本发明涉及半胱氨酸检测
技术领域：
，尤其涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒。
背景技术：
同型半胱氨酸(又称高半胱氨酸，homocysteine,hcy)是蛋氨酸代谢过程中的中间产物。同型半胱氨酸在体内的分解代谢，受两方面因素影响最大。一是与先天遗传有关的某些生物酶的缺乏，另一个就是体内叶酸、维生素b6、维生素b12等营养元素的缺乏。这两种缺乏都会影响同型半胱氨酸转化为其他物质，导致高同型半胱氨酸血症。hcy的测定，对心血管疾病、尿毒症、动脉粥样硬化、糖尿病、老年痴呆症等疾病的判定中，有重要的临床意义。通常认为成人空腹血浆总hcy水平正常值为4～12μmol/l，理想值为<10μmol/l，高于15μmol/l则被认为是高同型半胱氨酸败血症；老年人(≥60岁)空腹血浆总hcy水平正常值为15～20μmol/l，高于20μmol/l被认为是高同型半胱氨酸败血症。目前，实验室常用的hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法及酶循环法。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点，现在公认其为测定血浆hcy浓度的首选方法，但因色谱法(hplc及gc-ms)需要的设备复杂且昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用；酶联免疫测定法自动化水平低，大部分需要手工操作，耗时较长，且容易造成误差；荧光偏振免疫检测(fpia)方法灵敏度高，检测速度快，但价格昂贵，检测成本高，不适用常规生化检测；酶循环法是一种无需预处理样本，适用于全自动生化分析仪，具有快速、准确、灵敏的特点，因此受到临床广泛推广。但是普通的同型半胱氨酸检测试剂中由于存在多种酶，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成浪费的不良后果。技术实现要素：本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒。为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：设计一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂r1、试剂r2，试剂r1组分丝氨酸0.5-20mmol/l、hcy还原剂0.5-10mmol/l、nadh0.5-1.8g/l、ldh10-200ku/l、缓冲液20-100mmol/l；试剂r2组分为胱硫醚β-合成酶0.5-10ku/l、胱硫醚β-分解酶10-50ku/l、缓冲液20-100mmol/l。其使用方法：首先把结合或聚合状态的hcy,包括复杂的二硫键的聚合状态的hcy以及蛋白结合的hcy还原成游离型的hcy，然后游离型的hcy与丝氨酸在胱硫醚合成酶（cbs）的作用下形成胱硫醚，形成的胱硫醚在胱硫醚裂解酶（cbl）的作用下形成hcy、丙酮酸和氨，丙酮酸与nadh（辅酶）在乳酸脱氢酶（ldh）的作用下反应，nadh转化为nad+在340nm下每分钟转化的速率直接与hcy的浓度正相关。优选的，缓冲液为tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、pbs缓冲液、mops缓冲液中的一种或几种按任意比组成的混合物，缓冲液的ph值为7.1-7.5。优选的，试剂r1和r2中还加入有电解质，电解质为氯化钠、氯化钾或氯化钙，电解质的质量百分比为0.2-2％。优选的，试剂r1和r2中还加入有表面活性剂，表面活性剂选择tween系列或聚氧乙烯苯基醚，表面活性剂的质量百分比为0.1-1.0％。优选的，试剂r1和r2中还加入有防腐剂，防腐剂为为叠氮钠、proclin300、mit、硫酸庆大霉素、硫柳汞中的一种或多种，防腐剂的浓度为0.1-0.5％(w/v)。优选的，试剂r1和r2中还加入有稳定剂，稳定剂为bsa、蔗糖、山梨糖或海藻糖，稳定剂的浓度为2-5％(w/v)。优选的，试剂r1和r2中还加入有促凝剂，促凝剂是聚乙二醇6000，促凝剂浓度为0.1-1％(w/v)。优选的，hcy还原剂是三(2-羧乙基)膦盐酸盐（tcep），二硫苏糖醇（dtt）或β-巯基乙醇（β-me）,浓度为0.5-10mmol/l。本发明提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒，测定条件为：主波长340nm副波长405nm反应温度37℃反应类型速率法反应方向下降校准类型linear测定步骤为：结果计算：hcy（μmol/l）=cs×（μmol/l）本发明提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒，有益效果在于：本试剂盒用于体外定量检测人血清中同型半胱氨酸(hcy)的含量，hcy与心血管疾病密切相关，是心血管疾病发病的一个重要危险因子，用于心血管疾病危险因素的辅助诊断，并指导临床治疗。具有稳定性好、使用方便、制备简单的优点。具体实施方式下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例1一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂r1：tris-hcl缓冲液80mmol/l丝氨酸0.5mmol/ltcep1mmol/lnadh0.5g/lldh50ku/lproclin3001g/lbsa20g/lpeg600010g/lnacl2g/ltween201g/l其余为纯化水ph=7.2试剂r2：tris-hcl缓冲液60mmol/l胱硫醚β-合成酶1ku/l胱硫醚β-分解酶10ku/lbsa25g/lproclin3001g/lpeg60005g/lnacl2g/ltween202g/l其余为纯化水ph=7.5实施例2一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂r1：hepes缓冲液100mmol/l丝氨酸1mmol/ldtt2mmol/lnadh0.8g/lldh80ku/lnan31g/l海藻糖30g/lpeg600020g/lnacl2g/ltween201g/l其余为纯化水ph=7.2试剂r2：hepes缓冲液100mmol/l胱硫醚β-合成酶5ku/l胱硫醚β-分解酶25ku/lbsa20g/l蔗糖10g/lnan31g/lpeg600010g/lnacl2g/ltween202g/l其余为纯化水ph=7.2实施例3一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂r1：mops缓冲液50mmol/l丝氨酸10mmol/ltcep5mmol/lnadh1g/lldh100ku/lnan32g/l海藻糖30g/lpeg600030g/lkcl5g/l聚氧乙烯苯基醚5g/l其余为纯化水ph=7.5试剂r2：mops缓冲液100mmol/l胱硫醚β-合成酶10ku/l胱硫醚β-分解酶50ku/lbsa25g/l山梨糖10g/lnan32g/lpeg600020g/lkcl2g/l聚氧乙烯苯基醚2g/l其余为纯化水ph=7.5实施例4一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂r1：pbs缓冲液100mmol/l丝氨酸10mmol/ltcep2mmol/lβ-me1mmol/lnadh1g/lldh60ku/lnan32g/l山梨糖20g/lpeg600015g/lkcl3g/l聚氧乙烯苯基醚3g/l其余为纯化水ph=7.2试剂r2：pbs缓冲液50mmol/l胱硫醚β-合成酶2ku/l胱硫醚β-分解酶20ku/lbsa25g/lnan32g/lpeg600020g/lkcl2g/l聚氧乙烯苯基醚2g/l其余为纯化水ph=7.4同型半胱氨酸检测试剂盒性能分析：表1精密度实验表2准确度试验表3线性范围分析实验以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页12