专利名称：牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法
技术领域：
发明涉及一种牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法。
背景技术：
牛乳中蛋白质主要有两大类，即酪蛋白和乳清蛋白。牛乳蛋白质中乳清蛋白约占总蛋白的20%，酪蛋白约占总蛋白的80%。人乳中酪蛋白约占总蛋白的40%，乳清蛋白约占总蛋白的60% .乳清蛋白分子量较酪蛋白分子量小，更易消化吸收，并且乳清蛋白中含有多种活性物质，因此乳清蛋白被誉为蛋白之王。我国婴儿配方乳粉有强制性国家标准，规定其乳清蛋白含量不得低于总蛋白质的60% .由于乳清蛋白易变性，在乳品加工过程中有较多的乳清蛋白已经变性，而许多测定方法只能检测未变性的乳清蛋白，不能检测已变性的乳清蛋白，因此总乳清蛋白的测定一直是个难题。到目前为止，国内外仍然没有测定变性和未变性乳清蛋白总量的好方法。
发明内容
发明的目的是提供一种能够准确测定牛乳婴幼儿配方粉中变性和非变性乳清蛋白总含量时科学的数据校正处理方法。
上述的目的通过以下的技术方案实现一种牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，第一步乳清蛋白标准系列样品和被测样品水解后胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸各自总量的测定与计算并减去各自游离氨基酸的测定值；第二步胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸的含量值的自身校正；第三步用 胱氨酸值校正天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸值；第四步校正后的胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸含量相加；第五步校正后氨基酸比值计算；第六步氨基酸比值与乳清蛋白标准系列样品含量的数据关系分析；第七步被测样品乳清蛋白百分含量计算。
所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，所述的第一步水解后胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸各自的总量的计算减去各自游离氨基酸的量；经过酸水解后测定的氨基酸总量X1减去不水解时该样品氨基酸测定值x2，各种氨基酸中游离氨基酸的含量都要相应扣除；样品中各氨基酸占总蛋白的含量按下列公式计算
权利要求
1.一种牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是第一步乳清蛋白标准系列样品和被测样品水解，进行胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸各自总量的测定与计算，减去各自游离氨基酸的测定值；第二步胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸的含量值的自身校正；第三步用胱氨酸值校正天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸值；第四步校正后的胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸含量相加；第五步校正后氨基酸比值计算；第六步氨基酸比值与乳清蛋白标准系列样品含量的数据关系分析；第七步被测样品乳清蛋白百分含量计算。
2.根据权利要求1所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法， 其特征是第一步乳清蛋白标准系列样品和被测样品水解，进行胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸各自总量的测定与计算，减去各自游离氨基酸的测定值经过酸水解后测定的氨基酸总量X1减去不水解时该样品氨基酸测定值X2,胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸中游离氨基酸的含量都要相应扣除；样品中各氨基酸占总蛋白的含量按下列公式计算
3.根据权利要求1或2所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是所述的第二步胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸的含量值的自身校正；
4.根据权利要求1或2所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是所述的第六步氨基酸比值与乳清蛋白标准系列样品含量的数据关系分析； 以乳清蛋白标准系列各个乳清蛋白含量数据为横坐标Xi，以对应的各个校正后氨基酸比值为纵坐标Yi，对所得数据进行回归分析，得到氨基酸比值与乳清蛋白含量关系的回归线性方程 Yi = KXi + b ;所述的第七步被测样品乳清蛋白百分含量计算；将被测样品校正后的氨基酸比值代入乳清蛋白的线性回归方程Yi = KXi + b中，计算出乳清蛋白的百分含量。
5.根据权利要求3所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是所述的第六步氨基酸比值与乳清蛋白标准系列样品含量的数据关系分析；以乳清蛋白标准系列各个乳清蛋白含量数据为横坐标Xi，以对应的各个校正后氨基酸比值为纵坐标Yi，对所得数据进行回归分析，得到氨基酸比值与乳清蛋白含量关系的回归线性方程 Yi = KXi + b ；所述的第七步被测样品乳清蛋白百分含量计算；将被测样品校正后的氨基酸比值代入乳清蛋白的线性回归方程Yi = KXi + b中，计算出乳清蛋白的百分含量。
6.根据权利要求1或2或4所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是所述的校正处理方法所用的待测样品及标准样品的制作方法，对待测样品、标准样品进行氧化、盐酸水解，首先称取混合均匀的含蛋白质7. O mg-50mg的样品和乳清蛋白与酪蛋白混合的标准品于水解管中，在冰水浴中冷却30 min后加入2-4 mL 已经冷却的过甲酸溶液，盖好瓶塞后置于O °C ±1 °C冰箱中，冰浴16 h；向水解管中加入O. 3-0. 6 mL氢溴酸，振摇后冰浴30 min，在60 V ±2 °C氮吹仪上浓缩至近干或在60 °C ±2 °C下减压蒸懼至近干；向水解管内加入6 mol/L盐酸,8-30 mL,充入氮气Imin后， 拧紧螺纹盖，将水解管放在110°C ± I°C的恒温干燥箱内水解24 h后取出冷却至室温；将水解液用超纯水转移并定容至25或50 mL容量瓶中，混匀，滤纸过滤；吸取滤液I mL于指型瓶中，在60 °C±2 °C氮吹仪上浓缩至干或在低于50 °C下减压蒸馏，残留物用I mL超纯水溶解，即制成试样溶液。
7.根据权利要求6所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法， 其特征是所述的试样溶液中游离氨基酸试样的制备；准确称取混合均匀的试样约2. 5 g 于100 mL锥形瓶中，加入约25 mL，45 °C-50 °C温水溶解；降至室温后用盐酸溶液调节试样溶液的PH值至1. 7±0. 1，放置约I min ;再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的pH值至 4. 5±0. 1，超声振荡10 min，用水转移并定容至100 mL容量瓶中混匀；滤纸过滤后经O. 22 μ m滤膜过滤，滤液即为试样溶液；乳清蛋白计算时要扣除游离氨基酸。
8.根据权利要求3所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法， 其特征是所述的校正处理方法所用的待测样品及标准样品的制作方法，对待测样品、标准样品进行氧化、盐酸水解，首先称取混合均匀的含蛋白质7. O mg-50mg的样品和乳清蛋白与酪蛋白混合的标准品于水解管中，在冰水浴中冷却30 min后加入2-4 mL已经冷却的过甲酸溶液，盖好瓶塞后置于O °C±1 °C冰箱中，冰浴16 h；向水解管中加入O. 3-0. 6 mL氢溴酸，振摇后冰浴30 min，在60 °C ±2 °C氮吹仪上浓缩至近干或在60 °C ±2 °〇下减压蒸馏至近干；向水解管内加入6 mol/L盐酸，8-30 mL，充入氮气Imin后，拧紧螺纹盖，将水解管放在110°C ± I°C的恒温干燥箱内水解24 h后取出冷却至室温；将水解液用超纯水转移并定容至25或50 mL容量瓶中，混匀，滤纸过滤；吸取滤液I mL于指型瓶中，在60 °C ±2 °C氮吹仪上浓缩至干或在低于50 °C下减压蒸馏，残留物用I mL超纯水溶解，即制成试样溶液。
9.根据权利要求5所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法， 其特征是所述的校正处理方法所用的待测样品及标准样品的制作方法，对待测样品、标准样品进行氧化、盐酸水解，首先称取混合均匀的含蛋白质7. O mg-50mg的样品和乳清蛋白与酪蛋白混合的标准品于水解管中，在冰水浴中冷却30 min后加入2-4 mL已经冷却的过甲酸溶液，盖好瓶塞后置于O °C±1 °C冰箱中，冰浴16 h；向水解管中加入O. 3-0. 6 mL氢溴酸，振摇后冰浴30 min，在60 °C ±2 °C氮吹仪上浓缩至近干或在60 °C ±2 °〇下减压蒸馏至近干；向水解管内加入6 mol/L盐酸，8-30 mL，充入氮气Imin后，拧紧螺纹盖，将水解管放在110°C ± I°C的恒温干燥箱内水解24 h后取出冷却至室温；将水解液用超纯水转移并定容至25或50 mL容量瓶中，混匀，滤纸过滤；吸取滤液I mL于指型瓶中，在60 °C ±2 °C氮吹仪上浓缩至干或在低于50 °C下减压蒸馏，残留物用I mL超纯水溶解，即制成试样溶液。
10.根据权利要求6或7或8或9所述的牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法，其特征是将所述的试样溶液进行衍生，分别取试样溶液、乳清蛋白标准水解溶液、氨基酸混合标准工作液各10 μ L,各加入70 μ L试样溶液缓冲液，振荡混匀；边振荡边加入20 UL衍生剂，振荡后于55 V ±2 °C培养箱中放置10 min，即得氨基酸标准工作衍生液、乳清蛋白标准系列衍生液、被测样品衍生液。
全文摘要
牛乳婴幼儿配方粉总乳清蛋白测定时数据的校正处理方法。牛乳中蛋白质主要有两大类，即酪蛋白和乳清蛋白。本发明，第一步乳清蛋白标准系列样品和被测样品水解后胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸各自总量的测定与计算并减去各自游离氨基酸的测定值；第二步胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸及缬氨酸的含量值的自身校正；第三步用胱氨酸值校正天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸值；第四步校正后的胱氨酸、天冬氨酸、丙氨酸含量相加；第五步校正后氨基酸比值计算；第六步氨基酸比值与乳清蛋白标准系列样品含量的数据关系分析；第七步被测样品乳清蛋白百分含量计算。本发明用于牛乳基婴幼儿配方乳品中变性和非变性乳清蛋白总量的测定时，数据的科学校正处理方法。
文档编号G01N33/04GK102998427SQ201210515468
公开日2013年3月27日 申请日期2013年1月20日 优先权日2013年1月20日
发明者鄂来明, 张秋梅, 王薇, 赵秋莲, 张丽宏, 单艺, 姜一铭, 刘德鑫, 黄晓林, 傅徐阳, 梁杰 申请人:黑龙江省乳品工业技术开发中心