一种防止溶液泄漏的聚丙烯酰胺凝胶制备方法与流程

本发明涉及一种防止溶液泄漏的聚丙烯酰胺凝胶制备方法，属于物理或化学装置技术领域。

背景技术：

聚丙烯酰胺(poly-acrylamide)凝胶电泳(gel electrophoresis)简称PAGE，是分子生物学研究中对少量蛋白质或核酸进行定性定量分析最常用最基本的方法。胶中加入十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，SDS)，即SDS-PAGE，不加SDS，则是Native PAGE。对于一般的蛋白质检测试验，目前实验室普遍使用上海天能和美国伯乐公司的微型垂直PAGE系统，制胶时使用玻璃板和垫条防止丙烯酰胺溶液的泄漏。但是，在制胶过程中，常常由于多种原因，如器具陈旧、玻璃板组装不到位等，使两块玻璃板底部封闭不严密，导致丙烯酰胺溶液凝固成胶前从玻璃板底部泄漏，制胶失败。

基于此，做出本申请。

技术实现要素：

针对现有聚丙烯酰胺制胶过程中所存在的上述缺陷，本身请提供一种密封性好、操作方便、可防止溶液泄漏的聚丙烯酰胺凝胶制备方法。

为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：

一种防止溶液泄漏的聚丙烯酰胺凝胶制备方法，先将两块玻璃的底部以琼脂糖凝胶密封，将其置于两个等高台上，并确保玻璃与等高台连接的两端水平，且玻璃下端与操作台面有间距，两玻璃底部以上的间隙形成制胶区，向该制胶区中加入制胶原料即可开始制胶。

进一步的，作为优选：

所述的玻璃密封前进行恒温处理，温度为45-60℃，时间3-8分钟。更优选的，温度控制在50℃，时间为5分钟。玻璃进行恒温处理，可有效降低玻璃与琼脂糖凝胶之间的温度差，在不影响琼脂糖凝胶活性的同时，确保快速凝固，达到快速密封的效果。

所述的琼脂糖凝胶是由琼脂糖溶液溶解于0.375mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.8)配制而成，其质量浓度为1％。

所述的密封是指：将琼脂糖凝胶自玻璃底部缝隙向玻璃中注入，再垂直拿稳使琼脂糖溶液遍布整块玻璃板底部。进一步的，作为优选：所述的琼脂糖凝胶注入后左右轻轻摇动2次使琼脂糖溶液遍布整块玻璃板底部，从而达到更加优良的密封效果。

所述的等高台采用试管架或制胶架。

与常规制胶方式相比，本申请的工作原理及有益效果如下：

1)本发明在制胶过程中使用的器械主要有移液枪、吸头、玻璃、保温箱、试管架或制胶架，上述设备均为分子生物学实验室常规仪器，无需购置特殊仪器设备，且操作过程中简便，实用性强。

2)本发明以两个玻璃所形成的间隙为主要制胶区，其底部采用琼脂糖凝胶进行密封，只需将制备聚丙烯酰胺凝胶的原料从两个玻璃所形成的间隙顶部注入，即可完成制胶，从根本上解决聚丙烯酰胺凝胶制备过程中溶液泄漏问题。

3)本发明所需设施较少，操作快捷，1分钟内可完成5个以上制胶区的组装，简单、方便、快速，有效减少溶液的浪费，确保胶块的数量和质量。

4)本申请以琼脂糖凝胶作为密封原料，在进行密封前将玻璃在50℃附近保温预处理后，再进行试验，可以很好的确保琼脂糖凝胶活性的同时，也不会因温度过高，影响凝固时间，且不会对电泳造成干扰，可适用于SDS-PAGE胶、Native-PAGE胶以及各种梯度胶的制备过程。

本发明使用分子生物学实验室常规仪器，无需购置特殊仪器设备，集简单、方便、快速、减少溶液浪费、确保胶块的数量等优点于一体的防止制胶过程中溶液泄漏的优良方法，适用于制备各类PAGE胶，如SDS-PAGE胶、Native-PAGE胶以及各种梯度胶的制备过程。

附图说明

图1为本申请所采用的设备结构示意图。

其中标号：1.前玻璃；2.后玻璃；3.等高台；31.卡块；4.试验台；a.底部；b.制胶区。

具体实施方式

实施例1

本实施例一种防止溶液泄漏的聚丙烯酰胺凝胶制备方法，图1所示为本实施例所搭建形成的制胶设备、器材和实验条件。

器材：①量程1mL的移液枪，②1mL吸头，③1％琼脂糖凝胶溶液，④组装好的制备聚丙烯酰胺凝胶的玻璃板。

采用恒温震荡培养箱作为恒温箱使用，温度调至50℃，但不使用其震荡功能。

在操作过程中，先取出50℃预热好的①～④，即量程1mL的移液枪、1mL吸头、1％琼脂糖凝胶溶液、玻璃板，在室温下操作。

首先，一只手将移液枪安装好吸头并吸取1％的琼脂糖溶液400μL，另一只手水平拿稳前玻璃1和后玻璃2，然后将移液枪头对准前玻璃1和后玻璃2的底部a的缝隙，将琼脂糖溶液快速注入，然后双手垂直拿稳前玻璃1和后玻璃2(尽量避免两者发生错位移动)，将其左右轻轻摇动两次，使琼脂糖溶液遍布整块玻璃板底部后，将其置于如图1所示两块等高台3(可选用试管架)上，用卡块31固定，并使前玻璃1和后玻璃2不接触任何物体，而其底部a距离试验台4有一定的距离，待琼脂糖溶液凝固并封住前玻璃1和后玻璃2的底部a缝隙，将待制备聚丙烯酰胺凝胶的原料从前玻璃1和后玻璃2顶部的制胶区b注入，即可进行聚丙烯酰胺凝胶的制备。

使用本实施例的方法，在1分钟内可将1％琼脂糖溶液注入5个以上组装好的前玻璃1和后玻璃2，待其冷却凝固后即可用于聚丙烯酰胺凝胶的制备。该方法对电泳不产生任何不良影响，适用于制备各类PAGE胶，集简单、方便、快速、减少溶液浪费、确保胶块的数量等优点于一体的防止制胶过程中溶液泄漏的优良方法。

以上内容是结合本发明创造的优选实施方式对所提供技术方案所作的进一步详细说明，不能认定本发明创造具体实施只局限于上述这些说明，对于本发明创造所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明创造的保护范围。