一种高山红景天甙的提取方法与流程

本发明涉及了一种红景天甙的提取方法，属于中草药提取分析领域，具体地说涉及了一种长白山道地植物高山红景天的红景天甙提取方法。

背景技术：

高山红景天（Rhodiola shalinensis A．Bor．）别名库页红景天，系景天科红景天属 (Rhodiola L．)，是一种生长在高海拔低温山区的多年生双子叶草本植物。在我国多分布于东北，是长白山地区的稀有珍贵药用植物之一。高山红景天的根、茎、叶、花、种子均可入药，有效成分为红景天甙、黄酮类化合物及多种微量元素，红景天具有抗氧化、抗疲劳、抗缺氧、抗寒冷、抗衰老、抗微波辐射等类似“适应原”功效。目前红景天的种类有200种之多，但仅有14种曾进行过生化研究，经鉴定发现红景天种类与其化学成分和药理活性具有相关性。

红景天甙（Salidroside）是从景天科植物高山红景天的干燥根及根茎或干燥全草中提取的一种化合物，是无色透明针状结晶体，易溶于水、乙醇、正丁醇、微溶于丙醇和乙醚。近年来，人们逐步侧重对红景天甙的药用和化学成分以及生物学特性进行研究，已经取得了丰硕的成果。红景天甙是甙元酪醇和尿苷二磷酸葡萄等代谢过程的上游产物，并对其代谢过程开展了深入的研究，所以，作为对红景天甙探索的第一步，红景天甙提取工艺就显得尤为重要。

红景天甙的提取方法根据提取方式的不同，主要分为：超临界CO2萃取法、溶剂回流提取法、醇提取法、超声提取法、水提取法、微波破碎提取法、和酶解法等。这些提取方法中，既有优点也有缺点。溶剂回流提取法是比较传统的提取红景天甙的方法，该方法的操作简单，成本低，设备要求不高，耗时较长；超声提取法是利用超声波的一种物理破碎过程，通过机械作用产生空化效应和热效应，使介质分子的运动速度增大，以破坏植物的细胞壁结构，促使物质扩散，使溶剂有效渗透到药材细胞中，从而使药材中的有效成分得到分离，缩短提取时间，最终达到提高产量和质量的目的。微波破碎提取是利用微波技术对植物的大分子物质进行萃取，以提高萃取效率的一种新技术，通过电磁场的作用使被提取物与其基体或者体系有效的分离，最终进入到极性比较接近的提取溶剂中，从而达到提取目的，此方法不仅缩短了提取时间，而且比传统的溶剂回流提取的方法的效率高、杂质少、节能和环保。酶提取法是利用植物体内酶的专一性的作用，对植物细胞成分进行处理，如纤维素酶能分解出一种糖苷键来破坏细胞壁，让植物细胞内的有效成分离并释放出来。但是该方法需要一定的温度，时间和pH值，才能够有效的提取出目的产物。如果温度过低纤维素酶不能够充分的表现，如果温度过高又会导致酶的结构变性，两者都会使酶活性降低，所以此方法一般较为少用。

技术实现要素：
针对上述不足，本发明的目的在于克服现有技术红景天甙提取方法中，红景天甙提取困难、纯度低的不足，提供一种新的红景天甙提取的方法，使得红景天甙提取更加高效。

本发明是按以下技术方案实现的：本发明的提取方法中，将常用的超声提取法进行改进，首先将样品置于微波炉中，功率500w，微波2min，微波后进行超声提取，离心，收集提取物，成功提取出了纯度高、杂质峰干扰少的红景天甙样品。

该方法的具体步骤如下：

1）、在长白山海拔高度为1700-2500 m 处采集高山红景天的野生苗。

2）、取步骤1）中高山红景天根5g，清洗干净，放入培养皿中；利用鼓风干燥箱80℃烘干；将样品研磨粉碎；过60目筛；称取1.0g干粉置于50ml离心管中；加入40ml重蒸水，漩涡震荡3min，将样品置于微波炉中，功率500w，微波2min；将超声波清洗仪设置60℃，超声提取5min；利用重蒸水将样品定容至50ml；用0.45um滤膜抽滤3次，制得红景天甙提取液；取100ul红景天甙提取液，利用HPLC检测，其色谱图在13.5-14分钟出峰， 证明提取液中含有红景天甙， 根据其峰值确定提取液中红景天甙含量。

本发明具有以下有益的效果：

1、本发明的红景天甙提取方法中，将常用的超声提取法进行改进，首先将利用微波处理样品，微波后进行超声提取，离心，收集提取物。成功提取出了纯度高、杂质峰干扰少的红景天甙样品。

2、本发明的方法对现有的超声提取法和微波破碎提取法进行了有创造性的结合与改进，具有突出的实质性特点和显著的进步，具体体现在 ： 本发明的提取方法中，将常用的超声提取法进行改进，首先将利用微波处理样品，将样品置于微波炉中，功率500w，微波2min，微波后进行超声提取，离心，收集提取物。成功提取出了纯度高、杂质峰干扰少的红景天甙样品。

3、本发明的方法较其它红景天甙提取方法相比，操作快速、高效，实用性强，经高效液相色谱法检测分析，本发明获得的红景天甙，峰型完整、杂质干扰峰少、红景天甙含量较高，为后续中草药药用成份分离提纯的研究奠定了坚实基础。

附图说明

图1为红景天甙标准品HPLC色谱图。

图2为现有技术中采用超声提取法提取的红景天甙样品HPLC色谱图。

图3为本发明采用超声+微波破碎提取法提取的红景天甙HPLC色谱图。

具体实施方式

下面结合实施案例对本发明作进一步说明：

1、红景天甙标准品HPLC检测

红景天甙标准品购自中国药品生物制品检定所，将红景天的标准品用乙腈/水(1/9)溶液溶解，在紫外可见光分光光度计上进行紫外的全波长扫描，分别记录扫描数据，绘制扫描后峰图，确定标准品检测波长。利用HPLC检测，其色谱图基线平整，峰型整齐，并且确定红景天甙在第13.5-14分钟出峰（如图1所示）。

2、采用现有技术超声提取法提取红景天甙：

1）、在长白山海拔高度为1700-2500 m 处采集高山红景天的野生苗。

2）、首先取上述1）中的高山红景天根5g，清洗干净，放入培养皿中，利用鼓风干燥箱80℃烘干，将烘干后的样品研磨粉碎，过60目筛；称取1.0g干粉置于50ml离心管中，加入40ml重蒸水，漩涡震荡3min； 将超声波清洗仪设置60℃，超声提取5min，利用重蒸水将样品定容至50ml；用0.45um滤膜抽滤3次，制得红景天甙提取液A；取100ul红景天甙提取液A，利用HPLC检测，其色谱图显示，在第13.5-15分钟并未出现明显峰型，杂质峰较多，说明样品分离并不明显，红景天甙含量低（如图2所示）。

3、采用超声+微波破碎提取法提取的红景天甙：

1）、在长白山海拔高度为1700-2500 m 处采集高山红景天的野生苗。

2）首先取上述1）中的高山红景天根5g，清洗干净，放入培养皿中，利用鼓风干燥箱80℃烘干，将烘干后的样品研磨粉碎，过60目筛；称取1.0g干粉置于50ml离心管中，在加入40ml重蒸水，漩涡震荡3min之后，将样品置于微波炉中，功率500w，微波2min，微波之后在将超声波清洗仪设置60℃，超声提取5min；利用重蒸水将样品定容至50ml，最后用0.45um滤膜抽滤3次；制得红景天甙提取液B；取100ul红景天甙提取液B，利用HPLC检测，其色谱图显示，样品在13.5-14分钟出现明显峰，峰型稳定，杂质峰较少，说明样品得到了有效分离，且红景天甙含量较高（如图3所示）。

所述上述1、2、3中的HPLC色谱条件：

色谱柱： Hypersil-C18 ( 5 μm，150 mm × 4． 6mm) ，流速：1 ml /min，进样量：10 μl，柱温 25℃ 。 检测波长280 nm，流动相：A 为甲醇，B 为水，变梯度洗脱为等度洗脱，具体条件见表1。

表1 梯度洗脱程序

本研究采用现有技术超声提取法和超声+微波破碎提取法分别进行了高山红景天甙的提取，并采用高效液相色谱系统（HPLC）对两种方法所得的红景天甙样本进行色谱分析，结果表明，采用现有技术超声提取法提取的红景天甙杂质峰较多，样品分离并不明显，红景天甙含量低；超声+微波破碎提取法获得的红景天甙，峰型完整、杂质干扰峰少、红景天甙含量较高。说明超声+微波破碎提取法更适用于高山红景天甙的提取。