地沟油中脂肪醛的测定方法
地沟油中脂肪醛的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种地沟油中脂肪醛的测定方法。本发明利用废旧油脂中含有大量脂肪醛类物质的特异性，将其前处理后与2，4-二硝基苯肼进行衍生，反应生成不同2，4-二硝基苯腙后，利用高效液相色谱法进行检测，实现对废旧油脂(地沟油)中醛类物质的测定，同时对市售的食用油实际样品中是否掺有地沟油进行高效、简洁、灵敏的判断。
【专利说明】 地沟油中脂肪醛的测定方法
[0001]【技术领域】
本发明涉及应用一种高效液相色谱法针对废旧油脂(地沟油)中脂肪醛的检测技术，属于食品安全【技术领域】。
[0002]【背景技术】
醛类化合物来源广泛，对环境、人体健康有相当危害。目前，国内外对于痕量甲醛、乙醛等脂肪醛类污染物的检测研究，大多集中在大气、水和室内环境，主要采用的方法有分光光度法或比色法。对于食品中醛类物质检测的研究报道很少，《食品卫生法》和食品添加剂管理办法规定，食品在加工过程中不准添加醛类物质，但一些不法制售单位和个体，为了防腐，在某些产品的加工制作过程中加入一些醛类物质，更有甚者将一些废旧油脂简单加工使其重返市场，此类油脂中含有大量脂肪醛类物质，对人体健康造成极大危害。
[0003]地沟油作为废旧油脂的一种，其检测方法的研究目前备受关注。地沟油也称泔水油或潲水油，是地沟中经过隔油器收集，然后加入硫酸，加热脱水、脱渣、脱色产生的油脂。在捞取、加工、储运过程中会生成一系列挥发性物质，在不饱和碳碳键处发生一系列氧化、断裂等复杂的化学反应，同时在酯键处也发生水解、氧化、缩合等一系列反应，从而生成大量的醛类有害物质。然而地沟油从外观上很难与合格食用油区别，导致执法者缺少相关的执法依据而很难对问题餐馆做出惩罚，使得地沟油市场日渐庞大。因此，为了给食用植物油的市场监管提供技术支持，近年来有关地沟油和掺假食用植物油鉴定方法的研究不少。有通过光谱测定法进行检测鉴别花生油是否掺兑了潲水油的(分析试验室，2006，25 (3):92- 94);还有通过理化指标进行鉴定，(中国食品卫生，2004，16 (5): 450-451);也有通过外源性物质进行判断，检测油脂中的胆固醇(中国油脂，2006，31 (5): 65-67)。对于地沟油的鉴定也有相关专利报道，中国专利(200810167263.6) 一种检验合格食用油中是否掺有地沟油的方法,利用地沟油电导率的增加鉴定地沟油；中国专利(201010206141.0)脱色潲水油(地沟油)的快速鉴定方法，通过对油样品中的氯离子的测定判断食用油是否添加潲水油；还有利用实时荧光定量PCR扩增手段检测地沟油的专利(201010225657.X)。这些专利方法虽然能鉴定地沟油，但是有的方法操作繁琐，干扰因素多，过程较复杂，而且潲水油鉴别检测的特异指标均不明确。
[0004]
【发明内容】
本发明的目的旨在提供一种地沟油中脂肪醛的测定方法。
[0005]本发明通过如下措施来实现:
本发明利用废旧油脂中存在特异性小分子脂肪醛的特点，根据醛类化合物与2，4_ 二硝基苯肼(DNPH)在酸性介质中发生具有高度特异化学反应生成衍生物腙的特性，在高效液相色谱仪上完成废旧油脂中醛类化合物的检测、分析，不仅可以有效的实现地沟油的鉴另Ij，而且为食用油的质量安全提供技术支持。
[0006]本发明提供的食用油供试品均自超市购买特级初榨橄榄油、鲁花压榨一级花生油、金龙鱼一级大豆油、家庆二级胡麻油、江河源三级菜籽油、江河源四级菜籽油、三福四级菜籽油、山丹香四级菜籽油、鲁花葵花油、西王玉米胚芽油、普通棉籽油为测定对照品；地沟油是从市场回收后进行精炼处理后用于实验；勾兑油是从市场买的掺有地沟油的廉价油。通过对供试油用硅胶柱进行前处理，正己烷纯化洗脱，将疏水性物质祛除，再加入乙醇洗脱亲水性的物质后，将洗脱液浓缩富集后采用高效液相色谱方法定量测定，考察实际样品中相应醛的含量。本发明提供的高效液相色谱方法以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，用紫外检测器进行检测。
[0007]本发明利用高效液相色谱技术对潲水油中有害醛类物质的分离测定，实现食品安全预警，其特征在于该方法包括以下步骤:
1.样品预处理
1.)将收集地沟油精炼，其它油样直接使用；
2.)样品洗脱用硅胶柱:供试油样品正己烷溶解后上硅胶柱；
3.)选用分段洗脱方法:经过大量洗脱方式的选择，采用不同溶剂进行分段洗脱；
采用此方法可以将油样中的脂肪醛类物质进行富集；
2.2,4 - 二硝基苯肼衍生液的配置:
将3 ml浓硫酸加入盛有0.5 g 2,4 -二硝基苯肼的锥形瓶中，温热时加15 ml无水乙醇混匀；
3.醛和2，4-二硝基苯肼反应:
2，4-二硝基苯肼可以和醛类物质反应生成相应的腙，通过油的乙醇洗脱液中加入2，4- 二硝基苯肼后生成2，4_ 二硝基苯腙的含量确定出不同样品中醛的含量；
4.样品配置:
将正己烷/乙酸乙酯洗脱液旋蒸回收后取样；将无水乙醇洗脱液旋蒸回收后取样。液相色谱实验的空白样是将洗脱油样用溶剂溶解稀释后进样，实际样是在空白样中加入过量2，4-二硝基苯肼衍生液后的样品；
5.液相色谱测定
以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，以反相色谱模式进行分离分析，用紫外检测器进行检测。
[0008]本发明的测定方法适用于废旧油脂、精炼地沟油与掺假食用油的鉴别。
[0009]本发明所述的地沟油精炼中使用5%?20%Na0H。
[0010]本发明所述的地沟油精炼中使用5%?20%NaCl溶液。
[0011]本发明所述的地沟油精炼中使用MgSO4, Na2SO4, CaSO4, CaCl2中的一种。
[0012]本发明所述的地沟油精炼脱色使用活性白土、活性碳、硅藻土。
[0013]本发明所述的地沟油精炼脱色剂的使用量为样品量的5?10倍。
[0014]本发明所述的地沟油精炼脱色温度为50?100 V。
[0015]本发明所述的地沟精炼油脱色反应的时间为20?50分钟。
[0016]本发明所述的硅胶柱采用100?200目的硅胶。
[0017]本发明所述的2，4 - 二硝基苯肼衍生液与油样的反应时间是5?10分钟。
[0018]本发明所述的2，4 -二硝基苯肼衍生液与油样的反应温度是25 °C?60 °C。
[0019]本发明所述的样品洗脱溶剂为正己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇混合溶剂或甲醇、乙醇、乙腈溶剂；用量为样品上样量的5?20倍。
[0020]本发明所述样品进样时溶解稀释的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、二氯甲烷是中的一种或混合，用溶剂稀释倍数为广20倍。
[0021]本发明所述的液相色谱测定是在十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱(ODS)上进行分离的，色谱分离所用的流动相为甲醇、乙腈、/4~10%的醋酸或磷酸水溶液(75~90/25~10，V/V), pH 为 3.0-5.0，流动相的流速为 1.0 ml/min。
[0022]本发明所述的液相色谱测定是在紫外检测器上进行检测的，检测使用的波长为254~356 nm0
[0023]本发明利用废旧油脂中含有大量脂肪醛类物质的特异性，将其前处理后与2，4- 二硝基苯肼进行衍生，反应生成不同2，4_ 二硝基苯腙后，利用高效液相色谱法进行检测，实现对废旧油脂(地沟油)中醛类物质的测定，同时对市售的食用油实际样品中是否掺有地沟油进行高效、简洁、灵敏的判断。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1是甲、乙、丙、丁、戊、己醛标准品与2，4_ 二硝基苯肼发生衍生后生成不同2，4-二硝基苯腙的高效液相色谱图。其中:1.2，4_ 二硝基苯甲腙，2.2，4_ 二硝基苯乙腙，
3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己月示。
[0025]图2是精炼地沟油乙醇洗脱液加2，4- 二硝基苯肼的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4- 二硝基苯丁腙，5.2，4- 二硝基苯戊腙，6.2，4- 二硝基苯己腙。
[0026]图3是掺杂有50%地沟油的廉价勾兑油乙醇洗脱液加苯肼的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己腙。
[0027]图4是鲁花一级花生油乙醇洗脱加的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己腙。
[0028]【具体实施方式】
本发明将通过具体实施例进行详细的描述。
[0029]实施例1
样品预处理:在300 mL地沟油中加入500 mL10%Na0H，去除其皂类物质，再加入10%NaCl溶液除多余碱液并加速油皂分离，30 g活性白土加热70 °C脱色30分钟，然后过滤祛除活性白土，加10 g MgSO4脱水。取精制地沟油50 mL用80 mL正己烷溶解后上样于50 g处理好的硅胶柱。先用550 mL正己烷与乙酸乙酯的混合溶液(10:1，V/V)洗脱，除去疏水性物质，然后加入500 mL乙醇进行洗脱，分别将两部分洗脱液浓缩除去溶剂后储备待用。
[0030]样品制备:取正己烷与乙酸乙酯的混合(10:1，V/V)浓缩洗脱液I mL，加入无水乙醇1 mL，再加入二氯甲烷I mL，样品完全溶解稀释后作为空白样。取乙醇洗脱浓缩洗脱液1mL，加入无水乙醇lmL，再加入二氯甲烷I mL后加入过量2，4-二硝基苯肼0.5 mL作为实
际样。
[0031]液相色谱测定:用岛津色谱仪一套，包括LC-lOATvp色谱泵一台，2487多波长紫外检测器一台，7725i手动进样器一个。在ODS-A色谱柱(5 μ m, 250 X 4.6 mm ID)上进行高效液相色谱分离测定。流动相是甲醇/8%醋酸水溶液，配比为25/75 ( V/V)，pH为3.0，检测波长为356 nm,流速为1.0 ml/min,供试样品溶液均进样20 μ?进行分析。
[0032]由【专利附图】
【附图说明】中的色谱数据结果分析，该方法确实具有较好的准确度和可信度值，并且对设备要求不高，便于实施。
[0033]实施例2
取一级鲁花花生油50 mL用80 mL正己烧溶解后上样于50 g处理好的硅胶柱。先用55 OmL正己烷与乙酸乙酯的混合溶液(10: 1，V/V)洗脱，除去疏水性物质，然后加入500 mL乙醇进行洗脱，分别将两部分洗脱液浓缩除去溶剂后储备待用。
[0034]样品制备:取正己烷与乙酸乙酯的混合(10:1，V/V)浓缩洗脱液I mL，加入无水乙醇lmL，再加入二氯甲烷I mL，样品完全溶解稀释后作为空白样。取乙醇洗脱浓缩洗脱液ImL，加入无水乙醇I mL，再加入二氯甲烷I mL后加入过量2，4-二硝基苯肼0.5 mL作为实际样。
[0035]液相色谱测定:用岛津色谱仪一套，包括LC-lOATvp色谱泵一台，2487多波长紫外检测器一台，7725i手动进样器一个。在ODS-A色谱柱(5 μ m, 250 X 4.6 mm ID)上进行高效液相色谱分离测定。流动相是甲醇/8%醋酸水溶液，配比为25/75(V/V)，pH为3.0，检测波长为356 nm,流速为1.0 ml/min,供试样品溶液均进样20 μ?进行分析。
[0036]由【专利附图】
【附图说明】中的色谱数据结果分析，该方法确实具有较好的准确度和可信度值，并且对设备要求不高，便于实施。`
【权利要求】
1.一种地沟油中脂肪醛的测定方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 样品预处理 1.)将收集地沟油精炼，其它油样直接使用；
2.)样品洗脱用硅胶柱:供试油样品正己烷溶解后上硅胶柱；
3.)选用分段洗脱方法:经过大量洗脱方式的选择，采用不同溶剂进行分段洗脱； 采用此方法可以将油样中的脂肪醛类物质进行富集； 2,4 - 二硝基苯肼衍生液的配置: 将3 ml浓硫酸加入盛有0.5 g 2,4 -二硝基苯肼的锥形瓶中，温热时加15 ml无水乙醇混匀； 醛和2，4-二硝基苯肼反应: 2，4-二硝基苯肼可以和醛类物质反应生成相应的腙，通过油的乙醇洗脱液中加入2，4- 二硝基苯肼后生成2，4_ 二硝基苯腙的含量确定出不同样品中醛的含量； 样品配置: 将正己烷/乙酸乙酯洗脱液旋蒸回收后取样；将无水乙醇洗脱液旋蒸回收后取样；液相色谱实验的空白样是将洗脱油样用溶剂溶解稀释后进样，实际样是在空白样中加入过量2，4-二硝基苯肼衍生液后的样品； 液相色谱测定 以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，以反相色谱模式进行分离分析，用紫外检测器进行检测。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用5%~20%Na0H。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用5%~20%NaCl溶液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用MgSO4,Na2SO4, CaSO4, CaCl2中的一种。
5.如权利要求1述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色使用活性白土、活性碳、硅藻土。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色剂的使用量为样品量的5~10倍。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色温度为50~100°C。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟精炼油脱色反应的时间为20~50分钟。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于硅胶柱采用100~200目的硅胶。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于2，4-二硝基苯肼衍生液与油样的反应时间是5~10分钟。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于2，4-二硝基苯肼衍生液与油样的反应温度是 25 °C~60 °C。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于洗脱溶剂为正己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇混合溶剂或甲醇、乙醇、乙腈溶剂；用量为样品上样量的5~20倍。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于溶解稀释的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、二氯甲烷是中的一种或混合，用溶剂稀释倍数为广20倍。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于液相色谱测定是在十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱上进行分离的，色谱分离所用的流动相为甲醇、乙腈、/4~10%的醋酸或磷酸水溶液，pH为3.0-5.0,流动相的流速为1.0 ml/min。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于液相色谱测定是在紫外检测器上进行检测的，检测使用的波长为254~·356 nm。
【文档编号】G01N30/89GK103852551SQ201210498061
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年11月29日 优先权日:2012年11月29日
【发明者】董树清, 赵亮, 王利涛, 张志欣, 张霞, 郭勇 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所
【专利摘要】本发明公开了一种地沟油中脂肪醛的测定方法。本发明利用废旧油脂中含有大量脂肪醛类物质的特异性，将其前处理后与2，4-二硝基苯肼进行衍生，反应生成不同2，4-二硝基苯腙后，利用高效液相色谱法进行检测，实现对废旧油脂(地沟油)中醛类物质的测定，同时对市售的食用油实际样品中是否掺有地沟油进行高效、简洁、灵敏的判断。
【专利说明】 地沟油中脂肪醛的测定方法
[0001]【技术领域】
本发明涉及应用一种高效液相色谱法针对废旧油脂(地沟油)中脂肪醛的检测技术，属于食品安全【技术领域】。
[0002]【背景技术】
醛类化合物来源广泛，对环境、人体健康有相当危害。目前，国内外对于痕量甲醛、乙醛等脂肪醛类污染物的检测研究，大多集中在大气、水和室内环境，主要采用的方法有分光光度法或比色法。对于食品中醛类物质检测的研究报道很少，《食品卫生法》和食品添加剂管理办法规定，食品在加工过程中不准添加醛类物质，但一些不法制售单位和个体，为了防腐，在某些产品的加工制作过程中加入一些醛类物质，更有甚者将一些废旧油脂简单加工使其重返市场，此类油脂中含有大量脂肪醛类物质，对人体健康造成极大危害。
[0003]地沟油作为废旧油脂的一种，其检测方法的研究目前备受关注。地沟油也称泔水油或潲水油，是地沟中经过隔油器收集，然后加入硫酸，加热脱水、脱渣、脱色产生的油脂。在捞取、加工、储运过程中会生成一系列挥发性物质，在不饱和碳碳键处发生一系列氧化、断裂等复杂的化学反应，同时在酯键处也发生水解、氧化、缩合等一系列反应，从而生成大量的醛类有害物质。然而地沟油从外观上很难与合格食用油区别，导致执法者缺少相关的执法依据而很难对问题餐馆做出惩罚，使得地沟油市场日渐庞大。因此，为了给食用植物油的市场监管提供技术支持，近年来有关地沟油和掺假食用植物油鉴定方法的研究不少。有通过光谱测定法进行检测鉴别花生油是否掺兑了潲水油的(分析试验室，2006，25 (3):92- 94);还有通过理化指标进行鉴定，(中国食品卫生，2004，16 (5): 450-451);也有通过外源性物质进行判断，检测油脂中的胆固醇(中国油脂，2006，31 (5): 65-67)。对于地沟油的鉴定也有相关专利报道，中国专利(200810167263.6) 一种检验合格食用油中是否掺有地沟油的方法,利用地沟油电导率的增加鉴定地沟油；中国专利(201010206141.0)脱色潲水油(地沟油)的快速鉴定方法，通过对油样品中的氯离子的测定判断食用油是否添加潲水油；还有利用实时荧光定量PCR扩增手段检测地沟油的专利(201010225657.X)。这些专利方法虽然能鉴定地沟油，但是有的方法操作繁琐，干扰因素多，过程较复杂，而且潲水油鉴别检测的特异指标均不明确。
[0004]
【发明内容】
本发明的目的旨在提供一种地沟油中脂肪醛的测定方法。
[0005]本发明通过如下措施来实现:
本发明利用废旧油脂中存在特异性小分子脂肪醛的特点，根据醛类化合物与2，4_ 二硝基苯肼(DNPH)在酸性介质中发生具有高度特异化学反应生成衍生物腙的特性，在高效液相色谱仪上完成废旧油脂中醛类化合物的检测、分析，不仅可以有效的实现地沟油的鉴另Ij，而且为食用油的质量安全提供技术支持。
[0006]本发明提供的食用油供试品均自超市购买特级初榨橄榄油、鲁花压榨一级花生油、金龙鱼一级大豆油、家庆二级胡麻油、江河源三级菜籽油、江河源四级菜籽油、三福四级菜籽油、山丹香四级菜籽油、鲁花葵花油、西王玉米胚芽油、普通棉籽油为测定对照品；地沟油是从市场回收后进行精炼处理后用于实验；勾兑油是从市场买的掺有地沟油的廉价油。通过对供试油用硅胶柱进行前处理，正己烷纯化洗脱，将疏水性物质祛除，再加入乙醇洗脱亲水性的物质后，将洗脱液浓缩富集后采用高效液相色谱方法定量测定，考察实际样品中相应醛的含量。本发明提供的高效液相色谱方法以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，用紫外检测器进行检测。
[0007]本发明利用高效液相色谱技术对潲水油中有害醛类物质的分离测定，实现食品安全预警，其特征在于该方法包括以下步骤:
1.样品预处理
1.)将收集地沟油精炼，其它油样直接使用；
2.)样品洗脱用硅胶柱:供试油样品正己烷溶解后上硅胶柱；
3.)选用分段洗脱方法:经过大量洗脱方式的选择，采用不同溶剂进行分段洗脱；
采用此方法可以将油样中的脂肪醛类物质进行富集；
2.2,4 - 二硝基苯肼衍生液的配置:
将3 ml浓硫酸加入盛有0.5 g 2,4 -二硝基苯肼的锥形瓶中，温热时加15 ml无水乙醇混匀；
3.醛和2，4-二硝基苯肼反应:
2，4-二硝基苯肼可以和醛类物质反应生成相应的腙，通过油的乙醇洗脱液中加入2，4- 二硝基苯肼后生成2，4_ 二硝基苯腙的含量确定出不同样品中醛的含量；
4.样品配置:
将正己烷/乙酸乙酯洗脱液旋蒸回收后取样；将无水乙醇洗脱液旋蒸回收后取样。液相色谱实验的空白样是将洗脱油样用溶剂溶解稀释后进样，实际样是在空白样中加入过量2，4-二硝基苯肼衍生液后的样品；
5.液相色谱测定
以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，以反相色谱模式进行分离分析，用紫外检测器进行检测。
[0008]本发明的测定方法适用于废旧油脂、精炼地沟油与掺假食用油的鉴别。
[0009]本发明所述的地沟油精炼中使用5%?20%Na0H。
[0010]本发明所述的地沟油精炼中使用5%?20%NaCl溶液。
[0011]本发明所述的地沟油精炼中使用MgSO4, Na2SO4, CaSO4, CaCl2中的一种。
[0012]本发明所述的地沟油精炼脱色使用活性白土、活性碳、硅藻土。
[0013]本发明所述的地沟油精炼脱色剂的使用量为样品量的5?10倍。
[0014]本发明所述的地沟油精炼脱色温度为50?100 V。
[0015]本发明所述的地沟精炼油脱色反应的时间为20?50分钟。
[0016]本发明所述的硅胶柱采用100?200目的硅胶。
[0017]本发明所述的2，4 - 二硝基苯肼衍生液与油样的反应时间是5?10分钟。
[0018]本发明所述的2，4 -二硝基苯肼衍生液与油样的反应温度是25 °C?60 °C。
[0019]本发明所述的样品洗脱溶剂为正己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇混合溶剂或甲醇、乙醇、乙腈溶剂；用量为样品上样量的5?20倍。
[0020]本发明所述样品进样时溶解稀释的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、二氯甲烷是中的一种或混合，用溶剂稀释倍数为广20倍。
[0021]本发明所述的液相色谱测定是在十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱(ODS)上进行分离的，色谱分离所用的流动相为甲醇、乙腈、/4~10%的醋酸或磷酸水溶液(75~90/25~10，V/V), pH 为 3.0-5.0，流动相的流速为 1.0 ml/min。
[0022]本发明所述的液相色谱测定是在紫外检测器上进行检测的，检测使用的波长为254~356 nm0
[0023]本发明利用废旧油脂中含有大量脂肪醛类物质的特异性，将其前处理后与2，4- 二硝基苯肼进行衍生，反应生成不同2，4_ 二硝基苯腙后，利用高效液相色谱法进行检测，实现对废旧油脂(地沟油)中醛类物质的测定，同时对市售的食用油实际样品中是否掺有地沟油进行高效、简洁、灵敏的判断。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1是甲、乙、丙、丁、戊、己醛标准品与2，4_ 二硝基苯肼发生衍生后生成不同2，4-二硝基苯腙的高效液相色谱图。其中:1.2，4_ 二硝基苯甲腙，2.2，4_ 二硝基苯乙腙，
3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己月示。
[0025]图2是精炼地沟油乙醇洗脱液加2，4- 二硝基苯肼的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4- 二硝基苯丁腙，5.2，4- 二硝基苯戊腙，6.2，4- 二硝基苯己腙。
[0026]图3是掺杂有50%地沟油的廉价勾兑油乙醇洗脱液加苯肼的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己腙。
[0027]图4是鲁花一级花生油乙醇洗脱加的高效液相色谱图，色谱条件同图1。其中:1.2，4-二硝基苯甲腙，2.2，4-二硝基苯乙腙，3.2，4-二硝基苯丙腙，4.2，4-二硝基苯丁腙，5.2，4-二硝基苯戊腙，6.2，4-二硝基苯己腙。
[0028]【具体实施方式】
本发明将通过具体实施例进行详细的描述。
[0029]实施例1
样品预处理:在300 mL地沟油中加入500 mL10%Na0H，去除其皂类物质，再加入10%NaCl溶液除多余碱液并加速油皂分离，30 g活性白土加热70 °C脱色30分钟，然后过滤祛除活性白土，加10 g MgSO4脱水。取精制地沟油50 mL用80 mL正己烷溶解后上样于50 g处理好的硅胶柱。先用550 mL正己烷与乙酸乙酯的混合溶液(10:1，V/V)洗脱，除去疏水性物质，然后加入500 mL乙醇进行洗脱，分别将两部分洗脱液浓缩除去溶剂后储备待用。
[0030]样品制备:取正己烷与乙酸乙酯的混合(10:1，V/V)浓缩洗脱液I mL，加入无水乙醇1 mL，再加入二氯甲烷I mL，样品完全溶解稀释后作为空白样。取乙醇洗脱浓缩洗脱液1mL，加入无水乙醇lmL，再加入二氯甲烷I mL后加入过量2，4-二硝基苯肼0.5 mL作为实
际样。
[0031]液相色谱测定:用岛津色谱仪一套，包括LC-lOATvp色谱泵一台，2487多波长紫外检测器一台，7725i手动进样器一个。在ODS-A色谱柱(5 μ m, 250 X 4.6 mm ID)上进行高效液相色谱分离测定。流动相是甲醇/8%醋酸水溶液，配比为25/75 ( V/V)，pH为3.0，检测波长为356 nm,流速为1.0 ml/min,供试样品溶液均进样20 μ?进行分析。
[0032]由【专利附图】
【附图说明】中的色谱数据结果分析，该方法确实具有较好的准确度和可信度值，并且对设备要求不高，便于实施。
[0033]实施例2
取一级鲁花花生油50 mL用80 mL正己烧溶解后上样于50 g处理好的硅胶柱。先用55 OmL正己烷与乙酸乙酯的混合溶液(10: 1，V/V)洗脱，除去疏水性物质，然后加入500 mL乙醇进行洗脱，分别将两部分洗脱液浓缩除去溶剂后储备待用。
[0034]样品制备:取正己烷与乙酸乙酯的混合(10:1，V/V)浓缩洗脱液I mL，加入无水乙醇lmL，再加入二氯甲烷I mL，样品完全溶解稀释后作为空白样。取乙醇洗脱浓缩洗脱液ImL，加入无水乙醇I mL，再加入二氯甲烷I mL后加入过量2，4-二硝基苯肼0.5 mL作为实际样。
[0035]液相色谱测定:用岛津色谱仪一套，包括LC-lOATvp色谱泵一台，2487多波长紫外检测器一台，7725i手动进样器一个。在ODS-A色谱柱(5 μ m, 250 X 4.6 mm ID)上进行高效液相色谱分离测定。流动相是甲醇/8%醋酸水溶液，配比为25/75(V/V)，pH为3.0，检测波长为356 nm,流速为1.0 ml/min,供试样品溶液均进样20 μ?进行分析。
[0036]由【专利附图】
【附图说明】中的色谱数据结果分析，该方法确实具有较好的准确度和可信度值，并且对设备要求不高，便于实施。`
【权利要求】
1.一种地沟油中脂肪醛的测定方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 样品预处理 1.)将收集地沟油精炼，其它油样直接使用；
2.)样品洗脱用硅胶柱:供试油样品正己烷溶解后上硅胶柱；
3.)选用分段洗脱方法:经过大量洗脱方式的选择，采用不同溶剂进行分段洗脱； 采用此方法可以将油样中的脂肪醛类物质进行富集； 2,4 - 二硝基苯肼衍生液的配置: 将3 ml浓硫酸加入盛有0.5 g 2,4 -二硝基苯肼的锥形瓶中，温热时加15 ml无水乙醇混匀； 醛和2，4-二硝基苯肼反应: 2，4-二硝基苯肼可以和醛类物质反应生成相应的腙，通过油的乙醇洗脱液中加入2，4- 二硝基苯肼后生成2，4_ 二硝基苯腙的含量确定出不同样品中醛的含量； 样品配置: 将正己烷/乙酸乙酯洗脱液旋蒸回收后取样；将无水乙醇洗脱液旋蒸回收后取样；液相色谱实验的空白样是将洗脱油样用溶剂溶解稀释后进样，实际样是在空白样中加入过量2，4-二硝基苯肼衍生液后的样品； 液相色谱测定 以十八烷基键合硅胶为色谱柱填料，以甲醇、醋酸水溶液配制成流动相，以反相色谱模式进行分离分析，用紫外检测器进行检测。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用5%~20%Na0H。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用5%~20%NaCl溶液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼中使用MgSO4,Na2SO4, CaSO4, CaCl2中的一种。
5.如权利要求1述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色使用活性白土、活性碳、硅藻土。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色剂的使用量为样品量的5~10倍。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟油精炼脱色温度为50~100°C。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于地沟精炼油脱色反应的时间为20~50分钟。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于硅胶柱采用100~200目的硅胶。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于2，4-二硝基苯肼衍生液与油样的反应时间是5~10分钟。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于2，4-二硝基苯肼衍生液与油样的反应温度是 25 °C~60 °C。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于洗脱溶剂为正己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇混合溶剂或甲醇、乙醇、乙腈溶剂；用量为样品上样量的5~20倍。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于溶解稀释的溶剂为乙酸乙酯、甲醇、乙醇、二氯甲烷是中的一种或混合，用溶剂稀释倍数为广20倍。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于液相色谱测定是在十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱上进行分离的，色谱分离所用的流动相为甲醇、乙腈、/4~10%的醋酸或磷酸水溶液，pH为3.0-5.0,流动相的流速为1.0 ml/min。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于液相色谱测定是在紫外检测器上进行检测的，检测使用的波长为254~·356 nm。
【文档编号】G01N30/89GK103852551SQ201210498061
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年11月29日 优先权日:2012年11月29日
【发明者】董树清, 赵亮, 王利涛, 张志欣, 张霞, 郭勇 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所
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