一种sds-page电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法
【专利摘要】本发明公开了一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法，配方为：250ml乙醇，75ml冰乙酸，纯水定容到1000ml。方法为：取适量上述脱色液，将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1min，再静置15min后，更换脱色液，重复以上步骤两次就可以完成脱色，整个脱色时间1h内就可以完成。新的脱色液配方降低了乙醇和冰醋酸在整个脱色液中的比例，降低了成本。配合快速脱色方法，可以在1h内就完成整个脱色过程，方便快捷。操作简便，不要特殊设备。
【专利说明】—种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于电泳凝胶脱色技术，具体涉及了 SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方与快速脱色方法。
【背景技术】
[0002]聚丙烯酸胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis, SDS-PAGE)已成为现代生物学研究中重要的技术手段,是对蛋白质进行纯度及含量鉴定的一种经济、快速、可重复的方法。SDS-PAGE电泳基本原理是在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS)，SDS是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上，使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。SDS-PAGE电泳易于操作，用途广泛，它已成为许多研究领域中一种重要的分析技术。SDS-PAGE包括四个主要步骤，即:凝胶制备、电泳、染色、脱色。其中凝胶制备和电泳已有成熟的技术和专用设备，目前SDS-PAGE的凝胶染色主要方法有考马斯亮蓝染色和银染等，其中考马斯亮蓝染色应用最为广泛。然而考马斯亮蓝染色后需进行脱色，将聚丙烯酰胺凝胶上非特异性结合的考马斯亮蓝脱掉后，才能显示出清晰的电泳条带。一般情况下凝胶脱色需要用醋酸-甲醇或醋酸-乙醇脱色液在脱色摇床上至少脱色3 h，不能及时看到实验结果。
【发明内容】
[0003]本发明目的就是为了提供一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方与快速脱色方法。
[0004]本发明是通过以下技术方案实现的:
一种SDS- PAGE电泳凝胶脱色液的配方，每1000 ml所述的脱色液中含有下述原料:乙醇240~260 ml、冰乙酸70~80 ml，剩余的为去离子水。
[0005]一种SDS- PAGE快速脱色的方法，它包括以下步骤:
(1)凝胶清洗:电泳凝胶染色结束后，用纯水将胶清洗干净；
(2)第一次脱色:用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，静置13~16min后，将脱色液倒出，完成第一次脱色；
(3)第二次脱色:再次用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，静置13~16min后，将脱色液倒出，完成第二次脱色；
(4)第三次脱色:最后用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，再静置13~16min后，将脱色液倒出，完成脱色；
(5)结果保存:将胶进行扫描以及制备干胶。
[0006]所述电泳凝胶染色方法是考马斯亮蓝染色。[0007]本发明的优点是:
(I)可以在Ih内就完成整个脱色过程，而传统的脱色过程需要3h才能完成脱色。
[0008](2)新的脱色液配方降低了乙醇和冰醋酸在整个脱色液中的比例，乙醇降低了15%~20%的使用量，冰醋酸可以节约5%~?Ο%的使用量，节省了成本。
[0009](3)操作简单，无需特殊设备。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1:本发明的工艺流程图；
图2:基因工程原核表达猪干扰素α蛋白使用本发明方法脱色所得SDS-PAGE电泳图。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
一种SDS- PAGE电泳凝胶脱色液的配方，每1000 ml所述的脱色液中含有下述原料:乙醇240~260 ml、冰乙酸70~80 ml，剩余的为去离子水。
[0012]一种SDS- PAGE快速脱色的方法，它包括以下步骤:
(1)凝胶清洗:电泳凝胶染色结束后，用纯水将胶清洗干净；
(2)第一次脱色:用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热lmin，静置15min后，将脱色液倒出，完成第一次脱色；
(3)第二次脱色:再次用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热lmin，静置15min后，将脱色液倒出，完成第二次脱色；
(4)第三次脱色:最后用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热lmin，再静置15min后，将脱色液倒出，完成脱色；
(5)结果保存:将胶进行扫描以及制备干胶。
【权利要求】
1.一种SDS- PAGE电泳凝胶脱色液的配方，其特征在于:每1000 ml所述的脱色液中含有下述原料:乙醇24(T260 ml、冰乙酸7(T80 ml，剩余的为去离子水。
2.一种如权利要求1所述的SDS- PAGE快速脱色的方法，其特征在于:它包括以下步骤: (1)凝胶清洗:电泳凝胶染色结束后，用纯水将胶清洗干净； (2)第一次脱色:用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，静置13~16min后，将脱色液倒出，完成第一次脱色； (3)第二次脱色:再次用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，静置13~16min后，将脱色液倒出，完成第二次脱色； (4)第三次脱色:最后用上述配方的脱色液将胶浸没后，在微波炉内低火模式下加热1~1.2min，再静置13~16min后，将脱色液倒出，完成脱色； (5)结果保存:将胶进行扫描以及制备干胶。
3.根据权利要求2所述的SDS-PAGE快速脱色方法，其特征在于:所述电泳凝胶染色方法是考马斯亮蓝 染色。
【文档编号】G01N1/30GK103592354SQ201310526149
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月29日 优先权日:2013年10月29日
【发明者】赵俊, 王明丽, 周涛 申请人:赵俊, 王明丽