专利名称：一种食物过敏原检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种食物过敏原检测盒，尤其涉及ー种半定量或定量检测人血清中食物不耐受特异性IgG的免疫印迹(Western Blot)检测试剂盒。
背景技术：
过敏性疾病是现代社会中最常见的ー种疾病，其发病机理是机体受抗原物质(也称过敏原allergen或变应原)刺激后引起的组织损伤或生理功能紊乱。食物不耐受性是过敏性疾病的ー种，其为复杂的变态反应性疾病，病变机理为人的免疫系统把进入体内的某种或多种食物当作是有害物质，从而针对这些物质产生过度的保护性免疫反应，产生食物特异性IgG抗体。食物在进入消化道后，理论上应当被消化分解为氨基酸、甘油和单糖，然后转化为 能量或者人体组织构成。但事实并非如此，很多食物(包括我们最常食用的某些食物)因为缺乏相应的酶而无法被人体完全消化，从而以多肽或其它形式进入肠道，其中一些会被机体作为外来物质识别而产生免疫反应，最后生成具有食物特异性的IgG抗体。当该IgG抗体与再次食物颗粒接触的时候，其将与食物颗粒形成免疫复合物(III型变态反应)，并被机体当作废物从肾脏排出。而并不是所有的免疫复合物都能通过肾小球滤膜，无法过滤的免疫复合物则会堵塞肾脏的滤过结构，导致肾小球滤过压升高，继而导致血压升高、血管壁扩张和胆固醇沉积。人体废液(尤其是脂肪细胞)不能正常通过肾脏排出而潴留在组织中，最终会导致水肿和肥胖。如果不及时改变饮食结构，不耐受的食物会继续形成复合物，加重原有的症状并不断持续。从而导致免疫系统超负荷，致使人体各系统出现如高血压、月巴胖、头痛或偏头痛、慢性腹泻、疲劳、感染等一系列症状疾病。目前确定过敏原的方法主要皮内试验和点刺试验，该方法一般半小时即可获得检测结果，具有简便、快速、价廉的优点。但缺陷在于假阳性高并受其他药物的影响较大，试验前24小时内服用抗过敏药物会影响测定結果，甚至严重过敏反应的患者进行皮肤试验还会有一定的生命危险。当然也可以通过体外实验检测出过敏原的种类，如通过抽取少量血清，然后采用酶联免疫法(ELISA)检测样品中对某些过敏原产生的特异性IgG的含量，完成过敏原筛查及特异性过敏原的检测，但该方法往往操作起来极为不便。
实用新型内容鉴于现有技术的不足，本实用新型第一方面提供一种灵敏度高，使用方便、安全的食物过敏原检测试剂盒。本实用新型提供如下技术方案ー种食物过敏原检测试剂盒，其特征在于食物过敏原检测试剂盒包括包被有过敏原蛋白及人IgG标准品的硝酸纤维膜试纸条及反应槽，所述试纸条位于反应槽的底部。进ー步,所述食物过敏原检测试剂盒还包括生物素标记的抗人IgG抗体试剂瓶，亲和素-辣根过氧化物酶试剂瓶，TMB底物显色瓶，样本稀释液瓶。进ー步，所述硝酸纤维膜试纸条不同位置包被有若干种食物过敏原蛋白，此不同位置区域定义为检测区域。进ー步，所所述食物过敏原蛋白为奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类的之中的若干种。进ー步，所述硝酸纤维膜试纸条在特定位置还包被有若干不同浓度的人IgG标准品，此特定位置区域定义为标准品区域。本实用新型的有益效果由于反应槽内底部设硝酸纤维膜试纸条，该硝酸纤维膜试纸条被有若干种过敏原蛋白及人IgG标准品，试剂盒中还盛放有其他反应与检测试剂，加入检测者的血清样本于反应槽中，可方便的检测出检测者食物过敏原的种类及程度，灵 敏度高，使用方便、安全。
下面将结合附图及实施例对本实用新型作进ー步说明，附图中图I是本实用新型中反应槽结构示意图。
具体实施方式
为了使本实用新型的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本实用新型进ー步详细说明。请參阅附图I，本实用新型提供了 ー种食物过敏原检测试剂盒，可用于对人体食物过敏IgG抗体进行检测，包括包被有过敏原蛋白及人IgG标准品的硝酸纤维膜试纸条200及反应槽100，所述试纸条位于反应槽100的底部。该试剂盒还包括生物素标记的抗人IgG抗体试剂瓶、亲和素-辣根过氧化物酶试剂瓶、TMB底物显色瓶、样本稀释液瓶，其在盒中的位置没有特别要求。该试纸条上包被有若干食物过敏原蛋白300，该食物过敏原蛋白300分居于硝酸纤维膜试纸条200的不同位置。该试纸条上还包被有人IgG标准品400，该人IgG标准品400分居于硝酸纤维膜试纸条200的不同位置。按照人体日常进食，食物过敏原蛋白300包括为奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类的之中的若干种。例如奶类食物过敏原可以包括牛奶、羊奶等提取蛋白；蛋类食物过敏原可以包括家禽蛋白、家禽蛋黄等提取蛋白；肉类食物过敏原可以包括猪肉、牛肉、羊肉、鸭肉、鸡肉、鹅肉、火鸡肉、驴肉等提取蛋白；谷物类食物过敏原蛋白可以包括玉米、小麦、燕麦、大麦、乔麦、大米、小米等提取蛋白；坚果类食物过敏原蛋白可以包括杏仁、花生、棒子、腰果、核桃、开心果、巴西坚果、芝麻等提取蛋白；水果类食物过敏原蛋白可以包括西瓜、菠萝、橙子、芒果、香蕉、柑桔、胡袖、拧橡、苹果、葡萄、梨、草莓、桃等提取蛋白；蔬菜类过敏原蛋白可以包括萝卜、芹菜、菠菜、洋葱、茄子、大蒜、辣椒、土豆、西红柿等提取蛋白；水产类食物过敏原蛋白可以包括带鱼、黄鱼、比目鱼、三文鱼、鲳鳊鱼、鲫鱼、草鱼、链鱼、龙虾、河虾、蟹、蛘、贝类、牡蛎、黄鳝、鲤鱼等提取的蛋白；豆类食物过敏原蛋白可以包括扁豆、蚕豆、黄豆、豌豆等提取的蛋白；一般情况所述过敏原蛋白应尽可能种类全，以便搜寻出过敏原蛋白种类；当然如果需要检查某人对特定食物是否过敏，则只需提取该特定食物过敏原蛋白即可。食物过敏原的制备方法为将含过敏原蛋白300的食物经粉碎、脱脂、提取、浓缩、SDS-PAGE电泳鉴定、洗脱、然后冷冻贮存备用。试剂盒的组装如下按每盒12份粘贴于反应槽100底部的硝酸纤维膜试纸条200，一瓶生物素标记抗体(4ml);—瓶亲和素-辣根过氧化物酶(4ml); —瓶TMB底物显色液(4ml);—瓶(25X)浓缩清洗液(20ml);—瓶样本稀释液(IOml)。使用本实用新型进行检测步骤为步骤一提取血清制备样本液并加以稀释，加入所述样本液到带有硝酸纤维膜试纸条200的反应槽100中室温下孵育45分钟，使样本液中的食物不耐受IgG抗体与试纸条上固相过敏原蛋白结合成IgG抗体-过敏原蛋白复合物，清洗反应槽100除去杂质蛋白；步骤ニ 向反应槽100中加入生物素标记的抗人IgG抗体在室温中孕育45分钟 后，使IgG抗体-过敏原蛋白复合物与生物素标记的抗人IgG抗体结合成生物素标记的抗人IgG抗体-IgG抗体-过敏原蛋白复合物，使人IgG标准品与生物素标记的抗人IgG抗体结合成生物素标记的抗人IgG抗体-人IgG抗体标准品复合物，清洗反应槽100除去多余抗人IgG抗体；步骤三向反应槽100中加入亲和素-HRP室温孵育20分钟，使其与IgG抗体-过敏原蛋白-抗人IgG抗体复合物及生物素标记的抗人IgG抗体-人IgG抗体标准品复合物相结合，清洗反应槽100除去多余的亲和素-HRP ；步骤四向反应槽100中加入TMB底物显色液避光反应15分钟，根据显色液产生顔色的位置判断样本液中食物不耐受IgG的种类，根据颜色的深浅半定量判断食物不耐受IgG的浓度，或使用适配生物信号分析仪分析过敏原的种类及定量判断浓度；步骤一前所述反应槽100在室温下平衡10分钟，用稀释的清洗液快速湿润。本实用新型由于反应槽100内底部设有硝酸纤维膜试纸条200，该硝酸纤维膜试纸条200被有若干种过敏原蛋白300及若干种人IgG标准品400，试剂盒中还盛放有其他反应与检测试剂，加入检测者的血清样本于反应槽100中，按照本实用新型前述使用步骤检测，即可方便的检测出检测者食物过敏原的种类及程度，灵敏度高，使用方便、安全。以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在实用新型的保护范围之内。
权利要求1.ー种食物过敏原检测试剂盒，其特征在于食物过敏原检测试剂盒包括包被有过敏原蛋白及人IgG标准品的硝酸纤维膜试纸条及反应槽，所述试纸条位于反应槽的底部。
2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述食物过敏原检测试剂盒还包括生物素标记的抗人IgG抗体试剂瓶、亲和素-辣根过氧化物酶试剂瓶、TMB底物显色瓶、样本稀释液瓶。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述硝酸纤维膜试纸条不同位置包被有若干种食物过敏原蛋白，此不同位置区域定义为检测区域。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述食物过敏原蛋白为奶类、蛋类、肉类 、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类的之中的若干种。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述硝酸纤维膜试纸条在特定位置还包被有若干不同浓度的人IgG标准品，此特定位置区域定义为标准品区域。
专利摘要本实用新型提供一种食物过敏原检测试剂盒，其特征在于食物过敏原检测试剂盒包括包被有过敏原蛋白及人IgG标准品的硝酸纤维膜试纸条及反应槽，所述试纸条位于反应槽的底部。本实用新型的有益效果由于反应槽内底部设硝酸纤维膜试纸条，该硝酸纤维膜试纸条被有若干种过敏原蛋白及人IgG标准品，试剂盒中还盛放有其他反应与检测试剂，加入检测者的血清样本于反应槽中，可方便的检测出检测者食物过敏原的种类及程度，灵敏度高，使用方便、安全。
文档编号G01N33/68GK202649216SQ20122024656
公开日2013年1月2日 申请日期2012年5月28日 优先权日2012年5月28日
发明者王永昌, 李光星 申请人:上虞常春生物技术有限公司