本发明涉及一种猪肉中磺胺类、喹诺酮类兽药残留的检测方法，属于仪器检测技术领域。
背景技术：
在现代化农业生产过程中，鱼肉、鸡肉、猪肉等动物源食品在饲养环节中往往在饲料中使用大量的抗生素来辅助预防和治疗疾病。但是，这些药物的滥用或者不恰当的使用可能会对人体造成潜在的危害。于是，兽药残留的问题也逐渐成为人们普遍关注的社会焦点。
目前的兽药前处理技术主要包括：液液萃取、固相萃取及quechers等。液液萃取法操作时间冗长，使用较多对人体与环境有害的有机溶剂。固相萃取法常用于净化微量或痕量物质，对于复杂基质会存在回收率低、易堵塞填料等不足。quechers技术一般以乙腈或酸化乙腈为提取剂，以c18、石墨烯等作为吸附剂吸附杂质。
技术实现要素：
本发明提供了一种能同时检测动物源食品中33种磺胺类、喹诺酮类兽药残留的方法，利用高效液相色谱串联飞行时间质谱方法，用酸化乙腈作为提取剂，正己烷作为净化剂，从而快速检测动物源食品样品中的兽药残留。
本发明提供的方法包括下列步骤：
(1)标准工作溶液的配制：
将常见的17种磺胺类及16种喹诺酮类兽药分别用乙腈定容配制成质量浓度为1000mg/l的单标准储存液，置于棕色瓶中，-20℃储藏。将上述储存液用乙腈稀释为1.0mg/l的混合标准储存液备用。
(2)样品前处理：
取0.5g肉沫于15ml离心管中，加入2ml1％甲酸乙腈，剧烈震荡5min，在室温条件下，4500rmp离心10min；取上清液，加入2ml正己烷震荡2min，静置分层，去掉上层正己烷层，重复去脂一次。上清液用水稀释一倍，然后过0.22μm滤膜上机测试。
(3)液质分离检测：
流动相a：0.1％甲酸水溶液，流动相b：乙腈；柱温：40℃，流速：0.3ml/min。进样量：10μl。
梯度洗脱程序：
0～2min，5％b～20％b；2～7min，20％b～55％b；7～9min，55％b；9～13min，55％b～90％b；13～16min，90％b；16～16.5min，90％～5％b；16.5～21min，5％b。
本发明采用上述方法检测鱼肉、鸡肉、猪肉等动物源食品中的兽药残留。
本发明的有益效果：
一般情况下，建立兽药定量方法时采用三重四极杆质谱，然而对于前处理简便，基质复杂的情况下，三重四极杆选择性具有一定的局限性，可能会导致检测结果不准确。对于高分辨质谱而言，分子量是准确测量，具有很强的选择性。本方法以复杂基质猪肉为例，采用tripletof5600+建立了2类33种兽药的快速定量分析方法，对于采用高分辨质谱定量分析常规药物而言具有重要的参考意义。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。以复杂基质猪肉为例，采用tripletof5600+建立了2类33种兽药的快速定量分析方法。
实施例1
取0.5g猪肉于15ml离心管中，分别添加2和10μg/kg两个水平的33种兽药混合标准溶液，加入2.00ml1％甲酸乙腈，剧烈震荡5min，在室温条件下，4500rmp离心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震荡2min，静置分层，去掉上层正己烷层，重复去脂一次。上清液用水稀释一倍，然后过0.22μm滤膜，平行测定每个水平的加标样品各3次，供液质分析。
实施例2标准曲线及检测限
取0.5g猪肉于15ml离心管中，加入2.00ml1％甲酸乙腈，剧烈震荡5min，在室温条件下，4500rmp离心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震荡2min，静置分层，去掉上层正己烷层，重复去脂一次。浓缩至干后，加入1.00ml混合标准溶液复溶，涡旋混匀，过0.22μm滤膜，配制3个水平的基质匹配混合标准溶液，以目标化合物定量离子的峰面积(y)为纵坐标、质量浓度(x，μg/l)为横坐标绘制曲线，相关系数r为0.99004～0.99995，线性关系良好。以定量离子信噪比s/n＝3确定样品的检出限(lod)，s/n＝10为定量下限(loq)。
结果表明，33种兽药的lod为0.8～2.4μg/kg，loq为2.67～8.00μg/kg。具体结果见表1。
表1各组分基质匹配线性方程、相关系数(r)、检出限和定量限
实施例3回收率实验
按实施例1方法，在空白猪肉样品中添加33种兽药混合标准溶液，加标量分别为2和10μg/kg的加标样品，按上述前处理方法及测定条件进行回收率试验，每个添加水平做3次平行测定。各化合物的平均回收率为69.53％～120.80％，相对标准偏差(rsd)为1.09％～9.98％，符合多残留分析的要求。
表2猪肉样品中加标回收率以及精密度
实施例4液质分离检测
流动相a：0.1％甲酸水溶液，流动相b：乙腈；柱温：40℃，流速：0.3ml/min。进样量：10μl。梯度洗脱程序：
0～2min，5％b～20％b；2～7min，20％b～55％b；7～9min，55％b；9～13min，55％b～90％b；13～16min，90％b；16～16.5min，90％～5％b；16.5～21min,5％b。表3是
高分辨质谱检测采集参数。
表3质谱采集参数