分离分析琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法与流程

本发明涉及化学分析领域，具体而言，本发明涉及分离分析琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法。
背景技术：
：琥珀酸曲格列汀(Trelagliptinsuccinate，结构如式1所示)是由日本武田(Takeda)公司原研的一种每周用药一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一种酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP))的失活，而这两种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。2015年3月曲格列汀片获得日本厚生劳动省的上市批准，原研厂家的曲格列汀片(Zafatek)为薄膜包衣片剂，有两种制剂规格，规格不同颜色不同(50mg淡黄赤色；100mg淡赤色)。两种规格制剂片芯颜色为白色。现有技术中专利CN104237421A提出了一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，其中所述有关物质是指琥珀酸曲格列汀合成过程中带有的杂质成分如溶剂、中间体、副产物等，未对琥珀酸曲格列汀及其制剂的降解产物进行全面的控制。本课题组成员在实验中发现，曲格列汀主峰后经常出现一未知杂质，此未知杂质在原料氧化降解条件下容易产生，而在制剂辅料相容性实验中发现，辅料不会产生该未知杂质，原料和相关辅料混合后容易产生该未知杂质，该杂质与主峰挨的很近，容易出现不准确积分现象。因此，为了准确的控制琥珀酸曲格列汀及其制剂的质量，有必要寻找一种简单、快速、准确分离检测出琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法。技术实现要素：本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种分离分析琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法，该方法可以实现对琥珀酸曲格列汀及其制剂质量的有效控制。曲格列汀及其制剂中的有关物质包括：TRE-E-IMP-11(式2)和TRE-E-IMP-13(式3)，结构式如下所示：另发现曲格列汀主峰后常跟随有一未知杂质A。在氧化降解后的样品中更易出现。本发明提供了一种分离分析琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)色谱条件：采用十八烷基键合硅胶为固定相，以缓冲液为流动相A、以有机溶剂为流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件：时间(分钟)流动相A(V％)流动相B(V％)085～5015～501085～5015～502550503050503185～5015～503585～5015～50(2)样品溶液的配制：采用流动相A将待测样品配制成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质检测。发明人通过大量实验意外发现，通过调整初始梯度洗脱的时间，重点选用辅料相容性实验样品，可以使有关物质检测中该未知杂质A与曲格列汀的分离度大于2.8，从而实现曲格列汀与有关物质的高效分离且不影响其它物质出峰。由此，采用该方法可以将曲格列汀与有关物质在同一色谱条件下进行快速高效的分离，并且该检测方法专属性强、精密度 高、准确性强、操作方便，可有效控制药品质量。根据本发明实施例的分离分析琥珀酸曲格列汀及其制剂有关物质的方法，还可以具有以下附加技术特征：根据本发明的实施例，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，优选为磷酸二氢钠缓冲液和磷酸二氢钾缓冲液中的至少一种，最优选为磷酸二氢钾缓冲液。由此，可以显著提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的具体实施例，所述缓冲液浓度为0.01～0.1mol/L，优选为0.01～0.05mol/L，最优选为0.02mol/L。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的具体实施例，所述缓冲液的pH值为2～4，优选为2.5～3.5，最优选为3.0。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的具体实施例，所述缓冲液中含含有0.3体积％的三乙胺。由此，可以有效改善色谱峰形。根据本发明的实施例，所述有机溶剂为选自甲醇和乙腈中的至少一种，优选为乙腈。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的具体实施例，初始梯度比例的平衡时间为3-15分钟，优选为10分钟。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的具体实施例，所述梯度洗脱条件为：时间(分钟)流动相A(V％)流动相B(V％)08515108515255050305050318515358515发明人发现，采用该洗脱条件可以使得曲格列汀与有关物质分离效果最佳，从而有效控制药品质量。根据本发明的实施例，梯度洗脱的流速0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。根据本发明的实施例，检测波长为210～280nm，优选为224nm。由此，由此，可以显著提高检测灵敏度。根据本发明的实施例，柱温为25～35℃，优选为30℃。由此，可以进一步提高曲格列汀与有关物质的分离效果。本发明所述的分析分离方法，可以依照以下方法实现：1)取待测样品磨碎，称取适量，用缓冲液溶解，配成每1mL含500μg的样品溶液。2)设定梯度洗脱的流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min；检测波长为210～280nm，优选为224nm；柱温为25～35℃，优选为30℃。3)取1)的样品溶液进样量为2～20μL，优选为10μL注入液相色谱仪，完成曲格列汀制剂的有关物质测定。发明发现，与现有技术相比，本发明方法的洗脱分离效果更好，能在短时间内使样品中各色谱峰有效分离，从而可以更有效的控制琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质，保障产品质量。附图说明图1显示了根据本发明的实施例1，所得样品的高效液相色谱图；图2显示了根据本发明的实施例2，所得样品的高效液相色谱图；图3显示了根据本发明的实施例3，所得样品的高效液相色谱图；图4显示了根据本发明的实施例4，所得样品的高效液相色谱图；图5显示了根据本发明的实施例4，所得空白辅料的高效液相色谱图；图6显示了根据本发明的实施例4，所得原料的高效液相色谱图；图7显示了根据对比例，所得杂质TRE-E-IMP-13的高效液相色谱图。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。曲格列汀片由曲格列汀原料、甘露醇、微晶纤维素、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠和硬脂富马酸钠组成。实施例1仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表1：表1流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图1所示。由图1可知：此色谱条件下，曲格列汀的出峰时间为15.012分钟，与其相邻的未知杂质A的出峰时间为16.379分钟，分离度为4.1。实施例2仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钠缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表2：表2流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图2所示。由图2可知：此色谱条件下，曲格列汀的出峰时间为14.184分钟，与其相邻的未知杂质A的出峰时间为14.902分钟，分离度为3.9。实施例3仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表3：表3流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图3所示。由图3可知：此色谱条件下，曲格列汀的出峰时间为12.674分钟，与其相邻的未知杂质A的出峰时间为13.296分钟，分离度为3.5。实施例4仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表4：表4流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：1、样品溶液：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液，然后在上述梯度洗脱 条件下进行分析，所得谱图如图4所示。2、空白辅料溶液：称取相当于25mg的曲格列汀的辅料至50ml量瓶，用流动相A溶解并定容至刻度，摇匀，滤过，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图5所示。3、原料药溶液：称取33.25mg曲格列汀原料至50ml量瓶，用流动相A溶解并定容至刻度，摇匀，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图6所示。由图4可知：此色谱条件下，样品溶液图谱曲格列汀的出峰时间为11.531分钟，与其相邻的未知杂质A的出峰时间为12.068分钟，分离度为2.8。由图5可知，空白辅料溶液图谱未出峰。由图6可知，原料药溶液图谱曲格列汀的出峰时间为10.663分钟，未知杂质A未出峰。实施例5仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，DAD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.01mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至2.0流动相B：甲醇梯度洗脱见下表5：表5流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细 粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液。分析结果表明：此色谱条件下，曲格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1.06)的分离度＞3.0，符合系统适用性要求。实施例6仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至4.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表6：表6流速：1.2mL/min波长：224nm柱温：30℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液。分析结果表明：此色谱条件下，曲格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1.06)的分离度＞3.0，符合系统适用性要求。实施例7仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.05mol/L的磷酸二氢钠缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至 3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表7：表7流速：1.0mL/min波长：224nm柱温：35℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取曲格列汀片(曲格列汀原料与微晶纤维素的比例为1:5)，用研钵研成细粉，称取细粉，用流动相A配制每mL含曲格列汀500μg的溶液。分析结果表明：此色谱条件下，曲格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1.06)的分离度＞3.0，符合系统适用性要求。对比例仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，VWD检测器色谱柱：十八基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相A：0.01mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(含0.3体积％的三乙胺)，用磷酸调pH至3.0流动相B：乙腈梯度洗脱见下表8：表8流速：1.0mL/min波长：278nm柱温：25℃进样量：10μL稀释液：流动相A实验步骤：取降解杂质TRE-E-IMP-13，用稀释液配制成每ml含TRE-E-IMP-1310μg，然后在上述梯度洗脱条件下进行分析，所得谱图如图7所示。由图7可知：此实施例中的洗脱条件与专利CN104237421A的梯度变化相近，在此色谱条件下，降解杂质TRE-E-IMP-13作为方法筛选的主要杂质与其他杂质并不能很好的分离，故认为专利CN104237421A中的方法用于降解杂质的分离分析不合理。在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页1 2 3