一种琥珀酸曲格列汀原料及其制剂中有关物质的分析方法与流程

本发明涉及化学药物分析方法
技术领域：
，尤其涉及一种琥珀酸曲格列汀原料及其制剂中有关物质的分析方法。
背景技术：
：琥珀酸曲格列汀(Trelagliptinsuccinate)，化学名为2-({6-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-3-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基}甲基)-4-氟苄腈琥珀酸盐，其分子式为C18H20FN5O2·C4H6O4，分子量为475.47，CAS号为1029877-94-8，其结构式如下：曲格列汀是一种二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂，通过抑制DPP-4的活性，使得血浆胰高血糖素样肽-1(GLP-1)活性水平持续升高，GLP-1是一种肠促胰素，具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌的特性，可通过促进β细胞的胰岛素分泌、抑制α细胞不适当的胰升糖素分泌、延缓胃排空及抑制食欲等多个途径参与机体血糖稳态调节；适用于2型糖尿病患者。琥珀酸曲格列汀是由日本武田(Takeda)公司开发上市的新型DPP-4抑制剂，2014年3月向日本卫生劳动福利部提交新药申请，2015年3月26日获批准以商品名上市，用于2型糖尿病的治疗，口服单剂量100mg，每周一次。琥珀酸曲格列汀的疗效在所有临床试验中均得到了证实，同时具有良好的安全性和耐受性，每周给药1次便可有效控制血糖水平，有望改善患者的用药依从性。为了保证药物的安全有效，需要对药物原料及其制剂中的有关物质进行研究、检测和监控。申请号为CN201410547100.6的专利公开了一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60：40-85：15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0-5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.1mol/L，检测波长为278nm。但该方法存在以下问题：1、该专利中未给出任何已知杂质，无法判断该方法的适用性；2、改方法的波长参数设置为278nm，不能涵盖所有杂质。由于药品的合成工艺不同，药品的杂质谱也会发生变化，因此需要根据不同的合成工艺建立合适的分析方法，达到对琥珀酸曲格列汀有关物质准确、有效的检测和监控。技术实现要素：基本
背景技术：
存在的技术问题，本发明提出了一种琥珀酸曲格列汀原料及其制剂中有关物质的分析方法，本发明检出的杂质多，各杂质峰与主峰之间均能有效分离，专属性高，灵敏度高，重复性好，中间精密度好，回收率高，能快速、有效、准确监控琥珀酸曲格列汀中的有关物质。本发明提出的一种琥珀酸曲格列汀原料及其制剂中有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以pH＝3.3-3.7的磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比为88-92：8-12为流动相A，以pH＝3.3-3.7的磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比为18-22：78-82为流动相B，检测波长为218-222nm，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程为：0.01-5min内，流动相A和流动相B的体积比为94：6；5-50min内，流动相A和流动相B的体积比从94：6匀速渐变至40：60；50-50.01min内，流动相A和流动相B的体积比从40：60匀速渐变至94：6；50.01-60min内，流动相A和流动相B的体积比为94：6。优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。优选地，流动相A中，pH＝3.3-3.7的磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比可以为88.5：11.5、89：11、89.5：10.5、90：10、90.5：9.5、91：9或91.5：8.5。优选地，流动相B中，pH＝3.3-3.7的磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比可以为18.5：81.5、19：81、19.5：80.5、20：80、20.5：79.5、21：79或21.5：78.5。优选地，检测波长可以为218.1、218.2、218.3、218.4、218.5、218.6、218.7、218.8、218.9、219、219.1、219.2、219.3、219.4、219.5、219.6、219.7、219.8、219.9、220、220.1、220.2、220.3、220.4、220.5、220.6、220.7、220.8、220.9、221、221.1、221.2、221.3、221.4、221.5、221.6、221.7、221.8或221.9nm。优选地，磷酸盐缓冲水溶液的pH可以为3.31、3.32、3.33、3.34、3.35、3.36、3.37、3.38、3.39、3.4、3.41、3.42、3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49、3.5、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56、3.57、3.58、3.59、3.6、3.61、3.62、3.63、3.64、3.65、3.66、3.67、3.68或3.69。优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，用磷酸调节pH＝3.3-3.7。优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度为0.02-0.03mol/L。优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度可以为0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028或0.029mol/L。优选地，磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾。优选地，流速为0.95-1.05ml/min。优选地，流速可以为0.96、0.97、0.98、0.99、1.0、1.01、1.02、1.03或1.04ml/min。优选地，柱温为30-40℃。优选地，柱温为30.5、31、31.5、32、32.5、33、33.5、34、34.5、35、35.5、36、36.5、37、37.5、38、38.5、39或39.5℃。优选地，进样量为5-50μl。优选地，进样量为6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49μl。优选地，所述有关物质为：上述杂质中，杂质1和杂质11为起始原料，杂质7为中间体，杂质3、4、6、8、9、10为工艺杂质，杂质2、5为降解杂质。本发明的具体步骤为：分别配制系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液并进样，通过加校正因子的主成分自身对照法计算供试品中各杂质的含量。上述系统适用性溶液为：分别取杂质1、2、3、4、6、8、10、11对照品各约12.5mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为杂质对照品贮备液一；另取杂质5、7、9对照品各约12.5mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品贮备液二；另取琥珀酸曲格列汀对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加初始比例流动相使溶解，取上述杂质对照品贮备液一、杂质对照品贮备液二各0.25ml置同一25ml量瓶中，加初始比例流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。上述供试品溶液为：取琥珀酸曲格列汀供试品适量，精密称定，用初始比例流动相溶解并定容得到含琥珀酸曲格列汀浓度为0.5mg/ml的供试品溶液。上述对照溶液为：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用初始比例流动相定容至刻度，摇匀得到对照溶液。上述初始比例流动相为流动相A和流动相B的体积比为94：6，即为空白溶剂。本发明人对琥珀酸曲格列汀、杂质1-11分别进行紫外吸收光谱扫描，结果见表1和图1-12：表1琥珀酸曲格列汀和各杂质的紫外吸收波长物质名称杂质1杂质2杂质3杂质4杂质5杂质6最大吸收波长nm259275274274222、259273物质名称杂质7杂质8杂质9杂质10杂质11琥珀酸曲格列汀最大吸收波长nm224、260274265275228272由表1和图1-12可以看出，琥珀酸曲格列汀及各杂质在220nm波长处均有较大紫外吸收，在此波长处可充分检出杂质，因此，选择220nm波长作为本品有关物质检查波长。本发明人通过筛选合适流动性组分并优化各组分比例，以及筛选合适的其他色谱条件，对琥珀酸曲格列汀以及上述11个杂质进行色谱分析，确定了本发明分析方法，通过对起始原料、反应中间体、工艺杂质、降解杂质、琥珀酸曲格列汀的峰定位试验，干扰性试验和琥珀酸曲格列汀的降解试验对本发明进行专属性验证，结果见表2和图13：表2专属性验证结果由表2和图13可以看出，各杂质峰之间、曲格列汀主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，曲格列汀主峰的理论板数大于3000，本发明的专属性好。本发明人还选用市场上常用的制备琥珀酸曲格列汀制剂的药用辅料和空白溶剂对本发明进行了研究，发现常用的药用辅料和空白溶剂对本发明没有干扰。本发明人对琥珀酸曲格列汀和各杂质的检测限、定量限、线性、校正因子进行检测，结果见表3：表3琥珀酸曲格列汀和各杂质的检测限、定量限、线性、校正因子试验结果上述报告限度是指超出此限度的杂质均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。由表3可以看出，本发明对各杂质检测灵敏度均较高，其检测限和定量限均小于报告限度，并且琥珀酸曲格列汀和各杂质在较低浓度范围内线性关系良好。本发明人配制供试品溶液，分别于配制后的0、2、4、8和12h进样并记录图谱，统计供试品中琥珀酸曲格列汀峰面积，计算相对标准偏差RSD为0.16％，各时间点均未检出各已知杂质，也未新增杂质，结果表明，供试品溶液在12h内稳定。本发明人对各杂质进行回收率试验，结果见表4：表4各杂质的回收率验证结果由表4可以看出，本发明的回收率试验结果符合要求，本发明回收率高。本发明人取琥珀酸曲格列汀配制供试品溶液，进样并记录图谱，按加校正因子自身对照法计算供试品中杂质1-11的含量，结果见表5和图14。表5琥珀酸曲格列汀中各杂质的含量测定结果由表5和图14可以看出，琥珀酸曲格列汀供试品中未检出已知杂质，检出2未知杂质，但含量均小于报告限度。本发明检出的杂质多，能快速、有效、准确监控琥珀酸曲格列汀中的有关物质；本发明具有良好的专属性，各杂质峰之间、琥珀酸曲格列汀主成分峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，曲格列汀主峰的理论板数大于3000，杂质峰和主峰可以有效分离；本发明检测限、定量限均较小，本发明的灵敏度好；本发明的回收率高，可以准确测量琥珀酸曲格列汀原料和制剂中的有关物质；本发明通过加校正因子自身对照法对上述11个杂质进行定量分析，增加本发明有关物质检测的准确性。附图说明图1为杂质1紫外扫描图。图2为杂质2紫外扫描图。图3为杂质3紫外扫描图。图4为杂质4紫外扫描图。图5为杂质5紫外扫描图。图6为杂质6紫外扫描图。图7为杂质7紫外扫描图。图8为杂质8紫外扫描图。图9为杂质9紫外扫描图。图10为杂质10紫外扫描图。图11为杂质11紫外扫描图。图12为琥珀酸曲格列汀紫外扫描图。图13为系统适用性溶液高效液液相色谱图。图14为琥珀酸曲格列汀原料有关物质高效液液相色谱图。图15为琥珀酸曲格列汀制剂有关物质高效液液相色谱图。具体实施方式下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。实施例1高效液相色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝3.5的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为90：10为流动相A，以磷酸调节pH＝3.5的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为20：80为流动相B，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.025mol/L，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程为：0.01-5min内，流动相A和流动相B的体积比为94：6；5-50min内，流动相A和流动相B的体积比从94：6匀速渐变至40：60；50-50.01min内，流动相A和流动相B的体积比从40：60匀速渐变至94：6；50.01-60min内，流动相A和流动相B的体积比为94：6。样品配制：系统适用性溶液：分别取杂质1、2、3、4、6、8、10、11对照品各约12.5mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为杂质对照品贮备液一；另取杂质5、7、9对照品各约12.5mg，精密称定，分别置25ml量瓶中，加乙腈适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品贮备液二；另取琥珀酸曲格列汀对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加初始比例流动相使溶解，取上述杂质对照品贮备液一、杂质对照品贮备液二各0.25ml置同一25ml量瓶中，加初始比例流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。试验操作：取系统适用性溶液20μl进样，记录色谱图。典型色谱图见图13。实施例2高效液相色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝3.3的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为92：8为流动相A，以磷酸调节pH＝3.3的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为22：78为流动相B，检测波长为222nm，流速为0.95ml/min，柱温为40℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.02mol/L，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例1。样品配制：系统适用性溶液：同实施例1。供试品溶液：取琥珀酸曲格列汀供试品适量，精密称定，用初始比例流动相溶解并定容得到含琥珀酸曲格列汀浓度为0.5mg/ml的供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用初始比例流动相定容至刻度，摇匀得到对照溶液。试验操作：取系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液各50μl进样，记录色谱图。实施例3高效液相色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝3.7的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为88：12为流动相A，以磷酸调节pH＝3.7的磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为18：82为流动相B，检测波长为218nm，流速为1.05ml/min，柱温为30℃，其中，磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.03mol/L，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程同实施例1。样品配制：系统适用性溶液：同实施例1。供试品溶液：同实施例2。对照溶液：同实施例2。试验操作：取系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液各5μl进样，记录色谱图。实施例4高效液相色谱条件：同实施例1。样品配制：系统适用性溶液：同实施例1。供试品溶液：同实施例2。对照溶液：同实施例2。试验操作：取系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl进样，记录色谱图。典型色谱图见图14。实施例5高效液相色谱条件：同实施例1。样品配制：系统适用性溶液：同实施例1。供试品溶液：取规格为50mg的琥珀酸曲格列汀片10片，研碎混匀，取细粉适量(约相当于含琥珀酸曲格列汀25mg)，精密称定，置50ml量瓶中，用初始比例流动相溶解并定容，过滤得到供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，用初始比例流动相定容至刻度，摇匀得到对照溶液。试验操作：取系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl进样，记录色谱图。典型色谱图见图15。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3