一种水产品中二硫氰基甲烷的气相测定方法与流程

本发明涉及农药残留检测领域，尤其指一种水产品中二硫氰基甲烷的气相测定方法。

背景技术：

二硫氰基甲烷(methylenebisthiocyanate，简写为mbt)，黄褐色针状晶体，分子结构式为cns-ch2-scn，是一种易挥发的有机硫氰化合物。二硫氰基甲烷是一种优异的非氧化性广谱杀菌灭藻剂，可对皮革工业、工业循环水、油田注水处理及其它工业生产中存在的细菌、真菌、藻类、霉菌、以及水体中的原生动物和后生动物有很好的杀灭作用和抑制作用，也可用作药物、食品、船体、化妆品和农作物等的防腐、防霉和防垢。在水产养殖中，二硫氰基甲烷作为孔雀石绿的替代品，主要通过全池泼洒和浸泡等方式杀菌。近年来，二硫氰基甲烷在水库、池塘等水产养殖的实际应用中证明(张家松等，2006)，其对荧光假单孢菌pseudomonasfluorescence、疖疮型点状产气单孢杆菌aeromonaspunctataf.furunalus、水型点状极毛杆菌pseudomonaspunctataf.ascitae、鱼害粘球菌myxococcuspisciolas、水霉sa-prolegnia和嗜酸性卵甲藻oodiniumacidophilum等具有高效的杀灭作用。有研究表明，二硫氰基甲烷具有非内吸性，在环境中易分解成硫氰酸盐及甲醛等，残留毒性小，对鸟类无毒到中等毒性，对淡水鱼类和水生无脊椎动物高毒，对哺乳动物中毒。不仅如此，二硫氰基甲烷虽可作为孔雀石绿的替代药，并没有得到药监局的认可，属于违法药品。因此，迫切需要建立二硫氰基甲烷的检测方法，从而监管非法药品的不合理使用。

现有技术中，二硫氰基甲烷的分析方法报道的较多的是高效液相色谱法(hplc)，也有气相色谱分析法(gc-fid)，但是针对水产品中二硫氰基甲烷的检测方法未见有报道。本发明旨在提供一种气相色谱法（gc-pfpd）测定水产品中的二硫氰基甲烷，为水产品中二硫氰基甲烷药物残留的监控提简便、快速、实用的检测技术。

技术实现要素：

为了解决上述技术问题，本发明提供一种水产品中二硫氰基甲烷的气相测定方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种水产品中二硫氰基甲烷的气相测定方法，包括以下步骤：

1、样品的制备：鱼，去鳞，沿脊背取肌肉（带皮）；虾，去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分；贝类，去壳，取可食部分；中华绒螯蟹、甲鱼，取可食肌肉部分，样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，高速搅碎机充分搅匀，密封，标记，-18℃以下冷冻保存；

2、样品的提取：称取样品（1.00±0.01）g，于10ml具塞玻璃离心管中，加1:1的二氯甲烷和正己烷4ml，涡旋混合1min，室温条件下超声振荡提取10min，5000r/min离心5min，用玻璃胶头滴管移取上清液于另一10ml玻璃离心管中，残渣中再加1:1的二氯甲烷和正己烷4ml，重复提取一次，合并两次上清液，混匀，40℃下氮吹至约0.5-1ml，待净化；

3、净化和浓缩：取中性氧化铝固相萃取小柱，上层分别添加2g无水硫酸钠和2g乙酸锌，将上述氮吹后的液体过柱并收集，容器用2ml1:1的二氯甲烷和正己烷洗涤，过柱并收集在同一试管中，再用8ml二氯甲烷洗脱小柱，且收集在同一试管中，洗脱液在40℃下氮吹至干，并用1:1的二氯甲烷和正己烷定容至1ml，涡旋1min使其完全溶解，供气相分析；

4、气相色谱分析：将步骤三制得的气体进行色谱分析，并与标准样品色谱曲线对比即可得出水产品中是否含有二硫氰基甲烷的结论。

优选的，上述步骤4中所述的色谱分析的色谱条件为：色谱柱：hp-5ms石英毛细管柱（30m×0.32mm，粒径0.25μm，美国agilent公司）；进样方式：无分流进样；进样口温度：110℃；检测器温度：250℃；载气：氮气，纯度≥99.999%，流速为2ml/min；燃气：氢气，纯度≥99.999%，流速为13ml/min；助燃气：空气，纯度≥99.999%，流速为17ml/min。门延迟为6，门开启宽度为20，触发点位是200；柱流速1.0ml/min，柱温：初始柱温50℃，保持1min，以25℃/min升温至180℃，保持2min；进样量：1.0μl。

本发明还包括一种水产品中二硫氰基甲烷的气相测定用样品前处理装置，所述装置包括箱体，设置在箱体顶部的样品进口，所述样品进口下短连接设置在箱体内上部的螺旋推进机构，所述螺旋推进机构推进主轴采用中空结构，螺旋推进机构微端连接设置在箱体一侧的粉碎机构，所述粉碎机构底部设置筛网，所述箱体另一侧设置样品存储间，样品存储间内设置冷却管道，样品存储间底部与筛网下部连通，所述样品存储间一侧还设置有样品取出口。

本发明的有益效果是：本申请所建立的前处理方法，简单易操作，能使mbt稳定、高效的回收；本实验所采用的色谱条件，使得mbt的峰形尖锐、对称，无杂质峰干扰。该方法灵敏度高，重复性和准确性好，适合水产品中二硫氰基甲烷物质的残留分析。

附图说明：

图1mbt标准曲线。

图2标准溶液的色谱图。

图3加标样品的色谱图。

图4空白样品的色谱图。

图5样品前处理盒结构示意图。

图中1，样品进口，2、螺旋推进机构，3，推进主轴，4、粉碎机构，5、筛网，6、冷却管道，7、箱体，8、样品取出口。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步说明：

结合图5，本发明提供的样品前处理盒，将待处理样品放入样品进口，经过螺旋推进机构初步预混合，进入粉碎机构，这一过程中推进机构中推进主轴的中空结构内流经冷却水，防止样品升温变质，样品经过粉碎后，经粉碎机构底部的筛网过滤后进入样品存储间，并在样品存储间内设置的冷却管道营造的低温环境中保存，需要取用时从样品取出口即可使用。

称取二硫氰基甲烷标准品0.0050g，用乙腈作为溶剂进行溶解，用棕色容量瓶进行定容。将母液依次用1:1的正己烷和二氯甲烷稀释为mbt浓度为1.0mg/l、2.0mg/l、5.0mg/l、10.0mg/l、20.0mg/l。

采用色谱条件如下进行色谱分析：色谱柱：hp-5ms石英毛细管柱（30m×0.32mm，粒径0.25μm，美国agilent公司）；进样方式：无分流进样；进样口温度：110℃；检测器温度：250℃；载气：氮气，纯度≥99.999%，流速为2ml/min；燃气：氢气，纯度≥99.999%，流速为13ml/min；助燃气：空气，纯度≥99.999%，流速为17ml/min。门延迟为6，门开启宽度为20，触发点位是200。柱流速1.0ml/min，柱温：初始柱温50℃，保持1min，以25℃/min升温至180℃，保持2min；进样量：1.0μl。

以被测物浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。mbt出峰时间为：6.18min，得到mbt线性方程依次为y=4874.7x-1823.3，相关系数r²=0.9971，如图1所示。

检出限、定量限是采用在不含被测物的空白组织中添加一定浓度的被测物（即加标样品）进行实测确定的，根据7个空白组织的基线噪音平均值，按s/n=3为检出限，s/n=10为定量限。求得mbt检出限分别为0.1mg/kg；定量限分别为0.5mg/kg，该方法满足残留分析的要求。标准溶液、加标样品、空白样品的色谱图见图2-4。

由图2-4可以看出，本申请提供的二硫氰基甲烷甲烷的气相测定方法使得mbt的峰形尖锐、对称，无杂质峰干扰。该方法灵敏度高，重复性和准确性好，适合水产品中二硫氰基甲烷物质的残留分析。