试样的分析方法及其中所用的溶液与流程

文档序号:13218897阅读:282来源:国知局
技术领域本公开涉及试样的分析方法、毛细管电泳用溶液、及试样分析用试剂合。

背景技术:
在临床检测的现场中血红蛋白(Hb)的分析被日常地进行。作为分析对象的血红蛋白种类根据检测的目的而不同。作为用于糖尿病的诊断或症状把握的分析对象HbA1c被广泛知晓。作为用于异常血红蛋白症的诊断的分析对象,HbS(镰状红血球血红蛋白)、HbC、HbD和HbE等所代表的变异血红蛋白类被使用。另外,作为用于β地中海贫血的诊断的分析对象,HbA2或HbF(胎儿血红蛋白)被广泛使用。血红蛋白的分析由离子交换色谱法等高速液体色谱(HPLC)法或毛细管电泳(CE)法进行(例如,专利文献1~4和非专利文献1等)。在专利文献1中记载有由阳离子交换色谱法进行的血红蛋白的分析方法。在非专利文中记载有通过阴离子交换色谱法进行的血红蛋白的分析方法。然而,HPLC法需要大型且高价的专用装置,装置的小型化和低成本化困难。在专利文献2中记载有通过在碱性pH中的自由溶液毛细管电泳法(毛细管区电泳、CZE)进行的血红蛋白的分析方法。在专利文献3中记载有在碱性pH且硼酸盐化合物的共存下进行毛细管电泳的血红蛋白的分析方法。在专利文献4中记载有作为准固定相使用含有阴离子性高分子的溶液的、通过阳离子交换动电色谱进行的血红蛋白的分析方法。在先技术文献专利文献专利文献1日本专利公开2014-95638号公报专利文献2日本专利公开2006-145537号公报专利文献3日本专利公表2012-531609号公报专利文献4日本专利公开2009-109230号公报非专利文献非专利文献1XuezhenKangelal.Anal.Chem.2002,74,1038-1045

技术实现要素:
专利文献1和非专利文献1的方法都是HPLC法,因此需要大型且高价的专用的装置,存在装置的小型化和低成本化困难的问题。专利文献2和3的方法至分析完成要长时间(例如,8分钟以上),另外由于所需要的毛细管长度长(例如,20cm以上)存在装置的小型化困难的问题。β地中海贫血症患者同时伴随着HbS等异常血红蛋白症的情况多,要求对HbS和HbA2进行分离,但是专利文献4的方法存在HbA2和作为比较主要的变异血红蛋白的HbS的分离困难的问题。本公开在一方式中提供HbS或HbA2中的至少一个的分离精度提高、能够缩短分析时间和使装置小型化的试样的分析方法、毛细管电泳用溶液、及试样分析用试剂盒。本公开在一方式中涉及试样的分析方法,所述分析方法包括通过毛细管电泳分离所述试样中的血红蛋白,且包括在包含阳离子性高分子的碱性溶液中进行所述血红蛋白的分离。本公开在一方式中涉及试样分析方法,所述分析方法包括:将试样导入填充了泳动液的毛细管流路中;以及向所述流路的全体或一部分施加电压而进行毛细管电泳、进行所述试样中的血红蛋白的分离,其中,所述泳动液是包含阳离子性高分子的碱性溶液。本公开在一方式中涉及用于血红蛋白分离分析的毛细管电泳用溶液,所述毛细管电泳用溶液具有阳离子性高分子和水,且是碱性。本公开在一方式中涉及试样分析用试剂盒,所述试样分析用试剂盒包括:容器,所述容器包括本公开的毛细管电泳用溶液;以及电泳芯片,所述电泳芯片具有试样保持槽、泳动液保持槽和毛细管流路,所述试样保持槽和所述泳动液保持槽通过所述毛细管流路连通。根据本公开,能够提供能够使装置小型化且能够提高HbS或HbA2中的至少一个的分离精度的试样的分析方法、毛细管电泳用溶液、及试样分析用试剂盒。附图说明图1A是示出毛细管电泳芯片的一实施方式的俯视图;图1B是图1A所示的电泳芯片的截面图;图2A和图2B示出由实施例1中的毛细管电泳法进行的电泳图谱的一例,图2A的样品是来自β地中海贫血患者的全血,图2B的样品是对照样本;图3A和图3B示出由实施例2中的毛细管电泳法进行的电泳图谱的一例,图3A的样品是来自β地中海贫血患者的全血,图3B的样品是对照样本;图4示出由实施例3中的毛细管电泳法进行的电泳图谱(样品:对照样本)的一例;图5示出由实施例4中的毛细管电泳法进行的电泳图谱(样品:对照样本)的一例;图6示出由比较例1中的毛细管电泳法进行的电泳图谱(样品:对照样本)的一例;图7示出由比较例2中的毛细管电泳法进行的电泳图谱(样品:对照样本)的一例。具体实施方式本公开在一方式中基于如下见解:通过在包含阳离子性高分子的碱性溶液中通过毛细管电泳进行试样中的血红蛋白的分离,能够短时间且高精度地分离试样中的血红蛋白的各部分(HbS或HbA2的至少一个)。虽然能够通过在包含阳离子性高分子的碱性溶液中通过毛细管电泳进行血红蛋白的分离能够短时间且高精度地分离试样中的HbS或HbA2的至少一个的机理还不明确,但是被如下地推测。血红蛋白的等电点在中性附近,因此在碱性溶液中血红蛋白带负电。带了负电的血红蛋白通过使负电极接触试样导入侧并施加电压向正电极侧移动。另一方面,阳离子性高分子从正电极侧向负电极侧移动。电泳中在带有负电荷的血红蛋白和带有正电荷的阳离子性高分子之间产生相互作用。在碱溶液中各血红蛋白部分的负电荷的程度存在差别,因此其电荷的差别被反映在各血红蛋白部分和阳离子性高分子的相互作用的差别上。其结果是,在HbA2和HbS的电泳速度上产生不同,因此认为HbA2或HbS中的至少一个的分离精度提高。但是,本公开也可以不被限定于这些机理地进行解释。[阳离子性高分子]在本公开中“阳离子性高分子”是指具有阳离子性基团或可被离子化成阳离子性基团的基团的高分子。阳离子性高分子在一个或多个实施方式中可以是具有阳离子性基团的单体的均聚物、或者具有阳离子性基团的单体和其它单体的共聚物或缩聚物。作为阳离子性基团,在一个或多个实施方式中可以举出包括氮的基团。作为阳离子性基团在一个或多个实施方式中可以举出具有伯氨基、仲氨基、叔氨基、亚氨基、季铵盐基等阳离子性基的高分子等,从分析精度提高的观点考虑优选为具有伯氨基、仲氨基、叔氨基的高分子,更优选为具有伯氨基的高分子。阳离子性高分子在一个或多个实施方式中优选为是水溶性的。阳离子性高分子从分析精度提高的观点考虑在一个或多个实施方式中优选为是直链的。阳离子性高分子能够单独或组合两种以上使用。作为具有伯、仲或叔氨基或者可被离子化成伯、仲或叔氨基的基团的阳离子性高分子,在一个或多个实施方式中可以举出聚烯丙基胺、聚乙烯胺、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚组氨酸、聚鸟氨酸、聚二烯丙胺、聚甲基二烯丙胺等。作为具有亚氨基或可被离子化成亚氨基的基团的阳离子性高分子,在一个或多个实施方式中可以举出聚乙烯亚胺等。作为具有季铵盐基或可被离子化成季铵盐基的基团的阳离子性高分子,在一个或多个实施方式中可以举出聚季铵盐、二甲胺-环氧氯丙烷共聚物等。在本公开中“聚季铵盐”是指包括来自具有季铵基的单体的构成单位的阳离子性高分子。聚季铵盐能够以INCI(InternationalNomenclatureforCosmeticIngredients)directory确认。作为聚季铵盐,在一个或多个实施方式中可以举出聚季铵盐-6(poly(diallyldimethylammoniumchloride)、聚季铵盐-7(copolymerofacrylamideanddiallyldimethylammoniumchloride)、聚季铵盐-4(Diallyldimethylammoniumchloride-hydroxyethylcellulosecopolymer)、聚季铵盐-22(copolymerofacrylicacidanddiallyldimethylammoniumchloride)等聚二烯丙基二甲基氯化铵和聚季铵盐-2(poly[bis(2-chloroethyl)eter-alt-1,3-bis[3-(dimethylamino)propyl]urea])等。作为二甲胺-环氧氯丙烷共聚物,在一个或多个实施方式中可以包括二甲胺-环氧氯丙烷以外的构成单位,例如可以包括乙二胺等。另外,作为阳离子性高分子,除了上述铵盐以外,在一个或多个实施方式中,也能够利用鏻盐、钖盐、锍盐、氟盐、氯盐等鎓盐阳离子高分子。作为具有酰肼基或可被离子化成酰肼基的基团的阳离子性高分子,在一个或多个实施方式中可以举出氨基聚丙烯酰胺等。作为阳离子性高分子,从提高分析精度和缩短测定时间的观点考虑,优选为聚乙烯亚胺、聚烯丙胺、聚赖氨酸及其组合,更优选为聚烯丙胺。阳离子性高分子的重量平均分子量在一个或多个实施方式中从分析精度提高的观点考虑,是1000以上、5000以上或10000以上,从抑制溶液的粘性增加的观点考虑,是500000以下或300000以下。[含有阳离子性高分子的碱性溶液]在本公开中“含有阳离子性高分子的碱性溶液”是指阳离子性高分子分散或溶解在介质中的碱性的溶液。作为介质在一个或多个实施方式中可以举出水等。作为水在一个或多个实施方式中可以举出蒸馏水、离子交换水、纯水和超纯水等。作为包含阳离子性高分子的碱性溶液在一个或多个实施方式中是包含阳离子性高分子和水的碱性水溶液。碱性溶液的pH在一个或多个实施方式中优选为比血红蛋白的等电点高,更优选为比HbS或HbA2中的至少一个的等电点高。HbS的等电点是7.2~7.3,HbA2的等电点是7.4~7.5,因此碱性溶液的pH在一个或多个实施方式中是7.5以上,从分析精度提高和测定时间缩短的观点考虑优选为8.5以上或9.5以上,从抑制血红蛋白变性方面考虑,优选为12.0以下或11.0以下。上述的pH是25℃的碱性溶液的pH,能够使用pH计测定,是电极的浸渍后30分后的数值。碱性溶液中的阳离子性高分子的含有量在一个或多个实施方式中从分析精度提高的方面考虑,是0.01%(W/V)以上、0.05%(W/V)以上或0.1%(W/V)以上,从抑制溶液的粘性增加方面考虑,是10.0%(W/V)以下、8.0%(W/V)以下或5.0%(W/V)以下。[试样]在本公开中作为“试样”在没有被限定的一个或多个实施方式中可以举出从试样原料配制的、或试样原料本身。作为试样原料在没有被限定的一个或多个实施方式中可以举出包括血红蛋白的或生物试样。作为生物试样在没有被限定的一个或多个实施方式中包括血液、含红血球成分的血液来源物等。作为血液,可以举出从生物采集的血液,在没有被限定的一个或多个实施方式中,可以举出动物的血液、哺乳类的血液、人类的血液。作为包括红血球成分的血液来源物,可以举出从血液分离或配制且包括红血球成分的,在没有被限定的一个或多个实施方式中,可以举出除去了血浆的血球部分、血球浓缩物、血液或血球的冷冻干燥物、对全血进行了溶血处理的溶血试样、离心分离血液、自然沉淀血液、洗净血球等。[试样分析方法]本公开在一方式中涉及试样的分析方法。本公开的试样分析方法在一方式中包括在包含阳离子性高分子的碱性溶液中通过毛细管电泳进行所述试样中的血红蛋白的分离。另外,本公开的试样分析方法在一方式中包括:向填充了泳动液的毛细管流路导入试样;以及向所述流路的全体或一部分施加电压而进行毛细管电泳,进行所述试样中的血红蛋白的分离,所述泳动液是含阳离子性高分子的碱性溶液。根据本公开,在包含阳离子性高分子的碱性溶液中进行试样中的血红蛋白的分离,因此在一个或多个实施方式中,能够提高HbS或HbA2中的至少一个的分离精度。根据本公开,在不被特别限定的一种或多种实施方式中,能够起到如下效果,在小型的装置中以短时间进行HbS或HbA2中的至少一个的分离,优选为能够提高HbS和HbA2的分离精度及分离速度。血红蛋白的分离在一个或多个实施方式中包括分离HbS或HbA2中的至少一个,优选为分离HbS和HbA2。另外,血红蛋白的分离在一个或多个实施方式中包括分离HbS或HbA2中的至少一个和HbF、HbC、HbD或HbE中的至少一个。在一个或多个实施方式中,本公开的试样分析方法包括使用泳动液进行血红蛋白的分离,所述泳动液是包含阳离子性高分子的碱性溶液。在一个或多个实施方式中血红蛋白的分离使用毛细管流路进行。毛细管流路在一个或多个实施方式中是内径100μm以下的管。管的截面形状没有特别限制,可以是圆形,可以是矩形,也可以是其它形状。另外,毛细管流路的长度在一个或多个实施方式中是10mm以上或20mm以上,且是150mm以下或60mm以下。毛细管流路的内径在一个或多个实施方式中是10μm以上或25μm以上,且是100μm以下或75μm以下。毛细管流路在一个或多个实施方式中优选为是以阳离子性物质或阴离子性物质覆盖的流路。通过以阳离子性物质覆盖能够使毛细管流路的内壁带正电,其结果是能够使毛细管流路内容易产生从负电极侧朝向正电极侧的电渗流。在以阴离子性物质覆盖了的情况下,虽然毛细管流路负地带电,但是通过碱性溶液所包含的阳离子性高分子与带负电的毛细管流路结合,毛细管流路的内壁被带正电,与上述同样地能够容易使毛细管流路内产生从负电极侧向正电极侧的电渗流。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中包括使毛细管流路内产生从负电极侧向正电极侧的液流。液流在一个或多个实施方式中优选为是电渗流。作为阳离子性物质在一个或多个实施方式中可以举出上述的阳离子性高分子、具有阳离子性官能基的硅烷偶联剂等。从分析精度提高的观点考虑,优选为具有季铵盐基的高分子。作为阴离子性物质在一个或多个实施方式中可以举出具有阴离子性基的多糖类、具有阴离子性官能基的硅烷偶联剂等。作为具有阴离子性基的糖类在一个或多个实施方式中可以举出硫酸化多糖类、羧酸化多糖类、磺酸化多糖类和磷酸化多糖类。在没有限定的一个或多个实施方式中,作为硫酸化多糖类可以举出硫酸软骨素、肝素、类肝素、褐藻糖胶或其它盐等。作为羧酸化多糖类,可以举出藻酸、玻璃酸或其盐。在具有阴离子性基的多糖类是盐的情况下,作为对离子,可以举出碱金属、碱土类金属、胺化合物、有机碱等离子。作为羧酸化多糖类的盐在一个或多个实施方式中可以举出钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、铵盐、Tris盐、精氨酸盐、赖氨酸盐、组氨酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐、二甲氨基乙醇盐、三乙醇胺盐、二乙醇胺盐、肌酸酐盐等。作为羧酸化多糖类在不被限定的一个或多个实施方式中可以举出藻酸或其盐(例如,藻酸钠)。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中优选使用毛细管流路被微芯片化了的毛细管电泳芯片进行。电泳芯片的大小在一个或多个实施方式中优选为是长度10mm~200mm、宽度1mm~60mm、厚度0.3mm~5mm或者是长度30mm~70mm、宽度1mm~60mm、厚度0.3mm~5mm。毛细管电泳芯片的没有被限定的实施方式后述。在一个或多个实施方式中,本公开的试样分析方法包括向毛细管流路的全体或一部分施加电压而进行毛细管电泳。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中包括使负电极与试样导入侧接触并施加电压,优选为包括使负电极接触试样导入侧,使正电极接触泳动液供应侧并施加电压。从分离精度提高的观点考虑,在一个或多个实施方式中,试样优选为是使用包含阳离子性高分子的碱性溶液配制的试样。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中包括使用包含阳离子性高分子的碱性溶液稀释试样原料从而配制试样。稀释率在一个或多个实施方式中是1.2倍~100倍、2倍~60倍或3倍~50倍。当在试样原料中以能给分离能力带来影响的程度包括离子成分时,稀释率在一个或多个实施方式中是2倍~1000倍、5倍~300倍或10倍~200倍。包括试样的配制所用的阳离子性高分子的碱性溶液在一个或多个实施方式中可以是与毛细管流路所填充的液体(运行缓冲液)相同的组合,也可以是不同的组合。碱性溶液在一个或多个实施方式中可以包括非表面活性剂型的两性离子物质或pH缓冲物质中的至少一种或用于抑制微生物的繁殖等的保存剂等。作为保存剂在一个或多个实施方式中可以举出叠氮化钠、羟苯乙酯、Proclin等。作为非表面活性剂型的两性离子物质在一个或多个实施方式中从分析精度提高的观点考虑优选为是不具有pH缓冲作用的物质,更优选为是在泳动条件的pH下不发挥或实质上不发挥pH缓冲作用的物质。作为非表面活性剂型的两性离子物质在一个或多个实施方式中从分析精度提高的观点考虑,优选为非表面活性剂型的甜菜碱,更优选地举出非表面活性剂型的磺基甜菜碱和羧基甜菜碱,进一步优选为在同一分子内不相邻的位置具有季铵阳离子和磺基(-SO3-)或羧基(-COO-)的非表面活性剂型的物质,更进一步优选为是非表面活性剂型磺基甜菜碱(NDSB)。在不被限定的一个或多个实施方式中,作为NDSB可以举出NDSB-201(3-(1-Pyridinio)-1-propanesulfonate,C8H11NO3S)、NDSB-211(Dimethyl(2-hydroxyethyl)ammoniumpropanesulfonate,C7H17NO4S)、NDSB-221(3-(1-methylpiperidin-1-ium-1-yl)propane-1-sulfonate,C9H19NO3S)、NDSB-195(Dimethylethylammoniumpropanesulfonate,C7H17NO3S)和NDSB-256(Dimethylbenzylammoniumpropanesulfonate,C12H19NO3S)。在不被限定的一个或多个实施方式中,作为pH缓冲物质只要是在泳动条件的pH下具有pH缓冲作用的即可。在不被限定的一个或多个实施方式中作为pH缓冲物质可以举出MOPS(3-Morpholinopropanesulfonicacid)、TES(N-Tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonicacid)、HEPES(2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonicacid)、TRICINE(N-[Tris(hydroxymethyl)methyl]glycine)、PIPES(Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonicacid))、POPSO(Piperazine-l,4-bis(2-hydroxy-3-propanesulfonicacid),dihydrate)、碳酸、磷酸、硼酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、牛磺酸、天冬氨酸、天冬酰胺、羟脯氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸、鸟氨酸、色氨酸、三羟甲基氨基甲烷、二甲氨基乙醇、三羟乙基胺、二乙醇胺、单乙醇胺、N-甲氨基乙醇、肌酸酐、咪唑、巴比妥、氨、乙胺、二乙胺、三乙胺等。作为其它pH缓冲物质在不被限定的一个或多个实施方式中可以举出1,4-丁二胺等二胺化合物。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中包括检查由毛细管电泳分离的血红蛋白部分。检测在一个或多个实施方式中能够通过以下方式进行,通过光学手法检测由毛细管电泳分离的血红蛋白部分。作为由光学手法进行的检测,例如可以举出吸光度的测定。作为吸光度的波长在一个或多个实施方式中可以举出415nm。本公开的试样分析方法在一个或多个实施方式中还可以包括解析由光学手法得到的电泳图谱的工序。在一边连续进样一边进行分离(毛细管电泳)的情况下,虽然从所得到的电泳图谱个别分析试样中的血红蛋白困难,但是能够通过进行解析处理个别分离/分析试样中的血红蛋白。解析工程可以包括通过对电泳图谱进行运算处理来得到根据移动度(分离时间)分离的电泳图谱,也可以包括基于进行运算处理而得到了的电泳图谱中的各峰的高度和/或峰的面积求出试样中的血红蛋白的成分比。作为运算处理,例如可以举出微分处理、差分处理。本公开在一方式中涉及试样中的血红蛋白的测定方法,所述测定方法包括使用本公开的试样分析方法测定试样中的血红蛋白。试样如上所述。在没有被限定的一个或多个实施方式中,本公开的测定方法包括对作为异常血红蛋白症的指标的HbS或作为β地中海贫血的指标的HbA2中的至少一种进行测定。从而,本公开作为其它方式涉及血红蛋白的测定方法,测定方法包括使用本公开的试样分析方法来测定HbS或HbA2中的至少一个。本公开的测定方法从同时进行β地中海贫血和异常血红蛋白症的诊断的观点考虑,优选为使用本公开的试样分析方法分离HbS和HbA2从而进行测定。[毛细管电泳用溶液]本公开在一方式中涉及毛细管电泳用溶液,所述毛细管电泳用溶液含有阳离子性高分子和水且是碱性。在本公开中“毛细管电泳用溶液”在一个或多个实施方式中是指在毛细管电泳中毛细管流路所充填的液体。本公开的毛细管电泳用溶液在一个或多个实施方式中可以作为用于配制试样的溶液使用。本公开的毛细管电泳用溶液在一个或多个实施方式中能够在本公开的试样分析方法中使用,由此能够有助于试样的分析精度提高,更优选为能够有助于分析精度提高和测定时间缩短。作为本公开的毛细管电泳用溶液,能够使用包括上述阳离子性高分子的碱性溶液。[试样分析用试剂盒]本公开在一方式中涉及包括本公开的毛细管电泳用溶液的容器和包括毛细管电泳芯片的试样分析用试剂盒。在本公开的试样分析用试剂盒中,毛细管电泳芯片具有试样保持槽、泳动液保持槽和毛细管流路,是试样保持槽和所述泳动液保持槽通过所述毛细管流路连通着的电泳芯片。本公开的试样分析用试剂盒在一个或多个实施方式中能够在本公开的试样分析方法中使用,由此能够有助于试样的分析精度提高,优选为能够有助于提高分析精度和缩短测定时间。对毛细管电泳用溶液、毛细管流路和毛细管泳动芯片的说明和实施方式如上所述。[试样分析系统]本公开在一方式中涉及试样的分析系统,所述分析系统是使用毛细管电泳芯片分析试样的系统,包括:保持部,所述保持部保持包括本公开的毛细管电泳用溶液的容器和毛细管电泳芯片;电源部,所述电源部向所述毛细管电泳芯片施加电压;控制部,所述控制部根据分析的实施项目对向所述毛细管电泳芯片施加的电压的极性的切换进行控制。以下,对本公开的试样分析方法说明不被限定的一实施方式。(实施的方式1)使用图1所示的毛细管电泳芯片,以试样原料是全血的情况为例进行说明。图1是示出在本公开的试样分析方法中使用的毛细管电泳芯片的构成的不被限定的一个或多个实施方式的概念图。图1A是示出毛细管电泳芯片的一实施方式的俯视图,图1B是图1A所示的电泳芯片的截面图。图1A和图1B所示的毛细管电泳芯片包括毛细管流路10、试样保持槽11和泳动液保持槽12,试样保持槽11和泳动液保持槽12以毛细管流路10连通。在毛细管流路10中形成有检测部13。毛细管流路10的长度和内径、以及毛细管电泳芯片的大小如上所述。虽然试样保持槽11和泳动液保持槽12的容积根据毛细管流路10的内径和长度等被适当决定,但是在一个或多个实施方式中,分别是1mm3~1000mm3,优选为是5mm3~100mm3。试样保持槽11和泳动液保持槽12也可以分别包括用于向毛细管流路10的两端施加电压的电极。进行测定的位置、即分离所要的长度(从试样保持槽11到检测部13的距离、图1A中的x)能够基于毛细管流路10的长度等适当决定。在毛细管流路10的长度(图1A中的x+y)是10mm~150mm的情况下,到检测部13的距离(x)是5mm~140mm、10mm~100mm或15mm~50mm。毛细管流路10的材质可以举出玻璃、熔融石英、塑料等。作为塑料,例如可以举出聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚醚酮(PEEK)等。毛细管流路10可以是市售的毛细管。毛细管电泳芯片也可以使用市售的HbA1c用芯片。接着,对使用了图1所示的毛细管电泳芯片的试样的分析方法的一例进行说明。首先,在毛细管电泳芯片的泳动液保持槽12作为泳动液填充本公开的毛细管电泳用溶液(含有阳离子性高分子的碱性水溶液),通过毛细管现象将泳动液填充到毛细管流路10中。接着,在填充了泳动液的毛细管电泳芯片的试样保持槽11中配置试样。在试样保持槽11中配置的试样能够通过由本公开的毛细管电泳用溶液稀释作为试样原料的全血而配制。接着,使负电极与试样保持槽11、正电极与泳动液保持槽12接触,向毛细管流路10的两端,即试样保持槽11和泳动液保持槽12之间施加电压。由此,从试样保持槽11向毛细管流路10导入试样,包括血红蛋白的试样从试样保持槽11向泳动液保持槽12移动,并且血红蛋白的分离被进行。在不被限定的一个或多个实施方式中向毛细管流路10的两端施加的电压是500V~10000V或500V~5000V。然后,在检测部13中进行测定。测定例如能够通过波长415nm的吸光度的测定等光学手法进行。通过如上地进行分析,能够进行血红蛋白的测定,优选为能够分离并测定作为异常血红蛋白症的诊断的指标的HbS或作为β地中海贫血诊断的指标的HbA2。并且,通过解析所得到的电泳图谱,例如能够测定被分离了的各血红蛋白的比率(%)或其量。因此,本公开的试样分析方法能够利用在异常血红蛋白症或β地中海贫血的预防、诊断和治疗等的用途。本公开涉及以下一个或多个实施方式。〔1〕一种试样分析方法,包括通过毛细管电泳分离所述试样中的血红蛋白,且包括在含阳离子性高分子的碱性溶液中进行所述血红蛋白的分离。〔2〕一种试样分析方法,所述分析方法包括:将试样导入填充了泳动液的毛细管流路中;以及向所述流路的全体或一部分施加电压而进行毛细管电泳,进行所述试样中的血红蛋白的分离,其中,所述泳动液是含阳离子性高分子的碱性溶液。〔3〕如〔1〕或〔2〕所述的试样分析方法,其中,包括:使用含阳离子性高分子的碱性溶液配制所述试样。〔4〕如〔1〕至〔3〕中任一项所述的试样分析方法,其中,所述阳离子性高分子具有从由伯氨基、仲氨基、叔氨基、亚氨基、季铵盐基、酰肼基及其组合构成的组中选择的至少一种。〔5〕如〔1〕至〔4〕中任一项所述的试样分析方法,其中,所述碱性溶液的pH是7.5~12.0。〔6〕如〔1〕至〔5〕中任一项所述的试样分析方法,其中,所述碱性溶液还包括从由非表面活性剂型的两性离子物质、pH缓冲物质及其组合构成的组中选择的一种。〔7〕如〔2〕至〔6〕中任一项所述的试样分析方法,其中,所述毛细管流路对阳离子性物质或阴离子性物质进行固定化。〔8〕如〔2〕至〔7〕中任一项所述的试样分析方法,其中,包括使所述毛细管流路内产生从负电极侧向正电极侧的液流。〔9〕如〔2〕至〔8〕中任一项所述的试样分析方法,其中,包括使负电极接触所述试样导入侧并施加电压。〔10〕一种用于血红蛋白分离分析用的毛细管电泳用溶液,其中,含有阳离子性高分子和水,且是碱性。〔11〕如〔10〕所述的毛细管电泳用溶液,其中,所述阳离子性高分子具有从由伯氨基、仲氨基、叔氨基、亚氨基、季铵盐基、酰肼基及其组合构成的组中选择的至少一种。〔12〕如〔10〕或〔11〕所述的毛细管电泳用溶液,其中,还包括从由非表面活性剂型的两性离子物质、pH缓冲物质及其组合构成的组中选择的一种。〔13〕一种试样分析用试剂盒,包括:容器,所述容器包括〔10〕至〔12〕任一项所述的毛细管电泳用溶液;以及电泳芯片,所述电泳芯片具有试样保持槽、泳动液保持槽和毛细管流路,所述试样保持槽和所述泳动液保持槽通过所述毛细管流路连通。以下,使用实施例和比较例进一步对本公开进行说明。但是,本公开不被限定地解释为以下的实施例。实施例(实施例1)<电泳用溶液的配制>电泳用溶液1在纯水中添加下述各物质而配制。[电泳用溶液1]1.0%(W/V)聚乙烯亚胺(Wako生产、重量平均分子量70000)0.02%(W/V)叠氮化钠500mmNDSB-201(非表面活性剂型的磺基甜菜碱,3-(1-pyridinio)-1-propanesulfonate)3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.0<血红蛋白样品>作为血红蛋白样品,准备以下两种。·不包括HbS的来自β地中海贫血患者的全血·包括HbA、HbA2、HbS和HbF的对照样本(Bio-Rad公司生产)<分离设备和测定机器>作为分离设备,使用具有图1所示的构造的毛细管流路10的树脂制芯片(流路宽度40μm、流路高度40μm、流路长:30mm、分离长20mm)。试样保持槽11和泳动液保持槽12的容量为10μL。毛细管流路的内壁以聚二烯丙基二甲基氯化铵覆盖。测定装置使用本公司生产的电泳装置。<毛细管电泳>毛细管电泳通过以下的顺序以连续试样导入法进行。1.向芯片的泳动液保持槽12添加9μL电泳用溶液1,向毛细管流路10内填充电泳用溶液1。2.将以电泳用溶液1稀释到41倍的样品9μL添加到芯片的试样保持槽11中。3.使试样保持槽11与负电极、使正电极与泳动液保持槽12接触,施加1000V的电压而开始电泳。4.以检测部13测定415nm的吸光度,得到电泳图谱。电泳进行60秒。其结果示于图2A和图2B。图2A是使用来自β地中海贫血患者的全血的结果,图2B是使用对照样本的结果。如图2A和图2B所示,在任一样品中,通过使用包括聚乙烯亚胺的碱性的电泳用溶液,以20mm的有效毛细管长,在60秒以内,能够分离HbA2、HbS、HbA和HbF。(实施例2)除了使用下述电泳用溶液2代替向泳动液保持槽12添加的电泳用溶液1,使用下述电泳用溶液3代替用于样品的稀释的电泳用溶液1,测定时间为75秒以外,与实施例1同样地进行测定。[电泳用溶液2]1.0%(W/V)聚烯丙胺(NITTOBOMEDICAL生产、重量平均分子量25000)0.02%(W/V)叠氮化钠500mmNDSB-2013-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.8[电泳用溶液3]1.0%(W/V)聚烯丙胺(NITTOBOMEDICAL生产、重量平均分子量25000)0.02%(W/V)叠氮化钠3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.8其结果示于图3A和图3B。图3A是使用来自β地中海贫血患者的全血的结果,图3B是使用对照样本的结果。如图3A和图3B所示,在任一样品中,通过使用含有聚烯丙胺的碱性的电泳用溶液,以20mm的有效毛细管长,在75秒以内,能够分离HbA2、HbS、HbA和HbF。(实施例3)除了使用下述电泳用溶液4代替电泳用溶液1,施加的电压为1500V、测定时间为45秒以外,与实施例1同样地进行测定。作为血红蛋白样品,使用实施例1的对照样本。[电泳用溶液4]100mm精氨酸1.0%(W/V)聚L-赖氨酸盐酸盐(PEPTIDE研究所生产、重量平均分子量8000以上)0.02%(W/V)叠氮化钠3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.8其结果示于图4。如图4所示,通过使用包括聚L-赖氨酸的碱性的电泳用溶液,以20mm的有效毛细管长,在45秒以内,能够分离HbA2、HbS、HbA和HbF。(实施例4)除了使用下述电泳用溶液5代替电泳用溶液4,测定时间为80秒以外,与实施例3同样地进行测定。[电泳用溶液5]100mm精氨酸0.25%(W/V)聚乙烯亚胺(Wako生产、重量平均分子量1800)0.75%(W/V)聚烯丙胺(NITTOBOMEDICAL生产、重量平均分子量150000)3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.8其结果示于图5。如图5所示,通过使用包括聚乙烯亚胺和聚烯丙胺的碱性的电泳用溶液,以20mm的有效毛细管长,在70秒以内,能够分离HbA2、HbS、HbA和HbF的分离。(比较例1)除了使用下述的电泳用溶液6代替电泳用溶液1,施加的电压为1500V、测定时间为70秒以外,与实施例1同样地进行测定。作为血红蛋白样品,使用实施例1的对照样本。[电泳用溶液6]20mmMES1.0%(W/V)聚乙烯亚胺(Wako生产、重量平均分子量70000)0.02%(W/V)叠氮化钠3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH6.0其结果示于图6。如图6所示,在包括作为阳离子性高分子的聚乙烯亚胺、但不是碱性的电泳用溶液(pH6.0)中,对于HbA2、HbS、HbA和HbF分离都不能确认。(比较例2)除了使用下述电泳用溶液7代替电泳用溶液1,使正电极接触试样保持槽11、使负电极接触泳动液保持槽12以外,与比较例1同样地进行测定。[电泳用溶液7]100mm精氨酸1.0%(W/V)硫酸软骨素C钠(Wako生产)0.02%(W/V)叠氮化钠3-羟基丙磺酸(pH调节用)pH9.8其结果示于图7。如图7所示,在代替阳离子性高分子包括阴离子性高分子的电泳用溶液中,对于HbA2、HbS、HbA和HbF分离都不能确认。
当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1