一种装填反相高效色谱柱的方法与流程

本发明涉及一种装填高效色谱柱的方法，具体涉及一种装填反相高效色谱柱的方法。

背景技术：

制备柱填充方法是柱技术中最关键的部分,也是决定柱效高低的主要因素之一。在利用制备色谱的生产实践中,一般对投入的设备更换较少,而是根据柱及分离产物选择固定相,因此好的装柱方法至关重要,以保证所得到的柱效率高、重现性好、渗透性好,使分离纯化过程成本达到最低。通常根据所选用填料的种类、粒度大小及柱尺寸,采用不同的装柱方法。一般所用装柱方法采用干装法，但是干装法用颗粒粒径小于20～25μm 的填料,用干装法不能得到高效柱。因为随着填料粒径的缩小,颗粒间的静电作用和表面能增大,彼此倾向于聚集和“成团”, 粘附在连接管及柱壁上,有时也会因强烈的静电作用彼此排斥,难以填装出均匀而紧密的柱床。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种装填反相高效色谱柱的方法， 主要解决现有色谱柱存在的拖尾峰和前沿峰的技术问题。

本发明的技术方案如下：一种装填反相高效色谱柱的方法，包括以下步骤：

1）使用气动增压泵提供动力源；

2）填料匀浆液的配制：将反相填料加入到四氢呋喃和氯仿匀浆液中，充分润湿之后超声0.5～2小时使填料分布均匀，得到半透明状匀浆液；

3）连接已清洗干净的匀浆灌和空柱管，在柱管中注入乙醇溶液，启动空压机，测试密封性；

4）将上述匀浆液加入到匀浆罐中，开启增压泵压入顶替液甲醇或者乙腈，待压力稳定后维持30～120min；

5）用质量百分含量1～5%水和质量百分含量99～95%乙腈混合溶液冲洗色谱柱2～5倍体积，得到反相高效色谱柱。

更为优选的方案是：所述步骤2）中四氢呋喃和氯仿体积配比1:1～1:5 ；优选1:1～1:3。

更为优选的方案是：所述步骤4）中顶替液冷藏保存4-8个小时；增压泵设定压力为35-45Mpa。

本发明的有益效果：通过本方法装填的反相高效色谱柱可以有效的解决拖尾峰及前沿峰，因此显著的提高了柱效和分离度，同时色谱柱装填成功率及效率也由80%提高到了90%以上。

附图说明

图1为FUJI填料色谱柱柱效图。

图2为DASIO填料色谱柱柱效图。

图3为YMC填料色谱柱柱效图。

图4为FUJI填料色谱柱柱效图。

其中：FUJI为富士120A、10um填料，DASIO为大曹120A、10um填料，YMC为120A、10um填料。

具体实施方式

现在市面上反相高效液相色谱填料种类很多，为了更好的证明该方法适用性。选取了几种不同品牌不同型号的填料装填色谱柱。

实施例1

称取FUJI填料150g放置于1L的烧杯中，加入四氢呋喃和氯仿混合溶液800mL，其体积比例为1:2, 搅拌超声至填料均匀分布，为半透明状液体。

连接柱管和匀浆罐，其中色谱柱柱管规格为30mm*250mm。启动增压泵在柱管中加入100mL无水乙醇， 测试连接处的气密性。

测试完成后，设定增压泵压力参数为40MPa。开启增压泵，在色谱柱柱管中注入匀浆液，压力慢慢开始上升。溶剂从柱管下端流出，压力上升至40MPa。待压力稳定后注入顶替液维持120min，顶替液为乙腈，使用前冷藏保存4小时。顶替结束后再用乙腈和水混合溶液冲洗3个柱体积，其乙腈和水质量比例为95:5，即可得到反相高效色谱柱。

用三种物质测试柱效，测定结果请见图1。测试条件见表1，测试结果见表2。

表1

表2

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实施例2

称取DASIO填料150g放置于1L的烧杯中，加入四氢呋喃和氯仿混合溶液700mL，其体积比例为1:3, 搅拌超声至填料均匀分布，为半透明状液体。

连接柱管和匀浆罐，其中色谱柱柱管规格为30mm*250mm。启动增压泵在柱管中加入100mL无水乙醇， 测试连接处的气密性。

测试完成后，设定增压泵压力参数为40MPa。开启增压泵，在色谱柱柱管中注入匀浆液，压力慢慢开始上升。溶剂从柱管下端流出，压力上升至40MPa。待压力稳定后注入顶替液维持80min，顶替液为甲醇，使用前冷藏保存6小时。顶替结束后再用乙腈和水混合溶液冲洗4个柱体积，其乙腈和水质量比例为97:3，即可得到反相高效色谱柱。

用三种物质测试柱效，测定结果请见图2。测试条件见表3，测试结果见表4。

表3

表4

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实施例3

称取YMC填料100g放置于1L的烧杯中，加入四氢呋喃和氯仿混合溶液400mL，其体积比例为1:1, 搅拌超声至填料均匀分布，为半透明状液体。

连接柱管和匀浆罐，其中色谱柱柱管规格为20mm*250mm。启动增压泵在柱管中加入100mL无水乙醇， 测试连接处的气密性。

测试完成后，设定增压泵压力参数为45MPa。开启增压泵，在色谱柱柱管中注入匀浆液，压力慢慢开始上升。溶剂从柱管下端流出，压力上升至45MPa。待压力稳定后注入顶替液维持100min，顶替液为乙腈，使用前冷藏保存8小时。顶替结束后再用乙腈和水混合溶液冲洗5个柱体积，其乙腈和水质量比例为98:2，即可得到反相高效色谱柱。

用三种物质测试柱效，测定结果请见附件图3。测试条件见表5，测试结果见表6。

表5

表6

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实施例4

称取FUJI填料150g放置于1L的烧杯中，加入四氢呋喃和氯仿混合溶液700mL，其体积比例为1:3, 搅拌超声至填料均匀分布，为半透明状液体。

连接柱管和匀浆罐，其中色谱柱柱管规格为30mm*250mm。启动增压泵在柱管中加入100mL无水乙醇， 测试连接处的气密性。

测试完成后，设定增压泵压力参数为35MPa。开启增压泵，在色谱柱柱管中注入匀浆液，压力慢慢开始上升。溶剂从柱管下端流出，压力上升至35MPa。待压力稳定后注入顶替液维持60min，顶替液为甲醇，使用前冷藏保存5小时。顶替结束后再用乙腈和水混合溶液冲洗5个柱体积，其乙腈和水质量比例为98:2，即可得到反相高效色谱柱。

用三种物质测试柱效，测定结果请见附件图4。测试条件见表7，测试结果见表8。

表7

表8

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