一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒的制作方法

本发明属于药物检测
技术领域：
，具体地，涉及一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒。
背景技术：
：大豆是一种重要的油料作物，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物大豆营养全面，含量丰富，其中蛋白质的含量比猪肉高2倍，是鸡蛋含量的2.5倍。蛋白质的含量不仅高，而且质量好。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质，还可以提炼大豆异黄酮。黄豆苷元又名大豆苷元，是大豆异黄酮的一种，由豆科作物中提取得到，黄豆苷元可用于高血压、症状性高血压、冠心病、脑血栓、心肌梗死、心律失常、妇女更年期综合征等的治疗。黄豆苷元分子式为C15H10O4，分子量：254.24。目前，检测黄豆苷元的方法有高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)和毛细管电泳法(HPCE)等仪器方法，但这些方法存在操作繁琐，检测前需要对样品进行复杂的预处理；耗时长；需要使用大型昂贵的仪器，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测。因此急需开发一种灵敏度高，检测速度快，特异性强的检测方法。技术实现要素：针对上述现有技术存在的不足，本发明提供了一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒，以解决上述技术问题。本发明通过以下技术方案实现：一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。优选地，所述维素膜上还包被有第二种动物蛋白的IgG，其可以与邻苯二甲酸检测用金标抗体结合反应并显色。优选地，所述检测大豆提取物的包被抗原为其半抗原制备而成。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：1、本发明中的试剂盒检测时间快、方便、稳定、且准确，适合范围广。2、本发明的检测方法，不需要对样品进行复杂的预处理，操作步骤简短，不需要使用大型昂贵仪器，不受实验仪器条件限制，有利于检测的现场进行，有利于实验设置落后的基层单位开展实验。4、本发明的试剂盒的检测结果与精确度较高的HPLC法检测结果非常接近，试剂盒的检测结果与真实结果准确度控制在95％左右，5次的平行检测结果平均偏差控制在12％以内，说明本发明的试剂盒检测结果准确度较高，基本可以符合现场大量样品筛选的胶体金试剂盒。附图说明图1是本发明的胶体金快速检测试剂盒盒盖结构示意图。图2本发明的胶体金快速检测试剂盒盒座结构示意图。图3是本发明的试纸条结构示意图。其中：加样孔1-1，观察窗1-2，品纸3-1，盒座2，样品纸2-1，玻璃纤维纸2-2，硝酸纤维素膜2-3，吸水纸2-4，璃纤维纸3-2，硝酸纤维素膜3-3，检测线3-31，质控线3-32吸水纸3-4。具体实施方式结合以下实施例对本发明作进一步描述。一种大豆药用提取物黄豆苷元的胶体金快速检测试剂盒，包括盒座，盒盖和试纸条，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述盒座上固定有所述试纸条，所述盒盖与盒座卡接，所述试纸条包括样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸，所述样品纸，玻璃纤维纸，硝酸纤维膜和吸水纸从左到右排列，依次衔接；所述玻璃纤维纸上包被有检测大豆提取物的金标抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有检测大豆提取物用的包被抗原，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个结合位点。优选地，述硝酸纤维素膜上还包被有第二种动物蛋白的IgG，其可以与邻苯二甲酸检测用金标抗体结合反应并显色。所述包被抗原为黄豆苷元完全抗原。优选地，所述检测大豆提取物的包被抗原为其半抗原制备而成。黄豆苷元属于小分子物质，其本身没有可供偶联的活性官能团(如氨基、羧基等)，因此无法与载体蛋白发生偶联反应产生特异性抗体的抗原，无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，因此需要对黄豆苷元分子进行修饰衍生化，接上活性官能团使其能与载体蛋白偶联则有可能形成抗原，这种经过人工修饰后的抗原称为人工抗原，而该衍生化产物则称为半抗原。以下将详细介绍黄豆苷元完全抗原的制备方法，制备过程包括以下步骤：(1)黄豆苷元半抗原；(2)用黄豆苷元半抗原制备黄豆苷元完全抗原。优选地，上述步骤(1)黄豆苷元半抗原的制备方法包括以下步骤：S1.将黄豆苷元溶于丙酮中，依次加入氢氧化钾溶液、碘化钾和溴乙酸乙酯，室温下搅拌反应；S2.向步骤S1的反应液中加入盐酸溶液进行中和，再加入蒸馏水，然后萃取后合并有机层，干燥过滤，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到粗品酯；S3.所得粗品酯用丙酮复溶，以氯仿和甲醇作展开剂，室温下进行薄层层析，得到目标产物酯；S4.将目标产物酯溶于甲醇中，加入氢氧化钾溶液进行反应；再用盐酸溶液中和，再加入蒸馏水，然后萃取后合并有机层，干燥过滤，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到目标产物。该黄豆苷元半抗原的制备方法步骤简单，合成的半抗原可以用于制备黄豆苷元完全抗原，为黄豆苷抗体的制备提供新的途径，制备的抗体安全有效，抗体的纯度也较高。满足了国内对该研究的需要，具有广阔的实际应用前景。优选地，上述步骤(2)黄豆苷元完全抗原的制备方法包括以下步骤：S1.将黄豆苷元半抗原、EDC和NHS溶于200μL的DMF中，室温搅拌反应过夜，即得活化好的黄豆苷元衍生物；S2.将载体蛋白溶于0.7％的氯化钠溶液中，再边搅拌边逐滴加入上述活化好的黄豆苷元衍生物，室温下反应1～5h，反应结束后，用0.7％的氯化钠溶液透析，即得到黄豆苷元完全抗原，分装后冷冻保存于-20℃。其中，优选地，步骤S1中的黄豆苷元半抗原、EDC和NHS的质量比为1：0.6～1.2：0.4～1。优选地，步骤S1中的黄豆苷元半抗原：DMF＝7mg/mL。优选地，步骤S2中的载体物质：氯化钠溶液＝11～20mg，1.8～2.5mL。优选地，步骤S2所述载体物质为蛋白质、蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽、多糖，如血清白蛋白、球蛋白、脂蛋白、多聚氨基酸或葡聚糖；或者所述载体物质为具有活性基团的其他合成或天然聚合物，如白喉毒素、破伤风毒素、酵母、尼龙、右旋葡聚糖或纤维素。实验例本发明的试剂盒与HPLC法对比，检测几种样品中黄豆苷元的含量，试剂盒法为实验组，HPLC法为对照组，每个处理重复3次，实验结果取平均值，结果如表1所示。表1样品实验组对照组5次结果偏差黄大豆5.62ppb6.14ppb9.6％黑大豆12.58ppb11.75ppb8.4％饲料豆19.31ppb20.67ppb11.5％综合表1中两种检测方法，比较可以得知，本发明的试剂盒的检测结果与精确度较高的HPLC法检测结果非常接近，试剂盒的检测结果与真实结果准确度控制在95％左右，5次的平行检测结果平均偏差控制在12％以内，说明本发明的试剂盒检测结果准确度较高，基本可以符合现场大量样品筛选的胶体金试剂盒。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页1 2 3