一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物制剂中七种成分含量的测定方法，属于中药领域，具体制备步骤为：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、UPLC检测、标准曲线的制定及结果计算。本发明的测定方法周期短、灵敏度高。
【专利说明】一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药分析领域，具体涉及中药成分的含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 该中药组合物由制何首乌、菊花、酸枣仁等多味中药组成，具有治疗抑郁失眠的功 效，含有绿原酸、二苯乙烯苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸等主要成分。目前其主要成分的 检测方法有胶束电动毛细管色谱法、高效液相色谱法、液质联用等方法，都不太理想，不能 有效的控制质量。
[0003] 为了能够有效的控制产品质量，保证公众的用药安全，必须对生产工艺的中间环 节进行质量控制，但是该中药组合物中的成分比较多，目前的方法检验周期长，重复性、灵 敏度等无法满足连续生产的需要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种周期短、灵敏度高的检测一种中药组合物中多种成分含 量的方法。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是： 一种中药组合物制剂中七种成分含量的测定方法，该中药组合物制剂由下列重量份的 原料药制成：何首乌150-270、酸枣仁145-275、桑椹160-255、灵芝80-135、百合75-160、 知母50-110、丹参120-200、菊花45-120、茯苓75-145、合欢花165-288,该含量测定方法由 以下步骤组成： A、 供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂l_2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取 10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇勻，即得； B、 对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、 槲皮苷、3,5_二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液； C、UPLC检测：色谱柱为C18,柱温40°C，流动相为乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脱：0-2min，10% 乙腈，90% 的 0? 1% 磷酸；2-2. 5min，10-12% 乙腈，90-88% 的 0? 1% 磷酸； 2. 5-20min，12% 乙腈，88% 的 0? 1% 磷酸；20-21min，12-95% 乙腈，88-5% 的 0? 1% 磷酸；检测波 长 340nm，流速为 0? 2-0. 4ml/min; D、 标准曲线的制定及计算结果：分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀 草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0. 5-5.OmL注入步骤c中超高效色谱仪中分 析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供 试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果 苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
[0006] 作为优选方式，所述步骤A中用0.2i!m滤膜过滤；所述步骤C中色谱柱为ACQUITY BEHC18，规格为 1. 7ii m，2.IX100mm，流速为 0? 4ml/min。
[0007] 优选的测定方法： A、 供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂l-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取 10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇勻，即得； B、 对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、 槲皮苷、3,5_二咖啡酰奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为 0? 032mg.mL\芒果苷浓度为0? 051mg.mL\二苯乙烯苷0? 492mg.mL\斯皮诺素0? 041mg. mL'木犀草苷 0. 021mg.mL'槲皮苷 0. 213mg.mL'3, 5-二咖啡酰奎宁酸 0. 047mg.ml/1 ; C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温40 °C，流动相为乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脱：0-2min，10% 乙腈，90% 的 0? 1% 磷酸；2-2. 5min，10-12% 乙腈，90-88% 的 0? 1% 磷酸； 2. 5-20min，12% 乙腈，88% 的 0? 1% 磷酸；20-21min，12-95% 乙腈，88-5% 的 0? 1% 磷酸；检测波 长 340nm，流速为 0? 2-0. 4ml/min; D、 标准曲线的制定及计算结果：分别将绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀 草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0. 5-5.OmL注入步骤c中超高效色谱仪中分 析，以色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供 试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果 苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
[0008] 优选的，其原料药的重量份比例为： 何首乌158 酸枣仁270 桑椹165 灵芝135 百合80 知母110 丹参125 菊花118 茯苓80 合欢花280。
[0009]或 何首乌265 酸枣仁147 桑椹250 灵芝81 百合158 知母55 丹参188 菊花50 茯苓145 合欢花170。
[0010] 或 何首乌225 酸枣仁163 桑椹220 灵芝83 百合113 知母50 丹参190 菊花45 茯苓113 合欢花178。
[0011] 或 何首乌165 酸枣仁228 桑椹173 灵芝110 百合75 知母75 丹参150 菊花78 茯苓78 合欢花218。
[0012] 或 何首乌200 酸枣仁200 桑椹200 灵芝100 百合100 知母66. 7 丹参166. 7 菊花66. 7 茯苓100 合欢花200。
[0013] 为实现上述技术方案，将该中药组合物制成胶囊剂、片剂或丸剂。
[0014] 所述片剂的制备方法包括以下步骤： a) 按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6-12倍量30%-70%乙醇， 加热回流提取1-3次，每次1-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60°C测定 相对密度为1. 10-1. 15,得醇提浸膏，备用； b) 按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10-15倍量水提取1-3 次，每次提取1-3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60°C测定相对密度约为1. 10-1. 15,得 水提浸膏，备用； c) 按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用； d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒， 整粒后，加入适当辅料，混匀，压片，包衣，即得。
[0015] 为了验证本发明的方法的可行性和精确度，作了如下的试验： 仪器精密度试验 分别精密吸取对照品溶液IUL，连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸面积的RSD分别为1. 22%、 L16%、L04%、0. 76%、L62%、L14% 和L22%，表明仪器精密度良好。
[0016] 稳定性试验 吸取实施例1中的供试品溶液，分别于〇、2、4、8、12、24h，进行测定，绿原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸峰面积的RSD分别为1. 24%、 1. 57%、1. 39%、I. 05%、0. 86%、0. 94%和1. 61%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
[0017] 重复性试验 按照实施例1中供试品溶液的制备方法制备6份，测定，结果样品中绿原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎宁酸的RSD分别为1. 02%，1. 15%， 0. 92%，1. 05%，1. 02%，0. 89%和1. 15%，表明方法的重复性良好。
[0018] 回收率试验 精密称取己知含量的样品0. 5g，平行6份，分别加入一定量的对照品溶液，测定含量 并计算回收率，结果绿原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮诺素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡 酰奎宁酸的平均回收率为：96. 3%，98. 2%，100. 5%，99. 3%，97. 7%，97. 0%，96. 4%，RSD分别为 2. 06%，0. 54%，1. 44%，2. 04%，0. 18%，1. 42%，0. 95%，表明方法准确可靠。
[0019] 取5批次该中药组合物片剂，计算结果如下
【权利要求】
1. 一种中药组合物制剂中走种成分的含量测定方法，该中药组合物制剂由下列重量 份的原料药制成：何首乌150-270、酸巧仁145-275、桑植160-255、 灵芝80-135、百合 75-160、知母 50-110、丹参 120-200、菊花 45-120、巧冬 75-145、 合欢花 165-288,其 特征在于该含量测定方法由W下步骤组成： A、 供试品溶液的制备；称取该中药组合物制剂l-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取 10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得； B、 对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀草巧、 搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液； C、 UPLC检测；色谱柱为C18,柱温4(TC，流动相为己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脱；0-2min，10% 己膳，90% 的 0. 1% 磯酸；2-2. 5min，10-12% 己膳，90-88% 的 0. 1% 磯酸； 2. 5-20min，12% 己膳，88% 的 0. 1% 磯酸；20-21min，12-95% 己膳，88-5% 的 0. 1% 磯酸；检测波 长 340nm,流速为 0. 2-0. 4ml/min ; D、 标准曲线的制定及计算结果：分别将绿原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀 草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎宁酸对照品溶液0. 5-5. OmL注入步骤C中超高效色谱仪中分 析，W色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供 试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果 巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎宁酸的含量。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述步骤A中用0. 2 y m滤膜过滤； 所述步骤C中色谱柱为AC卵ITY 邸H C18，规格为1. 7 y m，2. 1 X lOOmm,流速为0. 4 ml/ mi打。
3. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于： A、 供试品溶液的制备；称取该中药组合物制剂l-2g，加甲醇50ml，称定重量，超声提取 10-30min，放冷、称重，用甲醇补足重量，过滤，摇匀，即得； B、 对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀草巧、 搬皮巧、3,5-二咖啡醜奎宁酸对照品，加甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，绿原酸浓度为 0. 032 mg. m。、芒果巧浓度为0. 051mg. m。、二苯己帰巧0. 492mg. m。、斯皮诺素0. 041mg. m。、木犀草巧 0. 021mg. m。、搬皮巧 0. 213mg. mL-i、3, 5-二咖啡醜奎宁酸 0. 047mg. mL-i ; C、 UPLC检测；色谱柱为C18，柱温4(TC，流动相为己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脱；0-2min，10% 己膳，90% 的 0. 1% 磯酸；2-2. 5min，10-12% 己膳，90-88% 的 0. 1% 磯酸； 2. 5-20min，12% 己膳，88% 的 0. 1% 磯酸；20-21min，12-95% 己膳，88-5% 的 0. 1% 磯酸；检测波 长 340nm,流速为 0. 2-0. 4ml/min ; 标准曲线的制定及计算结果：分别将绿原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀草 巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎宁酸对照品溶液0. 5-5. OmL注入步骤C中超高效色谱仪中分 析，W色谱峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供 试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、芒果 巧、二苯己帰巧、斯皮诺素、木犀草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎宁酸的含量。
4. 根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物原料药的重量 份比例为： 何首乌200 酸巧仁200 桑植200 灵芝100 百合100 知母66. 7 丹参166. 7 菊花66. 7 巧冬100 合欢花200。
5. 根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于所述药物剂型为胶囊剂、片 剂或丸剂。
6. 权利要求5所述的测定方法，其特征在于所述片剂的制备方法包括W下步骤： a) 按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸巧仁，加6-12倍量30%-70%己醇， 加热回流提取1-3次，每次1-3小时，提取液过滤，合并，减压回收己醇，浓缩至在6(TC测定 相对密度为1. 10-1. 15,得醇提浸膏，备用； b) 按比例称取选净的桑植、巧冬、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10-15倍量水提取1-3 次，每次提取1-3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在6(TC测定相对密度约为1. 10-1. 15,得 水提浸膏，备用； C)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用； d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤C)所得百合细粉干燥制粒， 整粒后，加入适当辅料，混匀，压片，包衣，即得。
【文档编号】G01N30/88GK104345110SQ201310342955
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年8月8日 优先权日:2013年8月8日
【发明者】刘敏彦, 赵韶华, 高学东, 张晨光 申请人:河北以岭医药研究院有限公司