恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法
【专利摘要】本发明公开了一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法，属于化学发光酶联免疫检测【技术领域】。该检测试剂盒采用直接竞争法，试剂盒包括包被有恩诺沙星抗原的化学发光酶标板，恩诺沙星标准品，恩诺沙星酶标抗体，化学发光液和洗涤液。该试剂盒的使用方法包括如下步骤：（1）待测样品的前处理；（2）顺序加入恩诺沙星标准品溶液或样品、恩诺沙星酶标抗体，竞争反应后洗板，最后加入化学发光液通过化学发光免疫分析仪进行恩诺沙星的定量检测；（3）结果处理与分析。本发明提供的检测试剂盒灵敏度高、稳定性好，适合大量样品的筛查，具有重要的实际应用推广意义。
【专利说明】恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及化学发光酶联免疫检测【技术领域】，特别涉及一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法。
【背景技术】
[0002]诺沙星(Enrofloxacin,简称EF)是第一个畜禽专用的氟喹诺酮类药物，1987年由德国拜耳公司首先研制成功。恩诺沙星化学名为1-环丙基-6-氟-4-氧代-1，4-2氢-7-(4-乙基-哌嗪基)-3-喹啉羧基，易溶于碱性溶液，在水、甲醇中微溶，乙醇中不溶。其结构式见式1.2。
【权利要求】
1.一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于:所述检测试剂盒包括包被有恩诺沙星抗原的化学发光酶标板、恩诺沙星标准品、恩诺沙星酶标抗体、化学发光液和洗涤液；所述恩诺沙星抗原为培氟沙星与卵清蛋白的偶联物，所述的恩诺沙星抗原的包被浓度为0.5 mg/L O
2.根据权利要求1所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光酶标板为96孔可拆不透明白色发光板。
3.根据权利要求1所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的恩诺沙星标准品的浓度为lmg/mL，使用时用0.01 mol/L PBST将标准品稀释成浓度为0,0.01,0.03,0.09,0.27,0.81,2.43,7.29 μ g/L 的一系列恩诺沙星标准品溶液。
4.根据权利要求1所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标抗体为辣根过氧化酶标记的恩诺沙星单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的恩诺沙星酶标抗体的原浓度为lmg/mL，使用时用0.01 mol/L PBST稀释4000倍。
6.根据权利要求1所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光液由A液和B液组成，A液为将20mg对碘苯酚、8mg鲁米诺、1.21gTris溶于10mL去离子水，用盐酸调pH至8.4得到；B液为将体积分数0.40% H202、1.21gTris溶于10mL去离子水，用盐酸调pH至7.0得到；使用时将底物液和底物缓冲液按体积比1:1的比例混合。
7.根据权利要求1所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液为20倍浓缩洗涤液，为含有体积浓度0.5% Tween20的pH7.4 0.4mol/L的磷酸盐缓冲液，使用时用去离子水稀释成I倍洗涤液。
8.权利要求1?7任一项所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于包含如下步骤: (1)将试剂盒置于15?35°C平衡30min以上； (2)取出化学发光酶标板，往标准孔中加入不同浓度的恩诺沙星标准品溶液，样品孔中加入待测样品，然后每孔加入恩诺沙星酶标抗体，盖上盖板膜振摇混匀，孵育； (3)吸除板孔中的反应液，加入洗涤液洗涤，将酶标板拍干； (4)每孔加入化学发光反应液，轻拍混匀，盖上盖板膜，I?2min后用化学发光免疫分析仪测定各孔的发光值RLU ； (5)检测结果计算与分析，从而确定样品中恩诺沙星的含量。
9.根据权利要求8所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤(2)中所述的待测样品为肌肉或蜂蜜。
10.根据权利要求9所述的恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，当检测样品为肌肉时，肌肉要先经过以下预处理:称取均质后肌肉组织3份，每份各Ig置于3个15mL尚心管中，分别加入4mL去尚子水,充分振荡均勻,然后用尚心机以10000r/min的转速离心lOmin，分别吸取上层清液2mL于3个1mL离心管中，加入2mL正己烧,振荡1min,以10000 r/min的转速离心1min,除去上层正己烧层,取下层清液50 μ L待测； 当检测样品为蜂蜜时，蜂蜜要先经过以下预处理:称取3份样品每份Ig置于3个15mL离心管中，分别加入4mL蒸馏水，充分振荡均匀，再加入4mL乙酸乙酯，振荡20min，用离心机以10000 r/min的转速离心1min,吸取上层乙酸乙酯层2mL置于鸡心瓶中用旋转蒸发仪旋蒸至干，加入ImL正己烷溶解干燥物，再加入ImL去离子水复溶，去除上层正己烷层，取下层清液50 μ L待测。
【文档编号】G01N33/577GK104165991SQ201410356799
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2014年7月24日 优先权日:2014年7月24日
【发明者】路俊山, 曾道平, 陈莲英, 卢秋鸿 申请人:广州万联生物科技有限公司