山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法与流程

本发明涉及中药检测领域，具体是山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法。

背景技术：

山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青ilexhainanensismerr.的叶。植物海南冬青，分布于我国广东、海南、广西等地，具有清热平肝，利咽解毒之功效，主治高血压病，口疮，咽痛，痈疖肿毒。山绿茶降压胶囊，主要用于眩晕耳鸣，头痛头胀，心烦易怒，少寐多梦及高血压、高血脂等。临床验证结果表明，“山绿茶降压胶囊”有明确的降压作用，对其降压机制也做了初步探讨，阐明了其药理作用。在临床研究中也发现山绿茶不仅有降压作用，还有调节血脂、改善血液流变学异常、调节血管活性物质、保护心脑肾等器官等诸多功能。

目前公开文献中也有关于山绿茶降压药物的质量检测方法，例如，中国专利：一种山绿茶降压制剂的质量检测方法；申请号：200710162577.2；申请日：2007-10-10；申请人：广西万寿堂药业有限公司；摘要：本发明涉及一种中成药的质量检测方法,特别是涉及一种用山绿茶乙醇提取物加适量山绿茶药材细粉制成的胶囊剂和片剂的质量检测方法。该方法对原有技术中山绿茶药材的薄层鉴别进行了改进,优选出最佳的展开系统和显色剂,使得斑点分离更好,更清晰,在市场上使本领域技术人员能更快,更有把握对产品的真伪作出判断。该方法还新增加了制剂中有效成分槲皮素的含量测定方法,为产品的质量稳定可控,疗效稳定确切提供了可靠保证。

目前关于山绿茶降压药物的质量检测方法还不够完善，薄层色谱鉴别只能进行定性分析，不能全方面的反应产品的内在质量，高效液相色谱法测定组分含量是也会出现杂质峰难以分离、稳定性不够等缺点。因此，积极研究山绿茶降压药物的质量控制方法具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法,以弥补现有技术的不足。该法操作简便，检测效率高，分离效果好，稳定性好，准确度高，检测结果能较好的反映山绿茶降压胶囊的品质质量。

本发明通过以下技术方案实现：

山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸和芦丁对照品适量，精密称定，加入乙醇溶液配制成质量浓度分别为60μg/ml和50μg/ml的混合对照品溶液；

（2）样品溶液的制备：取山绿茶降压胶囊样品0.2～0.5g，研细，精密称定，加入乙醇溶液20～30ml，称定重量，超声处理40～50分钟，放冷后再次称定重量，用乙醇溶液补足减失的重量，过滤；

（3）进行色谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照一定的色谱条件进行测定，得到色谱图；

（4）计算得出结果：以对照品进样量为横坐标（x），对照品峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到回归方程；将样品各成分峰面积代入回归方程，计算得出样品中绿原酸和芦丁的含量。

所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进样；控制柱温28～32℃，流速0.7～1.2ml/min；以乙腈为流动相a，以0.2%磷酸作为流动相b，进行梯度洗脱；进样量10～20μl；检测波长为341nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于6000。

所述乙醇溶液的体积浓度为50～70％；所述超声处理的条件为：功率300～350w，频率40khz。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～15min，流动相a为5%，流动相b为95%；15～30min，流动相a从5%到15%，流动相b从95%到85%；30～65min，流动相a从15%到22%，流动相b从85%到78%；65～80min，流动相a从22%到95%，流动相b从78%到5%；80～90min，流动相a从95%到10%，流动相b从5%到90%；90～100min，流动相a为10%，流动相b为90%；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

本发明采用的检测条件和方法是在查阅大量文献的基础上，经过多次实验探索研究之后筛选出来的，具有检测效率高、分离效果好、稳定性好、准确度高等优点。

本发明的有益效果：

1、本发明所述山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法，可同时检测绿原酸和芦丁两种有效成分，适用于实验室对于山绿茶降压胶囊的专门检测，可弥补现有技术的不足，可以更加全面地评价山绿茶降压胶囊的品质质量。

2、本发明所述山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法，经过多次试验选择色谱条件，并进行了相应的方法学验证，检测结果可达到相应的检测标准，具有分离效果好、检测效率高、准确度高、重现性好等优点；该法操作简便快速，可批量进行检测，一次分析过程可同步检测多个样品。

3、本发明所述的检测方法可以为企业标准或者行业标准的建立提供重要的参考依据，以弥补现有标准的不足。

附图说明

图1是绿原酸和芦丁混合对照品的hplc图。

图2是山绿茶降压胶囊含量测定的hplc图。

具体实施方式

为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。

实验所用的仪器、试剂及样品如下：agilent1200高效液相色谱仪，dad检测器，uwd紫外检测器，milli-proa纯水处理器；绿原酸对照品和芦丁对照品，由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。测定样品为桂林中族中药股份有限公司提供，规格为0.4g/粒。

实施例1

山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸和芦丁对照品适量，精密称定，加入乙醇溶液配制成质量浓度分别为60μg/ml和50μg/ml的混合对照品溶液；

（2）样品溶液的制备：取山绿茶降压胶囊样品0.3g，研细，精密称定，加入乙醇溶液30ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷后再次称定重量，用乙醇溶液补足减失的重量，过滤；

（3）进行色谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照一定的色谱条件进行测定，得到色谱图；

（4）计算得出结果：以对照品进样量为横坐标（x），对照品峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到回归方程；将样品各成分峰面积代入回归方程，计算得出样品中绿原酸和芦丁的含量。

所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进样；控制柱温28℃，流速0.8ml/min；以乙腈为流动相a，以0.2%磷酸作为流动相b，进行梯度洗脱；进样量10μl；检测波长为341nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于6000。

所述乙醇溶液的体积浓度为50％；所述超声处理的条件为：功率300w，频率40khz。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～15min，流动相a为5%，流动相b为95%；15～30min，流动相a从5%到15%，流动相b从95%到85%；30～65min，流动相a从15%到22%，流动相b从85%到78%；65～80min，流动相a从22%到95%，流动相b从78%到5%；80～90min，流动相a从95%到10%，流动相b从5%到90%；90～100min，流动相a为10%，流动相b为90%；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

实施例2

山绿茶降压胶囊中绿原酸和芦丁同时检测的方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）混合对照品溶液的制备：分别取绿原酸和芦丁对照品适量，精密称定，加入乙醇溶液配制成质量浓度分别为60μg/ml和50μg/ml的混合对照品溶液；

（2）样品溶液的制备：取山绿茶降压胶囊样品0.25g，研细，精密称定，加入乙醇溶液30ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷后再次称定重量，用乙醇溶液补足减失的重量，过滤；

（3）进行色谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照一定的色谱条件进行测定，得到色谱图；

（4）计算得出结果：以对照品进样量为横坐标（x），对照品峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到回归方程；将样品各成分峰面积代入回归方程，计算得出样品中绿原酸和芦丁的含量。

所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进样；控制柱温30℃，流速1.0ml/min；以乙腈为流动相a，以0.2%磷酸作为流动相b，进行梯度洗脱；进样量10μl；检测波长为341nm；理论板数按绿原酸峰计算不低于6000。

所述乙醇溶液的体积浓度为60％；所述超声处理的条件为：功率320w，频率40khz。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～15min，流动相a为5%，流动相b为95%；15～30min，流动相a从5%到15%，流动相b从95%到85%；30～65min，流动相a从15%到22%，流动相b从85%到78%；65～80min，流动相a从22%到95%，流动相b从78%到5%；80～90min，流动相a从95%到10%，流动相b从5%到90%；90～100min，流动相a为10%，流动相b为90%；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

绿原酸和芦丁混合对照品的hplc图如图1所示；山绿茶降压胶囊含量测定的hplc图如图2所示。

对实施例1所述检测方法进行方法学验证如下：

1、精密度试验

对同一样品溶液，按实施例1所述的色谱条件，连续测定6次，结果6次测定绿原酸、芦丁的rsd分别为0.49%、1.38%（n=6）详见表1。试验表明，本法的精密度较好。

表1仪器精密度试验结果

2、重复性试验

对同一批样品，按实施例1所述的色谱条件，连续测定6次，结果绿原酸平均值为1.0075mg/粒,rsd=1.23%（n=6）；芦丁平均值为0.7692mg/粒,rsd=1.37%（n=6），结果如表2所示，结果表明，本法的重复性较好。

表2重复性实验结果

3、线性关系考察

精密称取绿原酸对照品32.08mg，置20ml量瓶中，芦丁对照品25.47mg，置50ml量瓶中，加50%乙醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液；分别精密吸取绿原酸对照品贮备溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml，芦丁对照品贮备溶液0.5ml、1.0ml、2.5ml、5.0ml、10.0ml，分别按浓度高低顺序置同一25ml量瓶中，加50%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀。进样10μl，测定。以对照品进样量为横坐标（x），对照品峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，绿原酸和芦丁的回归方程分别为：y=2320.8x-14.7（n＝5，r=0.99994）；y=1553.3x+7.0993（n＝5，r=0.99999）。

结果表明：绿原酸在进样量为0.12～2.56μg范围内时，绿原酸进样量与绿原酸峰面积呈良好的线性关系；芦丁在进样量为0.09～1.85μg范围内时，芦丁进样量与芦丁峰面积呈良好的线性关系。