山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法与流程

本发明涉及食品或药品检测领域，具体是山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法。

背景技术：

展青霉素又称展青霉毒素、棒曲霉素、珊瑚青霉毒素，它是一由曲霉和青霉等真菌产生的一种次级代谢产物，棒曲霉素具有广谱的抗生素特点。毒理学试验表明，展青霉素具有影响生育、致癌和免疫等毒理作用，同时也是一种神经毒素。展青霉素具有致畸性，对人体的危害很大，导致呼吸和泌尿等系统的损害，使人神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭。

氯霉素又名氯胺苯醇，是由氯链丝菌产生的一种具有抑制细菌生长作用的广谱抗菌素，氯霉素对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌等都有抑制作用，可用于治疗伤寒菌痢、尿道感染、百日咳、肺炎、败血症等疾病，但对人体有损害作用。它对骨髓造血机能有抑制作用，可引起粒细胞缺乏病、再生障碍性贫血和溶血性贫血，对人产生致死效应。氯霉素化学性质相对稳定，在动物体内易于残留，从而造成直接危害，更严重的是一定浓度的药物残留会诱发致病菌的耐药性。此外，长期微量摄入氯霉素不仅使大肠杆菌、沙门氏菌等产生耐药性，而且会引起机体正常菌群失调，使人们易感染各种疾病，如再生障碍性贫血症和原婴综合症可引起粒细胞及血小板减少，新生儿、早产儿灰色综合症等。

展青霉素广泛存在于山楂、苹果等霉变水果中，氯霉素也被我国农业部列入禁用蜂药名单，目前大多数山楂制品中都会加入蜂蜜进行制作，因此，检测山楂制品中展青霉素和氯霉素的含量是非常有必要的。目前检测展青霉素和氯霉素的方法主要有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法和高效液相色谱质谱联用等。

山楂（crataeguspinnatifidabunge）具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药，对胸膈脾满、疝气、血淤、闭经等症有很好的疗效。山楂内的黄酮类化合物牡荆素，是一种抗癌作用较强的药物，其提取物对抑制体内癌细胞生长、增殖和浸润转移均有一定的作用。山楂制品不仅美味可口、老少皆宜，且具有一定的保健开胃的效果，受到广大人民的喜爱，山楂作为我国一种特殊的食品、营养和药用果品，具有很大的开发潜力。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，为检测平台提供更多准确度高、精密度好、稳定性好、快速简便的检测方法。

本发明通过以下技术方案实现：

山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）样品溶液和空白基质溶液的制备：分别取山楂制品和空白基质样品5～6g，打碎，精密称定；加入甲醇25～30ml，超声处理30～40分钟，摇匀，过滤；分别精密吸取续滤液1ml，加甲醇稀释10倍，摇匀，过0.2μm滤膜，即可得到待测样品溶液和空白基质溶液；

（2）混合对照品溶液的制备：分别精密称取展青霉素和氯霉素对照品，加空白基质溶液稀释，制成展青霉素和氯霉素质量浓度均为1μg/ml的混合溶液，得到混合对照品储备液；精密量取上述混合对照品储备液，加入空白基质溶液稀释10倍，即得混合对照品溶液；

（3）进行液相色谱-串联质谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，按照一定的色谱条件和质谱条件进行测定。

所述超声处理条件为：功率300～350w，频率40～50khz。

所述色谱条件为：色谱柱agilenteclipseplusc18，1.8µm，2.1mm×100mm；柱温33～38℃，流速0.2～0.5ml/min；以9mmol/l乙酸铵为流动相a，以甲醇为流动相b，进行梯度洗脱，进样量1～2μl。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～1min，流动相a从5%到70%，流动相b从5%到30%；1～6min，流动相a从70%到40%，流动相b从30%到60%；6～8min，流动相a从40%到95%，流动相b从60%到5%；8～15min，流动相a保持95%不变，流动相b保持5%不变；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

所述质谱条件为：使用电喷雾电离源，mrm方式检测，干燥气温度为210℃；雾化器压力20psi；干燥气流速11l/min,鞘流气温度：350℃；鞘流气流速10l/min；喷嘴电压1000v。

所述山楂制品包括山楂糕、山楂片、山楂条、山楂果丹皮、山楂蜜饯、山楂果脯和山楂丸等。

本发明所述方法检出限的测定：分别精密量取上述混合对照品溶液10μl、100μl、500μl，加入空白机制溶液稀释至1000μl，按本发明所述方法进样测定，计算得出展青霉素和氯霉素的检出限分别为4ng/g和1μg/g。

本发明的有益效果是：

1、本发明所述山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，可弥补现有技术中对于山楂制品质量控制的不足，该法操作简便，检测效率高，可同时检测展青霉素和氯霉素的含量，降低检测成本。

2、本发明所述山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，采用液相色谱质谱联用的方法进行测定，准确度高，稳定性好，适用于实验室对于山楂制品的质量控制，可批量进行检测，操作简便，检出限低。

附图说明

图1是混合对照品的lc-ms／mstic图。

图2是混合对照品的lc-ms／msmrm图。

具体实施方式

为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。

agilent1290快速高分离液相色谱系统，agilent6490triplequadlc/ms/ms液相色谱/质谱联用仪，配电喷雾电离源（esi）；色谱柱为agilenteclipseplusc18（100×2.1mm,1.8μm），甲醇为色谱纯，乙酸铵为色谱纯，水为高纯水。

实施例1

山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）样品溶液和空白基质溶液的制备：分别取山楂制品和空白基质样品5g，打碎，精密称定；加入甲醇30ml，超声处理40分钟，摇匀，过滤；分别精密吸取续滤液1ml，加甲醇稀释10倍，摇匀，过0.2μm滤膜，即可得到待测样品溶液和空白基质溶液；

（2）混合对照品溶液的制备：分别精密称取展青霉素和氯霉素对照品，加空白基质溶液稀释，制成展青霉素和氯霉素质量浓度均为1μg/ml的混合溶液，得到混合对照品储备液；精密量取上述混合对照品储备液，加入空白基质溶液稀释10倍，即得混合对照品溶液；

（3）进行液相色谱-串联质谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，按照一定的色谱条件和质谱条件进行测定。

所述超声处理条件为：功率300w，频率40khz。

所述色谱条件为：色谱柱agilenteclipseplusc18，1.8µm，2.1mm×100mm；柱温36℃，流速0.4ml/min；以9mmol/l乙酸铵为流动相a，以甲醇为流动相b，进行梯度洗脱，进样量2μl。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～1min，流动相a从5%到70%，流动相b从5%到30%；1～6min，流动相a从70%到40%，流动相b从30%到60%；6～8min，流动相a从40%到95%，流动相b从60%到5%；8～15min，流动相a保持95%不变，流动相b保持5%不变；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

所述质谱条件为：使用电喷雾电离源，mrm方式检测，干燥气温度为210℃；雾化器压力20psi；干燥气流速11l/min,鞘流气温度：350℃；鞘流气流速10l/min；喷嘴电压1000v。

实施例2

山楂制品中展青霉素和氯霉素的检测方法，其检测方法包括以下步骤：

（1）样品溶液和空白基质溶液的制备：分别取山楂制品和空白基质样品5g，打碎，精密称定；加入甲醇30ml，超声处理30分钟，摇匀，过滤；分别精密吸取续滤液1ml，加甲醇稀释10倍，摇匀，过0.2μm滤膜，即可得到待测样品溶液和空白基质溶液；

（2）混合对照品溶液的制备：分别精密称取展青霉素和氯霉素对照品，加空白基质溶液稀释，制成展青霉素和氯霉素质量浓度均为1μg/ml的混合溶液，得到混合对照品储备液；精密量取上述混合对照品储备液，加入空白基质溶液稀释10倍，即得混合对照品溶液；

（3）进行液相色谱-串联质谱分析：分别精密吸取混合对照品溶液与样品溶液，注入高效液相色谱-串联质谱联用仪，按照一定的色谱条件和质谱条件进行测定。

所述超声处理条件为：功率350w，频率40khz。

所述色谱条件为：色谱柱agilenteclipseplusc18，1.8µm，2.1mm×100mm；柱温35℃，流速0.5ml/min；以9mmol/l乙酸铵为流动相a，以甲醇为流动相b，进行梯度洗脱，进样量2μl。

所述的色谱条件中，梯度洗脱的程序为：0～1min，流动相a从5%到70%，流动相b从5%到30%；1～6min，流动相a从70%到40%，流动相b从30%到60%；6～8min，流动相a从40%到95%，流动相b从60%到5%；8～15min，流动相a保持95%不变，流动相b保持5%不变；其中，百分数表示流动相a与流动相b的体积占比。

所述质谱条件为：使用电喷雾电离源，mrm方式检测，干燥气温度为210℃；雾化器压力20psi；干燥气流速11l/min,鞘流气温度：350℃；鞘流气流速10l/min；喷嘴电压1000v。

展青霉素和氯霉素的质谱参数如下表所示：