线形有机化合物，是血红素的代谢产物。在血液中，胆红素的存在有结合胆红素和非结合胆红素两种形式，结合胆红素的吸收峰为422nm，非结合胆红素的吸收峰为459nm。正常生理条件下结合胆红素为与白蛋白形成非共价的可逆结合，但在部分肝脏病人血液中胆红素与白蛋白以共价键结合形成吸收峰为433nm的中间物质。总胆红素是结合(直接)胆红素与非结合(间接)胆红素的总和，血清总胆红素的测定在临床上有着重要的意义，主要在肝脏代谢，是一项重要的常规肝功能测定指标。总胆红素增加，通常是由于胆道阻塞、肝炎、肝硬化、肝衰竭、溶血性综合症和某些遗传性酶缺乏。间接胆红素增加常见于肝前或肝内原因，如溶血性综合症，导致胆红素摄取、运输或结合缺损的肝脏疾病。胆红素的生理性降低见于孕妇。血清总胆红素的降低与冠心病危险增加相关。胆红素监测对于新生儿，尤其是早产儿极为重要。此时肝细胞内胆红素代谢常常不成熟，由于非结合胆红素上升而引起的黄疸是很常见的。非结合胆红素如未能与白蛋白结合，则极易通过血脑屏障，增加脑损伤的危险。目前临床常用测定胆红素的方法有重氮试剂法、化学氧化法、胆红素氧化酶终点法等。重氮试剂法应用最早，但线性较低，质量不好控制，结果差异大；化学氧化法近年发展比较迅速，但也易受干扰，结果常出现负值；酶法测定是最先进的方法，线性高，近几年备受业界推崇，但目前使用的胆红素氧化酶终点法计算公式繁琐，反应时间长，也易受血清本底干扰，只在高端市场有使用，没有大面积推广使用。以上方法应用都比较广泛，均为终点法测定，有一个共同的缺点就是易受血清本底干扰，大大影响了结果的准确性。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种酶速率法人血清胆红素的检测方法及检测试剂盒，用于体外定量测定人血清、血浆中的胆红素的浓度，克服了现有检测方法易受血清本底干扰的缺陷，本发明检测方法以酶催化氧化法，使用速率测定法，完全排除了血清本底的干扰，缩短了反应时间，操作简便，结果准确可靠，适用于各种生化分析仪器。为解决以上问题，本发明采用的技术方案是一种胆红素的检测方法，其特征在于所述检测方法为采用速率测定法，根据在波长440 465nm处，反应体系吸光度的降低速率与样本中胆红素的浓度成正比，延迟30 60秒后，测定30 180秒内的吸光度下降速率，得到胆红素的含量；
权利要求
1.一种胆红素的检测方法，其特征在于所述检测方法为采用酶速率測定法，根据在波长440 465nm处，反应体系吸光度的降低速率与样本中胆红素的浓度成正比，延迟30 60秒后，測定30 180秒内的吸光度下降速率，得到胆红素的含量。
2.如权利要求1所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在于所述吸光度下降速率测定步骤首先根据测定取所需要的样本管、空白管及标准管，分别加入缓冲液；然后在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，混匀，37°C条件下保温3 10分钟，再加入酶试剂，混匀，得到反应液； 或先将缓冲液和酶试剂配成试剂工作液，稳定3 10分钟；然后根据测定取所需要的样本管、空白管及标准管，分别加入试剂工作液；再分别在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸懼水及标准液，得到反应液； 反应液在37°C条件下反应，延迟30 60秒后，在波长440 465nm处读取反应液的吸光度变化，读数间隔时间为30 180秒，计算平均每分钟吸光度变化率AA/分钟，得到空白管、标准管及样本管内反应液的姆分钟吸光度变化率AA/分钟。
3.如权利要求2所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在于所述
4.如权利要求2所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在于所述缓冲液与酶试剂的体积比为20:1 3:1 ;缓冲液、酶试剂之和与样本的体积比为20:1 10:1。
5.如权利要求2所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在干所述缓冲液为含有4mmol/L胆酸钠和15mmol/L的SDS的0.1mo I/L的Tris-HCl缓冲液；或缓冲液为含有1.86g/L的EDTA-Na2的0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液。
6.如权利要求2所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在于所述酶试剂为胆红素氧化酶溶液，浓度为I 20U/ml。
7.如权利要求2所述的ー种胆红素的检测方法，其特征在于所述标准液为游离胆红素溶液或者牛磺酸结合胆红素溶液，浓度为5 40 y mol/L。
8.一种实现如权利要求1-7其中之一所述胆红素检测方法的检测试剂盒，其特征在于所述检测试剂盒包括包装盒、缓冲液、酶试剂、标准液； 所述缓冲液为含有4mmol/L胆酸钠和15mmol/L的SDS的0. lmol/L的Tris-HCl缓冲液，或者为有1. 86g/L的EDTA-Na2的0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液； 所述酶试剂为胆红素氧化酶溶液，浓度为I 20U/ml ； 所述标准液为游离胆红素溶液或者牛磺酸结合胆红素溶液，浓度为5 40 y mol/L。
全文摘要
一种胆红素的检测方法，采用速率测定法，根据在波长440～465nm处，反应体系吸光度的降低速率与样本中胆红素的浓度成正比，延迟30～60秒后，测定30～180秒内的吸光度下降速率，得到胆红素的含量。本发明使用酶速率测定法，测定的是反应的速率，在反应过程中的线性期进行读数，可完全排除血清样品本底的干扰，提高了结果的准确度；延迟时间短，读数时间也很短，使整个反应时间大大缩短，提高了效率；无需考虑血清样品本底的去除，操作简便，仪器参数设置也很简单，无需复杂的计算公式；可以使用双试剂模式进行测定，也可以使用单试剂模式进行测定，适用于各种自动、半自动生化分析仪器及分光光度计，适用范围广。
文档编号G01N21/31GK103048282SQ201210414469
公开日2013年4月17日 申请日期2012年10月26日 优先权日2012年10月26日
发明者孙希武, 秦英, 王永庆, 吐尔洪·买买提 申请人:潍坊鑫泽生物科技有限公司