本发明涉及一种利用橄榄提取不饱和脂肪酸的质量控制方法。
背景技术：
本品为橄榄的干燥成熟种子经压榨法或溶剂提取精制的不饱和脂肪酸。经研究发现，橄榄油的主要成分为油酸、亚油酸、α-亚麻酸。在质量控制方面还没有人对其三者同时进行鉴别和含量测定。虽然有报道对橄榄油中α-亚麻酸进行含量测定，但其仅仅控制橄榄油中一种成分难以准确反映橄榄油质量。其他常规检测方法也未提供橄榄油中不饱和有效成分油酸、亚油酸及α-亚麻酸的多组分快速鉴别及的绝对含量的检测。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种利用橄榄提取不饱和脂肪酸的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：该方法包括如下测定：a、气相色谱法同时鉴别橄榄油中油酸、亚油酸及α-亚麻酸，色谱条件与系统适应性试验以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯chromosrbw，为载体的填充柱φ3mm×2m，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500，取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，照气相色谱法″中国药典2005年版一部附录vie″试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；b、气相色谱法同时测定橄榄油中油酸、亚油酸及α-亚麻酸的含量，色谱条件与系统适应性试验以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体的填充柱φ3mm×2m，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500；油酸、亚油酸及α-亚麻酸与内标物质十七烷酸峰的分离度应大于1.5；胶正因子测定取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液8ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液，另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；测定法取橄榄油70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
该方法为，取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液；另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，照中国药典2005年版一部附录vie气相色谱法试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
该方法为：取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，照中国药典2005年版一部附录vie气相色谱法试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
该方法为：橄榄油照气相色谱法测定，色谱柱为填充柱。
该方法中填充柱以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体的填充柱，柱参数为φ3mm×2m。
橄榄油照气相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于550；校正因子测定，取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液8ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液，另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得，取橄榄油70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
橄榄油照气相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500校正因子测定，取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液8ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液，另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得；
测定法，取橄榄油70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
鉴别：取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml于60℃水浴中加热15分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录vie气相色谱法试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；
含量测定：橄榄油照气相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500；
校正因子测定，取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液8ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液，另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得；
测定法，取橄榄油(橄榄籽油)约70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
鉴别：取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，照中国药典2000年版一部附录vie气相色谱法试验，以丁二酸二乙二醇聚酯为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；
含量测定：橄榄油照气相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃，理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500，
校正因子测定取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液8ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液，另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液，精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得；
测定法，取橄榄油70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
橄榄油鉴别：取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液。另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录vie)试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
橄榄油含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为1-10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为100-162℃，恒定1-15分钟后以1-30℃/分升至170-220℃。理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500。
校正因子测定取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液8ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液。另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液。精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得。
取橄榄油约70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入2-20％三氟化硼甲醇溶液1ml，于40-80℃水浴中加热10-50分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
上述方法中填充柱以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体的填充柱(φ3mm×2m)效果最佳。
上述方法中内标物十七烷酸可以用十一烷酸或十三烷酸或十五烷酸对照品替代。
本发明的优点是：采用此填充柱的气相色谱分析方法能够使橄榄油各成分，特别是其不饱和成分油酸、亚油酸及α-亚麻酸与其他成分较完全的分离，从而在相应位置得到单一成分的色谱峰，可以与油酸、亚油酸及α-亚麻酸标准混合溶液进行比较鉴别。在通过进一步的计算，可以真实的反映橄榄油中油酸、亚油酸及α-亚麻酸的绝对含量。
具体实施方式
橄榄油鉴别：取橄榄油70mg，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液。另取油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品各约20mg，分别置5ml容量瓶中，各加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，各加入正己烷1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录vie)试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。
橄榄油含量测定：色谱条件与系统适用性试验，以丁二酸二乙二醇聚酯(degs)为固定液，涂布浓度为10％；以酸洗硅烷化洛姆沙伯(chromosrbw)为载体，柱温为程序升温，初始柱温为162℃，恒定15分钟后以3℃/分升至190℃。理论板数按α-亚麻酸计算应不低于5500。
校正因子测定取十七烷酸约0.4g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液8ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，精密加入正己烷20ml，充分振摇，取正己烷层作为内标溶液。另取油酸对照品约15mg，亚油酸对照品20mg、α-亚麻酸对照品20mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，精密加入正己烷与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为对照品溶液。精密吸取上述溶液各2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子，即得。
取橄榄油70mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加入0.5mol/l的氢氧化钾甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热30分钟，放冷，加入11％三氟化硼甲醇溶液1ml，于60℃水浴中加热15分钟，放冷，加入正己烷1ml与内标溶液各1ml，充分振摇，加饱和氯化钠水溶液适量，使正己烷层至瓶颈处，取正己烷层作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。