高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量，属于化学检测领 域。
【背景技术】
[0002] 利格列汀是一种二肽肽酶-4(DPP_4)抑制剂，适用作为2型糖尿病成年中膳食和运 动的辅助治疗改善血糖控制。利格列汀于2011年5月获得美国FDA批准上市，2011年6月在欧 洲获准上市，是一种具有新型作用机制的2型糖尿病(T2DM)治疗药物。临床试验结果证实， 利格列汀单用或与其他抗糖尿病药物联用，均能有效降低T2DM患者的糖化血红蛋白水平、 空腹血浆葡萄糖浓度和餐后2h血浆葡萄糖浓度，对体重无明显影响，发生低血糖的风险低， 肝功能下降和肾功能不全的T2DM患者无需调整给药剂量，具有较好的安全性及耐受性。
[0003] 但是利格列汀的对映异构体的含量对利格列汀的质量及用药安全有很大的影响， 为控制质量，本文建立了测定利格列汀对映异构体含量的方法。
[0004] 目前，一般使用物质的旋光特性来控制对映异构体，但缺点是无法得到定量结果。 本文建立的方法，通过正相色谱柱很好的分离利格列汀及对映异构体，同时还能保证良好 的线性范围，良好的稳定性，较好的准确度和精确度，而且研究的方法可以操作简单、快速 完成测试，测定结果准确可靠，从而可以有效的控制利格列汀原料药的质量，保证用药的安 全性和可靠性。
[0005] 因此，本研究采用高效液相色谱法，建立了一种阿哌沙班原料药中对映异构体的 测定方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种操作简单、快速，测定结果准确可靠的利格列汀原料药 中对映异构体的测定方法，来解决对映异构体含量的检测。
[0007] 本发明采用的技术方案为:高效液相色谱法测定利格列汀原料药中的对映异构体 含量，其创新点在于:包括样品配制、样品测定和结果计算步骤;所述样品配制步骤如下：
[0008] (1)样品溶液配制:取测试样品l〇mg，精密称定，置50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀 释至刻度，摇匀即得。
[0009] (2)对映异构体储备溶液配制：取利格列汀对映异构体对照品25mg，精密称定，置 25ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用 稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。
[0010] ⑶系统适用性溶液溶液配制：取利格列汀对照品l〇mg，精密称定，置50ml量瓶中， 精密量取杂质贮备液lml，置此量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
[0011] (4)空白溶液(稀释液)配制:正己烷:乙醇:三氟乙酸=60:40:0.1 (v/v)。
[0012] (5)利格列汀与对映异构体峰的分离度2 1.5;利格列汀峰的拖尾因子< 1.5;
[0013]
[0014] "，~HJ I1 HH,~~…1〇丄一一丄一~、泪色谱仪（配 DAD检测器）；大赛璐AD-H 250 X 4.6mm，5μπι正相色谱柱；30 °C柱温；10μ1进样量；230nm检测 波长；1.〇1111/111；[11流速;20111；[11运行时间 ；正己烧：乙醇：甲醇：二乙胺=50:30 :20:0.1流动相 系统;所述含量测定步骤为以面积归一法计算样品中对映异构体含量。
[0015] 有益效果:高效液相色谱法测定利格列汀原料药中对映异构体的含量，操作简单、 快速，测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。
【具体实施方式】
[0016] 高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量的方法，具体在于:样品配制、样品 测定和含量计算步骤;所述样品配制步骤如下：
[0017]
[0018] 实施例1
[0019]本发明发法专属性试验：
[0020]通过进样含有所有潜在杂质的供试品溶液作为专属性溶液，考察方法的专属性。 通过专属性试验确定各潜在杂质在该测定条件下的相对保留时间、分离度，确保所关注的 杂质能够被检测，确保空白溶液在利格列汀及对映异构体保留时间处无干扰，确保利格列 汀峰的峰纯度是纯的。
[0021 ]结果:空白溶液中，对映异构体及利格列汀峰保留时间处无干扰峰;所有峰均与利 格列汀峰分离，且分离度2 1.5;用DAD检测器检测利格列汀的峰纯度，是纯的。
[0022] 对映异构体出峰时间为11.9min;利格列汀出峰时间为14.5;已知杂质出峰时间为 7.3min;对映异构体与相邻峰的分离度为5.9;利格列汀与相邻峰的分离度为2.8.
[0023] 实施例2
[0024]本发明方法的准确度试验：
[0025] 方法的准确度通过考察样品中加入不同浓度的对映异构体的准确度来实现的。考 察对应异构体的浓度包括定量限浓度、0.5μg/ml对映异构体(0.25%)、1.Oμg/ml对映异构 体(0.5% )、1.5μg/ml对映异构体(0.75% )。每个浓度重复3次，回收率均符合100 ± 10%，相 对标准偏差< 5%。
[0026] 准确度由测量值/真实值X 100%计算所得。
[0027]
[0028] 实施例3
[0029]本发明方法的重复性试验：
[0030] 通过方法重复性和中间精密度两项来进行精密度试验。方法重复性通过重复配制 同一批供试品6次，每次进样2针，计算每份溶液中利格列汀的含量并考察结果的相对标准 偏差，RSD不超过10%;中间精密度通过不同的分析人员、在不同的工作日、用不同的仪器来 重复进行"方法重复性"验证，RSD不超过10% ;并且方法重复性和中间精密度结果的相对偏 差不超过10%，符合要求。 ^0ΛΟ? ?
[0032]
[0033] 实施例4
[0034] 本发明方法的检测限试验：
[0035] 根据对映异构体峰的响应，进样对映异构体低浓度的溶液，获得信噪比约为3:1的 溶液浓度，按照信噪比3:1计算对映异构体的检测限。
[0036] L0037J 买施例5
[0038]本发明方法的定量性试验
[0039] 根据对映异构体峰的响应，进样对映异构体低浓度的溶液，获得信噪比约为10:1 的溶液浓度，按照信噪比10:1计算对映异构体的定量限。
[0040]
[0041 ] 实施例6
[0042] 本发明方法的线性和范围
[0043] 方法的线性通过考察至少7个不同浓度溶液的线性来实现。以测得的峰面积对浓 度作图，呈良好的线性，并同时确定测定的范围。
[0044]
[0045]
[0046] 实施例7
[0047] 本发明方法的溶液稳定性
[0048] 配制专属性溶液进行溶液稳定性试验（至少48小时）。分别在0,3,6,12,24及48小 时进样检测。X小时与0小时溶液中对映异构体含量的绝对偏差均不大于0.05%，溶液在48h 内稳定性很好。
[0049]
[0050] 实施例8
[0051]本发明方法的耐用性试验
[0052] 通过改变流速、柱温、流动相比例等参数来考察测试方法的耐受性。每次测试仅改 变其中一个参数，参数改变范围为±10%，其结果与不改变参数时所测结果进行比较。对映 异构体和利格列汀的保留时间的偏差不大于15%，利格列汀拖尾因子均不大于1.5,分离度 均不小于1.5,符合要求。
[0053]
【主权项】
1. 高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量的方法，其特征是样品配制、样品测 定和含量计算步骤;所述样品配制步骤如下： 样品溶液配制：取测试样品l〇mg，精密称定，置50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻 度，摇匀即得； 对映异构体储备溶液配制：取利格列汀对映异构体对照品25mg，精密称定，置25ml量 瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀释剂 稀释至刻度，摇匀即得； 系统适用性溶液溶液配制：取利格列汀对照品l〇mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密量 取杂质贮备液lml，置此量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得； 空白溶液或稀释液配制：正己烷：乙醇:三氟乙酸=60:40: 0.1 (v/v); 5)利格列汀与对映异构体峰的分离度2 1.5;利格列汀峰的拖尾因子< 1.5;2. 根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量的方法，其特 征在于:所述的样品测定步骤为选用Agilent 1200具自动进样器的高效液相色谱仪且配 DAD检测器;大赛璐AD-H 250 X 4.6mm，5μπι正相色谱柱;30 °C柱温；10μ1进样量;230nm检测波 长；1.〇1111/111；[11流速；2〇111；[11运行时间；正己烧：乙醇：甲醇：二乙胺=50:30:20:0.1流动相系 统;所述含量测定步骤为以面积归一法计算样品中对映异构体含量。
【专利摘要】本发明涉及一种高效液相色谱法测定利格列汀对映异构体含量。包括样品配制、样品测定和结果计算步骤；取测试样品10mg，置50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。取利格列汀对映异构体对照品25mg，置25ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀即得。取利格列汀对照品10mg，置50ml量瓶中，精密量取杂质贮备液1ml，置此量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。正己烷:乙醇:三氟乙酸=60:40:0.1（v/v）。有益效果：高效液相色谱法测定利格列汀原料药中对映异构体的含量，操作简单、快速，测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105675754
【申请号】CN201610044595
【发明人】黄骏, 海宏, 臧亚
【申请人】江苏宝众宝达药业有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月22日