一种褐藻及其制品中海藻酸含量的检测方法与流程

文档序号:12268143阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种褐藻及其制品中海藻酸含量的检测方法,该检测方法包括采用高效液相色谱法测定所述褐藻中海藻酸的含量,其中,所述高效液相色谱条件包括:

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱;

流动相:乙腈-磷酸二氢钾缓冲液。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的条件包括:

所述C18色谱柱柱长为150mm,柱内径为4.6mm;

优选地,所述填充剂的粒径为5-10μm,优选为5μm;

所述流动相中所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为50mmol/L;

优选地,所述乙腈-磷酸二氢钾缓冲液pH6.9;

优选地,所述乙腈和磷酸二氢钾缓冲液体积比为10-25:75-90,优选为15:85。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的条件还包括:

色谱柱柱温:30-70℃,优选为40℃;

流动相流速:0.5-2.5mL/min,优选为0.5-1mL/min,进一步优选为1mL/min;

检测波长:250-300nm,优选为250nm。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的供试品溶液按照以下步骤来制备:

(1)取褐藻,经90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解;

(2)在步骤(1)所得水解产物中加入氢氧化钠和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,置于50-80℃下水浴中30-90min;

(3)在步骤(2)所得的溶液中加入三氯甲烷进行萃取,取上层清液,滤过;

优选地,所述步骤(1)中,所述水解时间为0.5-3h;

优选地,所述步骤(2)中加入氢氧化钠是指加入浓度为0.2-2mol/L的氢氧化钠溶液;

优选地,所述步骤(2)中加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮是指加入浓度为0.5-2mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液;

优选地,所述步骤(3)中所述萃取次数为2-4次;

优选地,所述每次萃取时间为20-60min;

优选地,所述步骤(3)中所述滤过是指使用0.20-0.60μm水系膜过滤,优选0.45μm水系膜;

优选地,所述步骤(3)在冰水浴中进行。

5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的供试品溶液按照以下步骤来制备:

(1)取褐藻1.25g,置于25ml容量瓶,加水溶解,定容,后移取1ml于20ml容量瓶中,加入0.5-5ml的90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解0.5-3h,后冷却至室温,加入5ml水稀释后于82-90℃下水解30-90min;

(2)将步骤(1)所得水解产物置于冰水浴中冷却,经8mol/L的氢氧化钠溶液中和至pH值中性,后移置25ml容量瓶,定容,移取1ml于10ml容量瓶中,加入0.2-2mol/L氢氧化钠溶液0.5-5ml和0.5-2mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液0.5-5ml,混合均匀,置于50-80℃下水浴中30-90min,后经0.3mol/L醋酸中和至pH值中性,再加水定容至10ml;

(3)冰水浴条件下,取步骤(2)所得溶液2ml置于20ml容量瓶,加入4ml三氯甲烷以萃取剩余的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,萃取时间20-60min,弃去三氯甲烷层,反复萃取2-4次,取上层清液,经0.45μm水系膜过滤。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的对照品溶液按照以下步骤来制备:

(1)取海藻酸钠,经90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解;

(2)在步骤(1)所得水解产物中加入氢氧化钠和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,置于50-80℃下水浴中30-90min;

(3)在步骤(2)所得溶液中加入三氯甲烷进行萃取,取上层清液,滤过;

优选地,所述步骤(1)中所述水解时间为0.5-3h;

优选地,所述步骤(2)中加入氢氧化钠是指加入浓度为0.2-2mol/L的氢氧化钠溶液;

优选地,所述步骤(2)中加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮是指加入浓度为0.5-2mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液;

优选地,所述步骤(3)中所述萃取次数为2-4次;

优选地,所述每次萃取时间为20-60min;

优选地,所述步骤(3)中所述滤过是指使用0.20-0.60μm水系膜过滤,优选0.45μm水系膜;

优选地,所述步骤(3)在冰水浴中进行。

7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的对照品溶液按照以下步骤来制备:

(1)分别取海藻酸钠5mg、10mg、15mg、20mg、25mg,再分别加1ml水溶解,定容,后分别移取1ml于20ml容量瓶中,加入0.5-5ml的90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解0.5-3h,后冷却至室温,加入5ml水稀释后于82-90℃下水解30-90min;

(2)分别将步骤(1)所得水解产物置于冰水浴中冷却,经8mol/L的氢氧化钠溶液中和至pH值中性,后分别移置25ml容量瓶,定容,分别移取1ml于10ml容量瓶中,加入0.2-2mol/L氢氧化钠溶液0.5-5ml和0.5-2mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液0.5-5ml,混合均匀,置于50-80℃下水浴中30-90min,后经0.3mol/L醋酸中和至pH值中性,再加水定容至10ml;

(3)冰水浴条件下,分别取步骤(2)所得溶液2ml置于20ml容量瓶,分别加入4ml三氯甲烷以分别萃取剩余的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,萃取时间20-60min,弃去三氯甲烷层,反复2-4次,取上层清液,经0.45μm水系膜过滤,分别得到浓度为20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的对照品溶液。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述褐藻中海藻酸含量的检测方法包括以下步骤:

(a)制备供试品溶液:

(a-1)取褐藻1.25g,置于25ml容量瓶,加水溶解,定容,后移取1ml于20ml容量瓶中,加入0.5-5ml的90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解0.5-3h,后冷却至室温,加入5ml水稀释后于82-90℃下水解30-90min;

(a-2)将步骤(a-1)获得的水解产物置于冰水浴中冷却,经8mol/L的氢氧化钠溶液中和至pH值中性,后移置25ml容量瓶,定容,移取1ml于10ml容量瓶中,加入0.2-2mol/L氢氧化钠溶液0.5-5ml和0.5-2mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液0.5-5ml,混合均匀,置于50-80℃下水浴中30-90min,后经0.3mol/L醋酸中和至pH值中性,再加水定容至10ml;

(a-3)冰水浴条件下,取步骤(a-2)获得的溶液2ml置于20ml容量瓶,加入4ml三氯甲烷以萃取剩余的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,萃取时间20-60min,弃去三氯甲烷层,反复萃取2-4次,取上层清液,经0.45μm水系膜过滤;

(b)制备对照品溶液:

(b-1)分别取海藻酸钠5mg、10mg、15mg、20mg、25mg,再分别加1ml水溶解,定容,后分别移取1ml于20ml容量瓶中,加入0.5-5ml的90-98%的浓硫酸于75-90℃下进行水解0.5-3h,后冷却至室温,加入5ml水稀释后于82-90℃下水解30-90min;

(b-2)分别将步骤(b-1)所得的水解产物置于冰水浴中冷却,经8mol/L的氢氧化钠溶液中和至pH值中性,后分别移置25ml容量瓶,定容,分别移取1ml于10ml容量瓶中,加入0.2-2mol/L氢氧化钠溶液0.5-5ml和0.5-2mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮溶液0.5-5ml,混合均匀,置于50-80℃下水浴中30-90min,后经0.3mol/L醋酸中和至pH值中性,再加水定容至10ml;

(b-3)冰水浴条件下,分别取步骤(b-2)所得的溶液2ml置于20ml容量瓶,分别加入4ml三氯甲烷以分别萃取剩余的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮,萃取时间20-60min,弃去三氯甲烷层,反复2-4次,取上层清液,经0.45μm水系膜过滤,分别得到浓度为20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的对照品溶液;

(c)采用高效液相色谱法测定所述海藻酸的含量:

取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行测定,所述高效液相色谱包括:

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18色谱柱,优选地,所述色谱柱柱长为150mm,柱内径为4.6mm;优选地,所述色谱柱中填充剂的粒径为5-10μm,优选5μm;

色谱柱柱温:30-70℃,优选为40℃;

流动相流速:0.5-2.5mL/min,优选为0.5-1mL/min,进一步优选为1mL/min;

检测波长:250-300nm,优选为250nm;

所述流动相中所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为50mmol/L;优选地,所述乙腈-磷酸二氢钾缓冲液pH6.9;优选地,所述乙腈和磷酸二氢钾缓冲液体积比为10-25:75-90,优选15:85。

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