一种罗氟司特中矿物油残留的检测方法与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种罗氟司特中矿物油残留的检测方法。

背景技术：

罗氟司特通过抑制磷酸二酯酶4(PDE4)减少炎症介质释放，进而减少慢性阻塞性肺疾病(COPD)等呼吸道疾病对肺组织的损伤，其化学合成路线较多，很多合成路线终末均在氢化钠和4-氨基-3，5-二氯吡啶反应液中进行，氢化钠的保存溶剂为矿物油，罗氟司特粗品中矿物油残留量很高。因此建立灵敏可靠的矿物油残留测定方法控制罗氟司特中矿物油残留限度显得十分重要。目前，医药卫生领域，关于矿物油的监控和检测方法文献报道较少，已有文献的报道主要集中在食品、水体和土壤中矿物油残留的检测。国内外还没有关于罗氟司特中矿物油监测的相关报道，鉴于此，有必要对罗氟司特中矿物油残留的检测方法进行研究，以制定严格的质量控制标准，保证药物质量的可控性，从而确保用药安全。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种罗氟司特中矿物油残留的测定方法，该方法主要对罗氟司特粗品、精制中间体和罗氟司特终产品中矿物油进行监控。

本发明罗氟司特矿物油残留检测方法的实现包括以下步骤：

(1)色谱条件：

矿物油为组分复杂的混合物，缺少显色基团，因此选用蒸发光散射检测器。采用SiO₂正相色谱柱，以乙醇和正己烷为流动相，按照梯度条件洗脱，流速0.8mL/min，柱温为30℃，理论塔板数按矿物油对照峰计算大于4000。

(2)供试品溶液的配制：

取罗氟司特供试品适量，精密称定，加丙酮溶解(若有需要可适当超声)并稀释制成每1mL约含10mg的溶液，作为供试品溶液。

(3)矿物油对照品溶液的配制：

对照品储备液：取矿物油对照品适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释制成每1mL约含1mg的溶液，作为对照品储备液。

对照品溶液：精密量取对照品储备液适量，加丙酮稀释分别制成每1mL约含5、10、20μg的溶液，作为对照品溶液。

系列对照品溶液：取矿物油对照品约200mg，精密称定，加丙酮稀释制成每1mL约含矿物油3.2μg、6.4μg、8μg、16μg、40μg、80μg的系列溶液，即得。

(4)矿物油定量方法：

蒸发光散射检测器的信号响应(峰面积A)与浓度(C)呈指数关系：A＝kC^b，取对数：lnA＝blnC+lnk，lnA与lnC呈线性关系；分别取供试品溶液和对照品溶液进样20μL注入色谱仪，采用三点对数线性回归曲线法进行定量。

本发明罗氟司特中矿物油残留的测定方法，上述(2)和(3)配制浓度分别为10μg·mL^-1和10mg·mL^-1的矿物油对照溶液和罗氟司特供试品溶液；取罗氟司特适量，用上述矿物油对照溶液溶解，制成每1mL约含罗氟司特10mg和矿物油10μg的溶液，作为供试品加标溶液；空白溶剂为丙酮，分别量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图(见附图1)，空白溶剂、矿物油对照和供试品的保留时间分别约为14.7min、4.1min和15.6min，该法能将矿物油峰与罗氟司特主药峰及其他杂峰有效分离，专属性良好。

本发明罗氟司特中矿物油残留的测定方法，按上述(3)配制3.24μg·mL^-1矿物油对照溶液，分别按信噪比S/N≈3和S/N≈10确立检测限和定量限，记录放大色谱图(见附图2)，矿物油检出限为19.45ng，定量限为32.42ng。

本发明罗氟司特中矿物油残留的测定方法，上述(3)矿物油系列对照品溶液配制：取矿物油对照品约200mg，精密称定，加丙酮稀释制成每1mL约含矿物油3.2μg、6.4μg、8μg、16μg、40μg、80μg的系列溶液，在3.24～81.04μg·mL^-1浓度范围内，其峰面积对数值(lnA)与浓度对数值(lnC)成显著线性关系，其线性相关系数为0.9970(见附图3)。

采用本发明测定罗氟司特粗品、精制中间体及罗氟司特终产品中矿物油残留量，结果表明精制工艺效果显著，终产品几乎不含矿物油。

本发明与已有技术相比的积极效果在于：

1、使用蒸发光散射检测器对罗氟司特中矿物油残留检测，克服了矿物油没有发色基团，用紫外检测器难以检测的缺点。传统方法常用衍生化反应，本发明采用蒸发光散射，无需进行复杂的衍生化反应，基线稳定，梯度洗脱范围广，有效提高了其检测灵敏度。

2、本发明将矿物油作为一个整体进行定量测定，操作简单，灵敏度高，方法准确，重现性好，可以满足作为内控标准监控罗氟司特粗品及成品中矿物油残留量的要求，保证产品质量，在各种测定中实用性很强。

附图说明

图1a为空白溶剂的色谱图；

图1b为矿物油对照溶液的色谱图；

图1c供试品溶液的色谱图；

图1d为供试品加标溶液的色谱图；

图2a为检出限放大色谱图；

图2b为定量限放大色谱图；

图3为矿物油残留量测定线性回归图。

具体实施方式

实施例1

1、色谱条件与系统适用性试验：

1.1、检测仪器的选择：由于矿物油内组分复杂，缺少显色基团，因此，为更好检测出矿物油，更好控制产品质量，我们选用了蒸发光散射检测器。

1.2、色谱条件的选择：

仪器：奥泰(Alltech)高效液相色谱仪(Alltech 626高效液相泵，Alltech ELSD 2000ES检测器)，华生分析仪器厂XWK-Ⅲ无油空气泵；Thermo Electron Corporation AS3000进样器；CBL Photoelectron Model 100Column Heater柱温箱；CSChrom Plus Version 3.6Build 3.6数据处理系统。采用Welch Materials SiO₂色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温为30℃，流速为0.8mL·min^-1，进样量为 20μL，流动相A为乙醇，流动相B为正己烷，梯度洗脱程序见表1。分别取供试品溶液和对照品溶液进样20μL，以蒸发光散射检测器检测，漂移管温度和雾化气流量分别为50℃和1.4L·min^-1。

表1梯度洗脱程序

2、供试品溶液的配制：

取罗氟司特供试品适量，精密称定，加丙酮溶解(若有需要可适当超声)并稀释制成每1mL约含10mg的溶液，作为供试品溶液。

3、矿物油对照品溶液的配制：

对照品储备液：取矿物油对照品适量，精密称定，加正己烷溶解并稀释制成每1mL约含1mg的溶液，作为对照品储备液。

对照品溶液：精密量取对照品储备液适量，加丙酮稀释分别制成每1mL约含5、10、20μg的溶液，作为对照品溶液。

系列对照品溶液：取矿物油对照品约200mg，精密称定，加丙酮稀释制成每1mL约含矿物油3.2μg、6.4μg、8μg、16μg、40μg、80μg的系列溶液，即得。

4、矿物油残留量的测定：

蒸发光散射检测器的信号响应(峰面积A)与浓度(C)呈指数关系：A＝kC^b，取对数：lnA＝blnC+lnk，lnA与lnC呈线性关系；分别取供试品溶液和对照品溶液进样20μL注入色谱仪，采用三点对数线性回归曲线法进行定量。

实施例2：专属性试验

为验证色谱方法的专属性，分别量取空白溶剂、矿物油对照溶液、供试品溶液和供试品加标溶液，按照实施例1色谱条件进行测定，记录色谱图，见图1，测定结果显示，空白溶剂、矿物油对照和供试品的保留时间分别约为14.7min、4.1min和15.6min，该法能将矿物油峰与罗氟司特主药峰及其他杂峰有效分离， 专属性良好。

实施例3：检测限和定量限试验

为验证色谱方法的检测限和定量限，量取3.24μg·mL^-1矿物油对照溶液，分别按信噪比S/N≈3和S/N≈10确立检测限和定量限，按照实施例1色谱条件进行测定，记录放大色谱图，见图2，测定结果显示矿物油检出限为19.45ng，定量限为32.42ng。

实施例4：线性和范围试验

为验证该方法的线性和范围，分别量取含矿物油3.2μg、6.4μg、8μg、16μg、40μg、80μg的系列溶液，按照实施例1色谱条件进行测定，在3.24～81.04μg·mL^-1浓度范围内，其峰面积对数值(lnA)与浓度对数值(lnC)成显著线性关系，其线性相关系数为0.9970，见图3。

实施例5：罗氟司特及含罗氟司特相关样品的矿物油含量检测

取罗氟司特各批样品，按照实施例1的供试品溶液配制方法配制10mg/mL供试品溶液，按照实施例1色谱条件进行测定，以外标法计算供试品中矿物油含量，结果见表2-4。结果显示，罗氟司特粗品和精制中间体中确有矿物油残留，经系列精制过程，终产品中矿物油未检出，残留量在检出限度以下。

表2各批罗氟司特粗品中矿物油含量检测结果

表3各批罗氟司特精制中间体中矿物油含量检测结果

表4各批罗氟司特终产品中矿物油含量检测结果