专利名称：一种冻存液的制作方法
技术领域：
本发明是一种冻存液，属于生物体外诊断试剂技术领域。
背景技术：
酶联免疫吸附(ELISA)实验因其灵敏度高，样本容易获得，操作简单已成为国际公认的蛋白定量金标准。ELISA试剂盒制备的关键技术之一就是标准品的制备。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20度保存法和真空冷冻干燥法。甘油低温保存，蛋白活性通常可保持6个月至I年。常规真空冷冻干燥，蛋白活性能够保持两年，但这不能满足ELISA试剂盒长期保存的需要，标准品需要更长的蛋白活性保持时间。近年来，传统ELISA标准品的制备过程大都使用真空冷冻干燥法，但没有使用专门用于ELISA标准品制备的冻存液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能使ELISA标准品在4度保存3年以上，蛋白活性保持在99. 5%以上，蛋白活性变异在1%以内的冻存液。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该冻存液以PBST缓冲液作为溶齐U，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0. 01mol/L, Tween20体积分数为1%。，pH=7. 2-7. 4,所述BSA的质量分数为0. 5%_10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。作为优选，所述PBST缓冲液PH=7. 3，BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%。本发明标准蛋白在进行常规的冷冻步骤前先用所述冻存液进行溶解，在冻存液的保护下，再通过真空冷冻干燥对标准蛋白进行固化保存，可以保护标准蛋白，使蛋白活性稳定。本发明与现有技术相比具有的优点是用该冻存液对ELISA标准蛋白进行真空冷冻干燥后制得的标准品可以在4度条件下保存，保存时间更长，蛋白活性保持水平更高，蛋白活性变异更少。增加了 ELISA试剂盒的保存时间和稳定性，减少了 ELISA试剂盒因标准品活性降低或丧失而报废，减少经济损失。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。实施例1:以Human IL_6标准蛋白为例，采用本发明所述冻存液进行真空冷冻干燥得到Human IL-6标准品的步骤如下
a、在磷酸根摩尔浓度为0. 01mol/L,Tween20体积分数为1%q，pH=7. 3的PBST缓冲液中加入BSA和海藻糖，使BSA的质量分数为10%，海藻糖的质量分数为30%，得到冻存液。
b、将所述冻存液用0. 22um微孔滤膜抽滤，得到抽滤冻存液；
C、将Human IL-6标准蛋白用所述抽滤冻存液稀释至目的浓度，得到Human IL-6标准浓度蛋白溶液；
d、将所述HumanIL-6标准浓度蛋白溶液移至2ml的聚丙烯塑料管，每管存放IOOul，用铝箔纸封口后-80度过夜；
e、过夜后用注射器针头在铝箔纸上扎3个小孔，IOpa以内真空冷冻干燥8小时，至完全干燥，得到Human IL-6标准品；
f、除去铝箔纸，拧紧管盖，贴标签，4度保存。上述Human IL-6标准品经过37度加速试验，可以保存28天。根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存I天相当于4度保存48天，因此得出本实施例的Human IL-6标准品在4度可保存3年以上。实施例2 以实施例1中制得的Human IL-6标准品为例进行蛋白活性与平行性实验，冻干后与冻干前相比，蛋白活性保持在99. 5%以上。20个Human IL-6标准品，活性变异在1%以内。其他实施例以Human IL-6标准蛋白为例制成Human IL-6标准品后进行保存时
间测试，所述冻存液中BSA和海藻糖的质量分数是以下表格中的配比，步骤与实施例1相
同，不同配比对应的37度加速试验测得的保存天数如下表
权利要求
1.一种冻存液，其特征在于所述冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0. 01mol/L, Tween20体积分数为1%0，pH=7. 2-7. 4，所述BSA的质量分数为0. 5%_10%，所述海藻糖的质量分数为5%_30%。
2.根据权利要求1所述的冻存液，其特征在于所述PBST缓冲液PH=7.3。
3.根据权利要求1或2所述的冻存液，其特征在于所述BSA的质量分数为10%，所述海藻糖的质量分数为30%。
全文摘要
本发明是一种冻存液，属于生物体外诊断试剂技术领域，该冻存液以PBST缓冲液作为溶剂，BSA和海藻糖作为溶质；所述PBST缓冲液中的磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，pH=7.2-7.4，所述BSA的质量分数为0.5%-10%，所述海藻糖的质量分数为5%-30%。本发明标准蛋白在进行常规的冷冻步骤前先用所述冻存液进行溶解，在冻存液的保护下，再通过真空冷冻干燥对标准蛋白进行固化保存，可以保护标准蛋白，使蛋白活性稳定。
文档编号G01N33/531GK103063829SQ201210560478
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者袁志波 申请人:杭州茂天赛科技有限公司