专利名称：肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种医疗器械，具体涉及一种肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒。
背景技术：
肺炎衣原体(Chlamydia p neumoniae Cpn, Cpn)是人类呼吸道疾病的重要病原体，可引起急慢性呼吸道疾病，社区获得的肺炎、支气管炎和鼻窦炎5-10%由肺炎衣原体引起。紧张引起成人及青少年的非典范肺炎，亦可引起支气管炎、咽炎及扁桃体炎等急性呼吸道传染。肺炎衣原体呼吸道感染的临床表现不典型，通常以咽痛和音哑起病，数日至7天后出现咳嗽，与其他呼吸道疾病相比，自起病至就医的时间以肺炎衣原体感染为最长，因此病初时的低热，检查时多已降至正常，异常呼吸音和鼻窦区压痛为最常见的特征，白细胞计数大多正常，血沉增速，X线胸片常显示单侧节段性肺炎，类似非典型性肺炎，严重者病变较广泛，甚至波及双肺，也可伴有胸膜炎或胸腔积水。目前，肺炎衣原 体的检测方法主要有以下几种实行室检测1.血象血白细胞计数多平常，重症患者可升高。血沉多增快。2.病原学查抄是确诊本病的靠得住方法。临床诊断不常用。(I)直接涂片涂片后用Giemsa或免疫荧光单克隆抗体染色，检测肺炎衣原体包涵体及原体，方法轻巧，但阳性率低。(2)构造培养法鸡胚卵黄囊接种因检出阳性率低已罕用。可用细胞培养法，取咽拭子或收集下呼吸道标本，用HEP-2细胞(喉癌细胞)或Hela229细胞培养24 h，再用肺炎衣原体特异性单克隆抗体染色，检测特异性包涵体。方法较繁杂，且较其他衣原体检出率低。3.免疫学检测是常用的诊断方法。(I)直接免疫荧光法用肺炎衣原体单克隆抗体染色，直接免疫荧光法检测肺炎衣原体抗原，方法特异灵活且急剧轻巧。(2)微量免疫荧光(MIF)法检测肺炎衣原体抗体，特异性IgM滴度彡1: 16和(或)IgG彡I 512或双份血清滴度4倍以上升高者，均可诊断急性传染。如IgM彡I 16或IgG彡I 512，则为既往传染。本方法特异性灵活性均较高，且可用于区分原发传染和再传染，是如今最常用且最灵活的血清学方法。但要清除血轮回中类风湿因子的感化。(3)补体联合抗体检测滴度彡I 64和(或)双份血清滴度4倍以上升高者，均可诊断急性传染，但不能用于早期诊断，亦不能区分为哪种衣原体传染。4. PCR法检测肺炎衣原体DNA，灵活性更高，且可和其他种衣原体区分，其特异性灵活性高于其他方法。据统计，PCR法检出率为50% 55%，而直接免疫荧光法及涂片法别离为24% 27%和6% 10%。用连接聚合酶链反响(LCR)检测，可进一步进步伶俐性及检出率，但尚未在临床应用。据报告，PCR-EIA法是一种急剧、轻巧的酶免疫测定法，能进步PCR对肺炎衣原体DNA的扩增检测效果，优于PCR法，更优于培养法。以上方法或多或少地存在着一些不足，如成本高、检出率低、程序繁琐等等，这些问题都是当前的行业难题。
发明内容本实用新型的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种可以快速定性检测血清样本中的肺炎衣原体IgM抗体的肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒。为了实现上述目的，本实用新型提供的技术方案为肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4_ ;所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成；所述反应膜是由用磷酸盐缓冲液稀释过的重组Cpn-Ag和用磷酸盐缓冲液稀释过的羊抗鼠IgG抗体包被的；所述反应膜设置在胶板上；所述胶板上部设置有1. 5cm宽的粗纤维滤纸；粗纤维滤纸的下部压住反应膜；所述胶板下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫和样品垫；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫宽O. 9cm ;所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫的上部压住反应膜；所述样品垫位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫的下部；所述样品垫的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫。本实用新型的有益效果为肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于肺炎衣原体IgM抗体的检测和控制效果明显。
图1为本实用新型提供的肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的盒体示意图。图2为本实用新型提供的肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的铝箔袋示意图。图3为本实用新型提供的肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的未切割前的反应板示意图。图4为本实用新型提供的肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒的切割后试纸条的不意图。其中，I为胶板，2为反应膜,3为粗纤维滤纸,4为鼠抗人IgM单抗金结合物垫,5为
样品垫。
具体实施方式
以下结合附图详细说明本实用新型的具体实施方式
。本实用新型有多种实施方式，实施例中只是用来表示实施过程及部分最终产品，并不限制本实用新型的其它实施方式。实施例1 :[0028]肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成,盒体内设置有铝箔袋；铝箔袋内设置有试纸条；试纸条由反应板切割而成；试纸条宽4_ ;反应板由胶板1、反应膜2、鼠抗人IgM单抗金结合物垫4、粗纤维滤纸3和样品垫5组成；反应膜2是由用磷酸盐缓冲液稀释过的重组Cpn-Ag和用磷酸盐缓冲液稀释过的羊抗鼠IgG抗体包被的；反应膜2设置在胶板I上；胶板I上部设置有1. 5cm宽的粗纤维滤纸3 ;粗纤维滤纸3的下部压住反应膜2 ;胶板I下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫4和样品垫5 ；鼠抗人IgM单抗金结合物垫4宽O. 9cm ；鼠抗人IgM单抗金结合物垫4的上部压住反应膜2 ;样品垫5位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫4的下部；样品垫5的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫4。本发明的检验原理本试剂盒是采用胶体金免疫层析技术原理，在硝酸纤维素膜上的检测线(T线)包被重组肺炎衣原体(Cpn-Ag)，在质控线(C线)包被羊抗鼠IgG抗体，在金标垫上包被胶体金标记的鼠抗人IgM单抗，用于定性检测血清(浆)样本中的肺炎衣原体IgM抗体(Cpn -1gM)。检测阳性样本时，样本中的肺炎衣原体IgM抗体可与胶体金标记的鼠抗人IgM单抗结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物及样本在硝酸纤维素膜内部向前流动。当复合物经过检测线(T线)时与包被的重组Cpn -Ag结合，形成“Au—鼠抗人IgM单抗一(Cpn -1gM) — (Cpn- Ag)”而凝集显色。剩余的胶体金标记鼠抗人IgM单抗与C线处包被的羊抗鼠IgG抗体结合而凝集显色，检测阴性样本时，样本中不含肺炎衣原体IgM抗体，致使不能形成免疫复合物，则只能在C线处显色。
一、制备中各指标的确定1.胶体金颗粒的选择1.1原理根据煮沸条件下氯金酸与柠檬酸三钠发生氧化还原反应制备胶体金。可以通过调节氯金酸和柠檬酸三钠的加入比例来改变和控制胶体金的颗粒大小。1. 2操作在IOOmL纯化水中加入O.1mL 10%氯金酸煮沸、在搅拌条件下加入不同体积的1%柠檬酸三钠溶液，煮沸5分钟，制备不同条件的胶体金颗粒，待其自然冷却回复至原体积。用鼠抗人IgM单抗标记不同颗粒的胶体金，然后再用企业参考品进行检测。其结果如表1:表1:1%柠檬酸三钠用量的选择实验(粒径选择)
权利要求1.肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，其特征在于盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4_ ;所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成；所述反应膜设置在胶板上；所述胶板上部设置有1. 5cm宽的粗纤维滤纸；粗纤维滤纸的下部压住反应膜；所述胶板下部依次设置有鼠抗人IgM单抗金结合物垫和样品垫；所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫宽0. 9cm ;所述鼠抗人IgM单抗金结合物垫的上部压住反应膜；所述样品垫位于鼠抗人IgM单抗金结合物垫的下部；所述样品垫的上部压住鼠抗人IgM单抗金结合物垫。
专利摘要本实用新型公开了一种肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒，检测试剂盒由盒体和盒盖组成，盒体内设置有铝箔袋；所述铝箔袋内设置有试纸条；所述试纸条由反应板切割而成；所述试纸条宽4mm；所述反应板由胶板、反应膜、鼠抗人IgM单抗金结合物垫、粗纤维滤纸和样品垫组成。本实用新型的有益效果为肺炎衣原体IgM抗体胶体金法检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点，整个操作时间仅需20分钟就可以判读结果。胶体金快速检测试纸条，以多表位的重组抗原为原料，具有操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高的特点，可单份检测，易于普及，对于肺炎衣原体IgM抗体的检测和控制效果明显。
文档编号G01N33/577GK202870098SQ20122035432
公开日2013年4月10日 申请日期2012年7月21日 优先权日2012年7月21日
发明者李习荣 申请人:北京中检安泰诊断科技有限公司