一种富马酸沃诺拉赞的检测方法与流程

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种富马酸沃诺拉赞的检测方法。

背景技术：

富马酸沃诺拉赞，其化学名为5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐，是由武田制药公司研制的一种钾离子竞争性酸阻滞剂(p-cab)，体外实验研究表明该化合物抑制质子泵的能力是兰索拉唑的400倍，其相对于na⁺,k⁺-atpase的抑制选择性在1000倍以上，可有效抑制胃酸分泌，具有持续时间长的优点。该化合物的纯度及含有的杂质将直接影响其抑酸和治疗胃酸相关性疾病的作用。

目前，还未发现5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的纯度检测方法的相关文献及报道，为了加强5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐质量控制，需要研发出其的检测方法。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的检测方法。

5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐(tak-09)的结构式如下：

5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛(tak06)是5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐(tak-09)的中间体，其结构式如下：

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种沃诺拉赞5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的检测方法，包括以下步骤：

(1)分别称取5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐和5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛置于同一容量瓶中，用稀释液溶解并定容，配制成系统适应性试验溶液；具体地，精密称取20-30mg的5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐和20-30mg的5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛置于同一个50ml的容量瓶中，用稀释液溶解并定容，配制成系统适应性试验溶液；其中，5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的浓度为0.4-0.6mg/ml，5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛的浓度为0.4-0.6mg/ml；

(2)精密称定供试品，用稀释液进行溶解并定容，配制成供试品溶液；具体地，精密称取25-50mg的供试品，置于50ml的容量瓶中，用稀释液进行溶解并定容，配制得到浓度为0.5-1mg/ml的供试品溶液；

(3)精密量取稀释液，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图，不得有干扰；

(4)精密量取系统适应性试验溶液，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图，理论板数按5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐计算应不低于3000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；

(5)精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图，供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法分别计算；

其中所述高效液相色谱仪的操作条件为：

色谱柱：苯基柱；

进样量：5-10μl；

流速：0.8-1.2ml/min；

柱温：25-35℃；

检测波长：250-300nm；

流动相：流动相a0.1％甲酸水溶液:流动相b乙腈，其体积比为(5-70)：(30-95)；

稀释液：乙腈:水，其体积比为(40-60):50；

检测器：紫外检测器。

优选地，所述色谱柱为agilentzorbaxsbphenyl，尺寸为4.6*250mm,5μm。

优选地，所述进样量为5μl。

优选地，所述流速为1ml/min。

优选地，所述检测波长为254nm。

优选地，所述柱温为30℃。

优选地，所述稀释液为乙腈与水按体积比为50:50混合而成。

优选地，所述梯度洗脱条件为：0min：流动相a70％，流动相b30％；30min:流动相a5％，流动相b95％；30.01-35min：流动相a70％，流动相b30％。以0.1％甲酸水溶液和乙腈按适当的浓度梯度作为流动相，可以提高分离效果，并改善峰型。

本发明的有益效果

(1)本发明的检测方法可以实现5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的快速准确测定，具有很高的灵敏度；

(2)本发明的检测方法操作简便，分离度不小于1.5，符合完全分离的标准；

(3)本发明的检测方法为5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐提供了研究开发和质量检测的基础。

附图说明

图1为供试品1的高效液相色谱图；

图2为供试品2的高效液相色谱图；

图3为供试品3的高效液相色谱图；

图4为供试品4的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，现结合以下具体实施例做进一步说明，但是本发明不限于具体实施例。

实施例1

一种5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的检测方法

一、仪器与检测条件

岛津lc-15c高效液相色谱仪，色谱柱选用agilentzorbaxsb-phenyl(4.6*250mm,5μm)；

进样量：5μl；

流速：1ml/min；

柱温：30℃；

检测波长：254nm；

流动相：流动相a0.1％甲酸水溶液，流动相b乙腈，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：0-30min：流动相a70％，流动相b30％；30-30.01min:流动相a5％，流动相b95％；30.01-35min：流动相a70％，流动相b30％；

稀释液：乙腈:水，其体积比为(40-60):50；

检测器：紫外检测器。

二、实验步骤

采用高效液相色谱法进行检测，检测步骤如下：

(1)分别精密称取25mg的5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐和25mg的5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛置于同一个50ml的容量瓶中，用稀释液溶解并定容，配制成系统适应性试验溶液；

(2)精密称取25mg的供试品，置于50ml的容量瓶中，用稀释液进行溶解并定容，配制得到浓度为0.5mg/ml的供试品溶液；

(3)精密量取稀释液5μl，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；

(4)精密量取系统适应性试验溶液μl，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图，理论板数按5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐计算应不低于3000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；

(5)精密量取供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，采用流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图，供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法分别计算。

实施例2

取四批同一生产规格指令生产的5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐产品，分别为供试品1-4，按照实施例1的检测方法进行检测，采用面积归一化法进行纯度及其杂质计算，检测结果见下表1-4：

表1为供试品1的检测结果

表2为供试品2的检测结果

表3为供试品3的检测结果

表4为供试品4的检测结果

本发明的检测方法能够简便、准确、快速、高效、可靠的检测5-(2-氟苯基)-n-甲基-1-(3-吡啶基磺酰基)-1h-吡咯-3-甲胺富马酸盐的纯度和杂质含量，具有很高的灵敏度，且操作简便，可以实现完全分离，进而为研究此类化合物提供了研究开发和质量检测的基础。

以上所述仅为本发明的具体实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之中。