一种初烤烟叶的石蜡切片方法与流程

本发明涉及一种植物的石蜡切片方法，具体涉及一种初烤烟叶的石蜡切片方法，属于植物显微观测技术领域。

背景技术：

烟叶外观质量评价是收购和调拨期间通过感官和经验对烟叶质量做出初步判定的重要手段，快速判定烟叶外观质量对于指导烟叶生产与分级、提升原料工业可用性、提高叶组配方效率具有重要意义，是卷烟工业企业原料质量保障体系中的最重要因素之一。生产实践上，对烤烟外观质量的判定一般采用包括部位、成熟度、组织结构与发育水平、烟叶厚度、颜色与光泽、油份、含青与杂色水平、烟叶长度与残伤水平等指标组成的评价体系。专业分级员都必须经过一定时间的专业培训后，才能较好地掌握烟叶分级。但对于大多数非专业人员尤其是烟农来说，由于判定指标过多，且一些指标易受到外界因素的干扰产生混淆，他们掌握起来往往较难，经常导致收购时各个等级的烟叶相互混杂，不能满足卷烟工业对等级质量和纯度控制的要求。

目前，一些卷烟工业企业在多年对烟叶原料研究的基础上，凝练出“黄、亮、软”的烟叶用料特点，其中“软”是这一指标体系的核心，烟叶的柔软性是指烘烤后烟叶的柔软程度，烟叶柔软性可以通过抓握烟叶时感受叶面与手掌的摩擦力、叶面弯曲力以及松开后烟叶复原的程度来判断烟叶品质的好坏。目前，对烘烤后烟叶柔软程度的判断纯粹是凭经验通过手摸感知将烟叶初步分为柔软、尚柔软和僵硬三个层次，还没有定性的、可靠的判定依据和方法。另外，烤烟的成熟采收是形成烟叶质量、产量不可或缺的重要环节，而成熟度的把握是烟叶品质形成的核心因素。正确识别和判断烟叶成熟度，采收适熟烟叶对烘烤过程中烟叶变黄干燥速度以及烤后烟叶质量具有非常重要的影响。目前，田间采收和烘烤后分级中对成熟度的判断，只能依据烟叶的外观特征来进行。烤烟成熟度与叶片组织结构的变化紧密相关，因而通过烟叶组织结构的细胞学观察来判断成熟度、确定田间适熟烟叶的采收标准不失是一种行之有效的科学判定方法。

石蜡切片法由于操作简单、价格低廉、可连续制片等特点，一直是观察细胞组织的形态结构及其动态变化的理想生物学研究技术。常规的石蜡切片制作过程包括：固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、透明以及封片等步骤，在生物学的许多领域都得到了广泛的应用。已有报道采用石蜡切片技术来观察新鲜烟叶的组织结构(刘国敏，邵兰军，高卫锴等.种植密度和施氮量对烟叶组织结构发育及化学成分的影响.华北农学报，2016,31(4)：206-213)，但经过烘烤后烟叶的叶片组织由生活状态逐渐转变为死亡状态，在这一过程中细胞中的大分子物质及细胞结构发生了显著变化，叶片干燥变脆，常规的石蜡切片方法展示的初烤烟叶的细胞组织结构和特征不完整，各种烟叶的石蜡切片显微图基本相似，无法反映出初烤烟叶的品质优劣和部位等特征与信息。

技术实现要素：

针对常规石蜡切片方法无法反映初烤烟叶的品质优劣和部位等细胞学特征与信息的问题，本发明的目的是在于提供一种能清晰获得初烤烟叶的细胞学特征与信息的初烤烟叶的石蜡切片方法，该方法有利于指导田间适熟烟叶的采收和分级中成熟度的判断，提高优质初烤烟叶的比例，并为“黄、亮、软”用料体系中柔软性这一核心指标的评价提供科学依据。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种初烤烟叶的石蜡切片方法，该方法是初烤烟叶样本依次进行包括复水I、固定、脱水、透明、透蜡、包埋、切片、脱蜡、复水II、染色、分色、复色、封片和烤干在内的步骤；所述复水I的过程为：将初烤烟叶样本置于35～45℃温水中浸泡18～30h，再置于50～60℃热水中浸泡18～30h。

优选的方案，所述固定的过程为：将复水I后的样本置于FAA溶液中浸泡24～48h。FAA是有固定组成和比例的公知溶液。

优选的方案，所述脱水的过程为：固定后的样本依次在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在65～75wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在75～85wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在88～92wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，94～96wt％的乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，在100wt％的乙醇溶液中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。较优选的方案，所述脱水的过程为：固定后的样本依次在50wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在70wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在80wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在90wt％的乙醇溶液中浸泡1h，95wt％的乙醇溶液中浸泡1h，在100wt％的乙醇溶液中浸泡两次，每次1h。

优选的方案，所述透明的过程为：脱水后的样本先置于体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡0.5～1.5h，再置于二甲苯中浸泡两次以上，每次0.5～1.5h。较优选的方案，所述透明的过程为：脱水后的样本先置于体积比为1:1的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡1h，再置于二甲苯中浸泡两次，每次1h。

优选的方案，所述透蜡、包埋和切片的过程为：脱水后的样本采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次以上，每次1.5～2h，透蜡后的样品用石蜡包埋，切片。较优选的方案，所述透蜡、包埋和切片的过程为：脱水后的样本采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次，每次1.5～2h，透蜡后的样品用石蜡包埋，切片。

优选的方案，所述脱蜡的过程为：切片后的样本先置于二甲苯中浸泡30～40min，再置于体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡20～30min。较优选的方案，所述脱蜡的过程为：切片后的样本先置于二甲苯中浸泡30～40min，再置于体积比为1:1的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡20～30min。

优选的方案，所述复水II的过程为：将脱蜡后的样本依次在100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在94～96wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在80～90wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在70～80wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在60～70wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min。较优选的方案，所述复水II的过程为：将脱蜡后的样本依次在100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在95wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在85wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在75wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在65wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在50wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min。

优选的方案，所述染色的过程为：复水II后的样本置于0.5～1.5wt％番红花溶液中浸泡1.5～2.5h。较优选的方案，所述染色的过程为：复水II后的样本置于1wt％番红花溶液中浸泡2h。

优选的方案，所述分色和复色的过程为：染色后的样本置于水中洗涤后，依次在45～55wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在65～75wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在75～85wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在88～92wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在0.5～1.5wt％的固绿溶液中浸泡30～40s，在94～96wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次以上，100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次以上，在体积比为1:0.5～1.5的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡1～2min，在二甲苯中浸泡1～2min并重复1次以上。较优选的方案，所述分色和复色的过程为：染色后的样本置于水中洗涤后，依次在50wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在70wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在80wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在90wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min，在1wt％的固绿溶液中浸泡30～40s，在95wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次，100wt％的乙醇溶液中浸泡1～2min并重复1次，在体积比为1:1的二甲苯:无水乙醇溶液中浸泡1～2min，在二甲苯中浸泡1～2min并重复1次。

优选的方案，所述封片和烤干的过程为：复色后样本采用中性树胶封片，再置于40～45℃温箱中干燥烤干。较优选的方案，所述封片和烤干的过程为：复色后样本采用中性树胶封片，再置于42℃温箱中干燥烤干。

本发明的初烤烟叶的石蜡切片方法，包括以下具体步骤：

1)取材：初烤烟叶；

2)复水：将材料置于40℃左右温水，在恒温箱内浸泡24h，再放入50～60℃的热水中浸泡24h，此时干叶片将会沉淀下去，抽气；

3)固定：将复水后的材料固定于FAA液中24h；

4)脱水：材料依次放入50％乙醇1h，70％乙醇1h，80％乙醇1h，90％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇两次，每次1h；

5)透明：体积比1:1二甲苯：100％乙醇1h，二甲苯两次，每次1h；

6)透蜡、包埋和切片：采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡2次，每次1.5～2h，透蜡后包埋，切片，然后用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上；

7)脱蜡、复水和染色：

脱蜡：将切片放入二甲苯脱蜡30～40min，体积比1:1二甲苯：100％乙醇20～30min；

复水：100％乙醇1～2min，95％乙醇1～2min，85％乙醇1～2min，75％乙醇1～2min，65％乙醇1～2min，50％乙醇1～2min。

染色：1％番红花(100ml 50％乙醇+1g番红花)染色2h；

8)分色和复色：

将切片放入自来水速洗1次，50％乙醇1～2min，70％乙醇1～2min，80％乙醇1～2min，90％乙醇1～2min；1％固绿(95％乙醇100ml+1g固绿)复色30～40s，95％乙醇1～2min，重复1次，100％乙醇1～2min，重复1次，体积比1:1二甲苯：100％乙醇1～2min，二甲苯1～2min，重复1次；

9)封片和烤干：中性树胶封片，切片放入42℃温箱中干燥过夜烤干。

相对现有技术，本发明的技术方案带来的有益技术效果：

(1)本发明的初烤烟叶的石蜡切片方法与常规植物组织石蜡切片方法相比，关键在于对初烤烟叶进行复水预处理过程，即采用温水和热水对初烤烟叶进行预浸泡处理过程，该处理过程是经过多次反复试验的经验总结，能有效改善初烤烟叶的组织结构，有利于后续的石蜡切片制作过程。主要由于新鲜烟叶在烘烤过程中叶片组织逐渐失水，细胞由生活状态转变为死亡状态，细胞中的大分子物质及细胞结构发生了显著变化，叶片干燥变脆，因而常规的石蜡切片方法展示的初烤烟叶的细胞组织结构和特征不完整，切片具有厚薄不均、不连续或不完整等缺点。通过对初烤烟叶经过复水预处理后，使叶片的细胞组织结构得到改善，表皮平整、细胞内部结构疏松，便于制作石蜡切片，切片连续、完整，显微图片清晰，与新鲜烟叶材料的切片效果基本一致。

(2)本发明制作的初烤烟叶切片细胞学图能清晰地再现该烟叶烘烤前的细胞组织结构和特征，根据这些特征和信息可以准确地推断其田间生长发育状况和采收时的烟叶成熟程度，为成熟度的判断提供直观、准确的标准，因而可以用来指导烟叶的适熟采收，为烟农增产增收。

(3)本发明制作的初烤烟叶切片细胞组织结构完整，叶片厚薄以及栅栏组织、海绵组织、细胞内部结构和形状等特征和信息在柔软、尚柔软和僵硬表现的下部、中部和上部烟叶的细胞学显微图中清晰可见、差异明显，从而为柔软性的评价提供了简便、可靠的科学依据，为卷烟厂提质增效。克服了现有技术中凭经验通过人工手摸来感知确定的方法存在的缺陷。

(4)本发明的初烤烟叶的石蜡切片方法仅仅在传统的方法上增加复水预处理工序，操作简单，易于实施，有利于推广使用。

附图说明

【图1】为实施例1(A)和对比实施例1(B)中部烟叶的初烤烟叶制作的石蜡切片显微观察图。

【图2】是实施例2制作的不同部位柔软、尚柔软和僵硬初烤烟叶石蜡切片的显微观察图，其中，A、B、C为柔软烟叶，D、E、F为尚柔软烟叶，G、H、I为僵硬烟叶；A、D、G为下部烟叶，B、E、H为中部烟叶，C、F、I为上部烟叶。

【图3】是适熟(A)、欠熟(B)和未熟(C)中部烟叶的初烤烟叶制作的石蜡切片显微观察图。

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例，可以进一步清楚地了解本发明，但实施例不是对本发明的限定。

实施例1

1、取材：取中部初烤烟叶，在第6～8条侧脉间用刀片切取大小为0.5cm×1cm的叶肉组织。

2、复水：将材料置于40℃左右温水，在恒温箱内浸泡24h，再放入60℃的热水中浸泡24h。

3、固定：将复水后的材料于FAA固定液(包括1/3体积的95％乙醇，2/9体积的福尔马林，1/9体积的冰醋酸，1/3体积的蒸馏水)中固定24h，固定过程中更换固定液3次。

4、脱水：样品采用乙醇脱水，具体脱水程序为：依次放入50％乙醇1h，70％乙醇1h，80％乙醇1h，90％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇两次，每次1h。

5、透明：采用1:1(体积比)的二甲苯:乙醇过度方法，具体透明过程如下：体积比1:1二甲苯：100％乙醇1h，二甲苯1h，二甲苯1h。

6、透蜡、包埋和切片：采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡，蜡，透蜡程序如下：透蜡2次，每次1.5h，透蜡后由包埋机完成包埋，仍为54～56℃的切片石蜡；采用普通生物切片机切片，切片厚度为7μm；用恒温水浴展片，然后用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上。

7、脱蜡、复水和染色：脱蜡采用二甲苯脱蜡，具体程序如下：将切片放入二甲苯脱蜡40min，体积比1:1二甲苯：100％乙醇20min。然后复水，具体程序如下：100％乙醇1.5min，95％乙醇1.5min，85％乙醇1.5min，75％乙醇1.5min，65％乙醇1.5min，50％乙醇1.5min。复水后的切片用1％番红花100ml(50％乙醇+1g番红花)染色2h。

8、分色和复色：染色后的切片用乙醇脱水、复色后用二甲苯透明，具体程序如下：切片放入自来水速洗1次，50％乙醇1.5min，70％乙醇1.5min，分色适当后继续80％乙醇1.5min，90％乙醇1.5min；然后用1％固绿(95％乙醇100ml+1g固绿)复色30s，随后95％乙醇1.5min，重复1次，100％乙醇1.52min，重复1次；体积比1:1二甲苯：100％乙醇1.5min，二甲苯1.5min，重复1次。

9、封片和烤干：中性树胶封片，由自动封片机完成，然后切片放入42℃温箱中干燥过夜烤干。

对比实施例1

除不经过复水处理过程，样品取材后直接固定，其余操作均与实施例1相同。

烘烤后烟叶的叶片组织由生活状态逐渐转变为死亡状态，在这一过程中细胞结构及细胞内的大分子物质发生了显著变化。按照常规方法，初烤烟叶不经复水处理过程制作的石蜡切片，其细胞学结构很不清晰(图1A)，而经复水处理后获得的初烤烟叶的石蜡切片能清楚地观察到叶片栅栏组织和海绵组织结构以及细胞排列的特征，层次清晰，细胞结构较完整(图1B)，也不易碎掉，制作的石蜡切片与其烤前的新鲜烟叶的细胞结构和特征几乎没有区别。

实施例2

1、取材：分别从下部、中部和上部烟叶中分选出的柔软、尚柔软和僵硬的初烤烟叶，在第6～8条侧脉间用刀片切取大小为0.5cm×1cm的叶肉组织。

2、复水：将材料置于40℃左右温水，在恒温箱内浸泡24h，再放入50℃的热水中浸泡24h。

3、固定：将复水后的材料于FAA固定液(包括1/3体积的95％乙醇，2/9体积的福尔马林，1/9体积的冰醋酸，1/3体积的蒸馏水)中固定24h，固定过程中更换固定液3次。

4、脱水：样品采用乙醇脱水，具体脱水程序为：依次放入50％乙醇1h，70％乙醇1h，80％乙醇1h，90％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇两次，每次1h。

5、透明：采用1:1(体积比)的二甲苯:乙醇过度方法，具体透明过程如下：体积比1:1二甲苯：100％乙醇1h，二甲苯1h，二甲苯1h。

6、透蜡、包埋和切片：采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡，蜡，透蜡程序如下：透蜡2次，每次2h，透蜡后由包埋机完成包埋，仍为54～56℃的切片石蜡；采用普通生物切片机切片，切片厚度为7μm；用恒温水浴展片，然后用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上。

7、脱蜡、复水和染色：脱蜡采用二甲苯脱蜡，具体程序如下：将切片放入二甲苯脱蜡30min，体积比1:1二甲苯：100％乙醇30min。然后复水，具体程序如下：100％乙醇2min，95％乙醇2min，85％乙醇2min，75％乙醇2min，65％乙醇2min，50％乙醇2min。复水后的切片用1％番红花100ml(50％乙醇+1g番红花)染色2h。

8、分色和复色：染色后的切片用乙醇脱水、复色后用二甲苯透明，具体程序如下：切片放入自来水速洗1次，50％乙醇2min，70％乙醇2min，分色适当后继续80％乙醇2min，90％乙醇2min；然后用1％固绿(95％乙醇100ml+1g固绿)复色40s，随后95％乙醇2min，重复1次，100％乙醇2min，重复1次；体积比1:1二甲苯：100％乙醇2min，二甲苯2min，重复1次。

9、封片和烤干镜检：中性树胶封片，由自动封片机完成，然后切片放入42℃温箱中干燥过夜烤干。

制作的石蜡切片如图2所示。图2中A、B和C为柔软的初烤烟叶石蜡切片显微观察结果，柔软的初烤烟叶进行复水处理后叶片结构基本恢复，表皮平整，细胞内部结构疏松。栅栏组织和海绵组织发育良好，胞间隙增大，海绵组织与栅栏组织厚度比值＞1；下部叶叶片厚度稍薄，中部叶和上部叶依次增厚；下部叶栅栏组织与海绵组织细胞排列不规则，叶片横切面呈疏松的网状结构，细胞内部结构瓦解，中部叶叶片厚度适中，栅栏组织排列疏松，上部叶叶片厚度较厚，栅栏组织细胞变长，海绵组织明显增厚。

图2中D、E和F为尚柔软的初烤烟叶石蜡切片显微观察结果，尚柔软的初烤烟叶进行复水处理后叶片结构基本恢复，表皮平整，下部叶叶片厚度较薄，中部叶和上部叶依次增厚，细胞结构较疏松，栅栏组织和海绵组织发育良好，胞间隙增大，海绵组织与栅栏组织厚度比值接近1；相比柔软叶片，尚柔软烟叶中的内含物含量都明显下降，栅栏组织与海绵组织细胞排列很不规则，甚至界限不清，叶片横切面呈松弛的网状结构，细胞内部结构瓦解。

图2中G、H和I为僵硬的初烤烟叶石蜡切片显微观察结果，僵硬的初烤烟叶进行复水处理后叶片结构基本恢复，叶片表皮平整，细胞结构排列紧密、整齐，整个烟叶厚度均较柔软和尚柔软的要薄，海绵组织与栅栏组织的厚度比值＜1；中部和上部烟叶栅栏组织细胞较长，排列较为紧密，栅栏组织较厚，但海绵组织不发达，厚度较薄；下部烟叶栅栏组织细胞长且粗，细胞间隙比较大，细胞之间比较疏松。

可见，采用本发明的石蜡切片方法制作的不同部位和不同柔软性初烤烟叶显微图片中，可以清晰地看到初烤烟叶叶片细胞的组织结构，根据石蜡切片中细胞排列的规律和特征明确地判断出柔软、尚柔软和僵硬的初烤烟叶，从而为初烤烟叶柔软性的评价提供了准确、可靠的科学依据。

实施例3

1、取材：分别选取适熟、欠熟和未熟中部烟叶的初烤烟叶，在第6～8条侧脉间用刀片切取大小为0.5cm×1cm的叶肉组织。

2、复水：将材料置于40℃左右温水，在恒温箱内浸泡24h，再放入50℃的热水中浸泡24h。

3、固定：将复水后的材料于FAA固定液(包括1/3体积的95％乙醇，2/9体积的福尔马林，1/9体积的冰醋酸，1/3体积的蒸馏水)中固定24h，固定过程中更换固定液3次。

4、脱水：样品采用乙醇脱水，具体脱水程序为：依次放入50％乙醇1h，70％乙醇1h，80％乙醇1h，90％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇两次，每次1h。

5、透明：采用1:1(体积比)的二甲苯:乙醇过度方法，具体透明过程如下：体积比1:1二甲苯：100％乙醇1h，二甲苯1h，二甲苯1h。

6、透蜡、包埋和切片：采用熔点为54～56℃的切片石蜡直接透蜡，蜡，透蜡程序如下：透蜡2次，每次2h，透蜡后由包埋机完成包埋，仍为54～56℃的切片石蜡；采用普通生物切片机切片，切片厚度为7μm；用恒温水浴展片，然后用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上。

7、脱蜡、复水和染色：脱蜡采用二甲苯脱蜡，具体程序如下：将切片放入二甲苯脱蜡30min，体积比1:1二甲苯：100％乙醇30min。然后复水，具体程序如下：100％乙醇2min，95％乙醇2min，85％乙醇2min，75％乙醇2min，65％乙醇2min，50％乙醇2min。复水后的切片用1％番红花100ml(50％乙醇+1g番红花)染色2h。

8、分色和复色：染色后的切片用乙醇脱水、复色后用二甲苯透明，具体程序如下：切片放入自来水速洗1次，50％乙醇2min，70％乙醇2min，分色适当后继续80％乙醇2min，90％乙醇2min；然后用1％固绿(95％乙醇100ml+1g固绿)复色40s，随后95％乙醇2min，重复1次，100％乙醇2min，重复1次；体积比1:1二甲苯：100％乙醇2min，二甲苯2min，重复1次。

9、封片和烤干：中性树胶封片，由自动封片机完成，然后切片放入42℃温箱中干燥过夜烤干。

采用适熟、欠熟和未熟中部烟叶的初烤烟叶制作的石蜡切片显微图片见图3所示，叶片细胞结构较完整，海绵组织与栅栏组织层次清晰。烟叶在田间成熟过程中，叶片的组织结构变化很大，随着成熟度的增加，细胞结构由紧密到疏松再到松弛的方向发展。未熟叶的叶肉细胞排列紧密，细胞间隙小，原生质浓，细胞核和线粒体大而明显；成熟叶的叶肉细胞排列疏松，细胞间隙增大，原生质变稀，细胞核和线粒体变小。可见，本发明方法获得不同成熟度初烤烟叶石蜡切片中展现的细胞结构和特征与田间烟叶的成熟过程是一致的，能很好地反映出烘烤前烟叶的成熟度，因而可以用来指导烟叶的适熟采收。另外，与实施例2中柔软、尚柔软和僵硬中部烟叶的初烤烟叶石蜡切片(图2B、E、H)进行比较，适熟、欠熟和未熟的初烤烟叶的细胞结构和特征与柔软、尚柔软和僵硬的基本一致，即柔软的初烤烟叶其细胞发育良好，田间生长表现为适熟，而采收尚熟、未熟的烟叶烘烤后易形成僵硬烟叶，可见采摘时烟叶的成熟度是获得柔软初烤烟叶的基本保证。因此，本发明的初烤烟叶石蜡切片方法显示的烟叶细胞学结构和特征不仅能反映出烘烤前的成熟程度，为适熟采收提供参考标准，而且还能用来评价初烤烟叶的柔软性，为调制后的分级提供科学依据。