骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色试剂盒的制作方法

文档序号:12454193阅读:来源:国知局

技术特征:

1.骨骼肌组织冰冻切片肌球蛋白三磷酸腺苷酶染色试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包含以下成分:

(1)1号液,CaCl2 缓冲溶液: 0.1 mol/L甘氨酸溶液,0.1 mol/LNaCl溶液,1 mol/L CaCl2,0.1 mol/L NaOH ,用0.1mol/L NaOH 调节pH值至9.5±0.01;

(2) 2号液,醋酸盐缓冲液:0.2 mol/L 醋酸钠,0.2 mol/L 醋酸 ,用0.1mol/L HCl调pH值至4.6±0.01;

(3) 3号液,底物孵育液:取1号液中的CaCl2缓冲溶液10ml,ATP-二钠盐25mg,用0.1mol/L NaOH调pH至9.4±0.01;

(4)4号液,2wt.%氯化钴溶液;

(5)5号液,硫化铵溶液: 1wt%硫化铵溶液,在使用前的新鲜配制。

2.如权利要求1应用所述试剂盒的染色方法,其特征在于:所述方法包括如下:

(1)骨骼肌活检组织,OCT包埋,经液氮预冷的异戊烷速冻,用恒冷切片机在-22℃下切片,厚度为6µm,保存于-20℃或-35℃冰箱;

(2)取每例冰冻切片两片分为A、B两组,用电吹风吹干水蒸汽;

(3)碱性前孵育:将A组切片滴加CaCl2 缓冲溶液100μL,室温10 min;

(4)酸性前孵育:将B组切片滴加醋酸盐缓冲液100μL,室温10 min,用滤纸将B组切片组织周围的醋酸盐缓冲液吸掉,滴加CaCl2 缓冲溶液100μL,室温30sec;

(5)底物孵育:用滤纸将A、B两组切片组织周围的CaCl2 缓冲溶液吸掉,滴加入底物孵育液100ul,37℃,孵育60 min;

(6)用滤纸将切片组织周围的底物孵育液吸掉;

(7)滴加2wt.%氯化钴溶液0.5mL,室温下放置5 min;

(8)自来水冲洗3 min,双蒸水浸洗2 min;

(9)将切片插入1wt.%硫化铵溶液中,室温下浸泡1 min;

(10)流水冲洗5min;

(11)将切片经过95%乙醇、100%乙醇脱水、二甲苯透明、加拿大树胶封固后,染色完成。

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