酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒，设有载体板、巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测线或点、对照线或点和硝酸纤维素膜等；硝酸纤维素膜粘贴在载体板的表面，巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测点、对照点自上而下依次设在硝酸纤维素膜上；在巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测点处分别包被对应的抗原或抗体；在对照线或点处包被巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗原或含巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。本实用新型一次性快速检测计生四项、操作简单，成本低、设计新颖，易于观察并做出诊断。
【专利说明】酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒
【技术领域】:
[0001]本实用新型涉及一种酶联免疫斑点技术一次性检测计生四种病毒(种)的试剂盒，属于医疗诊断计生四项联合试剂盒检测【技术领域】。
【背景技术】:
[0002]四项计生检测是针对育龄妇女在怀孕早期开展的旨在预防新生儿出生缺陷的一项重要的检测措施，它对于提高出生人口素质，减少新生儿出生风险具有重要的意义，已被医疗机构和孕产妇广泛接受和应用。四项计生检测包括风疹病毒，巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒。通过四项计生检测可检测出孕妇和胎儿是否存在感染的情况，并有针对性地治疗或终止妊娠。
[0003]目前应用免疫斑点法来检测诊断这四项疾病时，每项疾病的检测单独操作完成，各种试剂均为分散放置，没有特制的斑点反应板，所以检测过程复杂、时间长、携带及操作不方便。如:化学反应法及Elisa法均一次一种地操作及分别使用各自的试剂盒。
【发明内容】
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[0004]本实用新型的目的在于克服现有技术的缺点，把计生四项即四种不同的病种放到一个反应板上，一次性操作即可得出四种疾病的诊断结果，减少了频繁的操作程序，节约人力、物力、节省时间，易于观察并做出诊断。
[0005]为了实现上述发明目的，本实用新型设有载体板、巨细胞病毒(CMV)抗体(抗原)检测线(点)、弓形虫(TO)抗体(抗原)检测线(点)、风疹病毒(RV)抗体(抗原)检测线(点)、单纯疱疹病毒(HSV-1)抗体(抗原)检测线(点)、对照线(点)、硝酸纤维素膜(NC膜)、温育槽；硝酸纤维素膜粘贴在载体板的表面，巨细胞病毒抗体(抗原)检测线(点)、弓形虫抗体(抗原)检测线(点)、风疹病毒抗体(抗原)检测线(点)、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线(点)、对照线(点)自上而下依次设在硝酸纤维素膜上，并在各检测线(点)和对照线(点)四周制有温育槽；在巨细胞病毒抗体(抗原)检测线(点)、弓形虫抗体(抗原)检测线(点)、风疹病毒抗体(抗原)检测线(点)、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线(点)处分别包被对应的抗原(抗体);在对照线或对照点处自左至右分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。
[0006]本实用新型的制备方法如下:
[0007]1、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体(抗原)、弓形虫抗体(抗原)、风疹病毒抗体(抗原)、单纯疱疹病毒抗体(抗原)市售购买；
[0008]2、标准阳性血清的获得:
[0009]收集风疹病毒、巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒病人的阳性血清，得到阳性参照血清，定为标准阳性血清，_30°C冻存；[0010]阳性病人的血清必须经过Elisa实验，结果为阳性(显色明显，阳性OD值/阴性OD值≤2.1);经过荧光免疫实验(IFA)，结果为阳性结果。
[0011]3、硝酸纤维素膜的点样:巨细胞病毒抗体(抗原)检测线(点)、弓形虫抗体(抗原)检测线(点)、风疹病毒抗体(抗原)检测线(点)、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线(点)和对照线(点)自上而下依次设在硝酸纤维素膜上，并在各检测线(点)和对照线(点)四周制有温育槽；在硝酸纤维素膜的各病毒(种)检测线(点)上分别包被巨细胞病毒抗原(抗体)、弓形虫抗原(抗体)、风疹病毒抗原(抗体)、单纯疱疹病毒抗原(抗体)；在各对照线(点)上自左至右分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或自左至右分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清；晾干;
[0012]4、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记；
[0013]5、制备免疫斑点试剂盒
[0014]用切条机将载体板切成条状，将硝酸纤维素膜粘贴在载体板表面；和用酶标记的抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体及碱性磷酸酶底物或辣根过氧化物酶底物四甲基联苯胺TMB共同组成计生四项免疫斑点试剂盒；所述碱性磷酸酶底物是硝基蓝四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐BCIP比例为1:49的混合物。
[0015]本实用新型一次性快速检测计生四项、操作简单，成本低、设计新颖，易被使用者喜爱，更便于普及使用。
【专利附图】
【附图说明】:
[0016]1、图1为点状酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒结构示意图；
[0017]2、图2为线状酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒结构示意图。
【具体实施方式】:
[0018]下面通过附图和具体实施例对本实用新型做进一步阐述。
[0019]实施例1、
[0020]如图1所示，本实用新型设有载体板1、硝酸纤维素膜2粘贴在载体板I的表面，巨细胞病毒抗体(抗原)检测点3、弓形虫抗体(抗原)检测点4、风疹病毒抗体(抗原)检测点5、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测点6、对照点7自上而下依次设在硝酸纤维素膜2上，并在各检测线点和对照点四周制有温育槽8 ;在巨细胞病毒抗体(抗原)检测点3、弓形虫抗体(抗原)检测点4、风疹病毒抗体(抗原)检测点5、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测点6处分别包被对应的抗原(抗体);在对照点7处自左至右制有四个对照点9-12，分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。
[0021]如图2所示，本实用新型设有载体板1、硝酸纤维素膜2粘贴在载体板I的表面，巨细胞病毒抗体(抗原)检测线3、弓形虫抗体(抗原)检测线4、风疹病毒抗体(抗原)检测线5、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线6、对照线7自上而下依次设在硝酸纤维素膜2上，并在各检测线和对照线四周制有温育槽8 ;在巨细胞病毒抗体(抗原)检测线3、弓形虫抗体(抗原)检测线4、风疹病毒抗体(抗原)检测线5、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线6处分别包被对应的抗原(抗体);在对照线7处自左至右制有四条对照线9-12，分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。
[0022]酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒的制备:
[0023]1、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体(抗原)、弓形虫抗体(抗原)、风疹病毒抗体(抗原)、单纯疱疹病毒抗体(抗原)市售购买；
[0024]2、标准阳性血清的制备:
[0025]各收集50份风疹病毒、巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒阳性病人的血清，混合，得到阳性参照血清，定为标准阳性血清，_30°C冻存；
[0026]阳性病人的血清必须经过Elisa实验，结果为阳性(显色明显，阳性OD值/阴性OD值≤2.1);经过荧光免疫实验(IFA)，结果为阳性结果。
[0027]3、硝酸纤维素膜2的点样:巨细胞病毒抗体(抗原)检测线(点)3、弓形虫抗体(抗原)检测线(点)4、风疹病毒抗体(抗原)检测线(点)5、单纯疱疹病毒抗体(抗原)检测线(点)6和对照线(点)7自上而下依次设在硝酸纤维素膜2上，并在各检测线(点)和对照线(点)四周制有温育槽；在硝酸纤维素膜2的各病毒(种)检测线(点)上分别包被对应的抗原(抗体);在对照线(点)7处自左至右制有的四个对照线(点)9-12上分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清，晾干；
[0028]4、抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记；
[0029]5、制备免疫斑点试剂盒
[0030]用切条机将载体板切成条状，将硝酸纤维素膜2粘贴在载体板I表面；和用酶标记的抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体及碱性磷酸酶底物(硝基蓝四唑和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐比例为1:49的混合物)或辣根过氧化物酶底物(四甲基联苯胺)共同组成计生四项免疫斑点试剂盒。
[0031]实施例2、本实用新型酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒的使用方法
[0032]1、待测标本采用0.01mol/L PBS缓冲液进行1:50稀释。
[0033]2、取出载体板，吸取待测标本0.2mL-0.3mL，加入到温育槽内，于室温(18-25) V下温育30min。
[0034]3、吸去温育槽内液体，用2mL0.01mol/L PBS缓冲液冲洗各温育槽3次，每次5min。
[0035]4、加酶结合物:在温育槽内分别加入0.2mL-0.3mL酶结合物(采用碱性磷酸酶标记的二抗(相应的抗体)或辣根过氧化物酶标记的二抗(相应的抗体))，于18-25°C下温育30mino[0036]5、吸取槽内液体，用2mL0.01mol/L PBS缓冲液冲洗各温育槽3次，每次5min。
[0037]6、底物温育:在温育槽内分别加入0.2mL-0.3mL底物液:硝基蓝四唑(NBT)和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(BCIP)比例为1:49的混合物或四甲基联苯胺，于室温(18-25) °C下温育 IOmin0
[0038]7、终止:吸取槽内液体，用蒸馏水清洗各温育槽3次，每次Imin。
[0039]结果判定:将各硝酸纤维素膜风干后判定结果，任一条检测线出现黑色或蓝色特异性条带，就可判定为相应病毒的阳性。
【权利要求】
1.一种酶联免疫斑点计生四项联合试剂盒，其特征在于设有载体板、巨细胞病毒抗体或抗原检测线或检测点、弓形虫抗体或抗原检测线或检测点、风疹病毒抗体或抗原检测线或检测点、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测线或检测点、对照线或对照点、硝酸纤维素膜、温育槽；硝酸纤维膜粘贴在载体板的表面，巨细胞病毒抗体或抗原检测线或检测点、弓形虫抗体或抗原检测线或检测点、风疹病毒抗体或抗原检测线或检测点、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测线或检测点、对照线或对照点自上而下依次设在硝酸纤维膜上，并在各检测线或检测点和对照线或对照点四周制有温育槽；在巨细胞病毒抗体或抗原检测线或检测点、弓形虫抗体或抗原检测线或检测点、风疹病毒抗体或抗原检测线或检测点、单纯疱疹病毒抗体或抗原检测线或检测点处分别包被对应的抗原或抗体；在对照线或对照点处自左至右分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清。
【文档编号】G01N33/569GK203385727SQ201320512939
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年8月22日 优先权日:2013年8月22日
【发明者】苏冬梅, 张述智, 夏伟 申请人:青岛中仁药业有限公司