一种2-苯并噻唑基硫代乙酸含量的检测方法与流程

本发明涉及一种分析化学检测技术领域，尤其是涉及一种2-苯并噻唑基硫代乙酸含量的检测方法。

背景技术

2-苯并噻唑基硫代乙酸(c9h7no2s2)分子结构为：

2-苯并噻唑基硫代乙酸为富π电子的杂原子环化合物，可以与金属反应形成防锈膜，为金属提供持久的抗磨损和抗腐蚀作用，进而提高生产效率并延长机器的使用寿命；由于其具有良好的稳定性、广谱生物活性以及与金属配合的能力，因此被广泛的应用于润滑油添加剂领域。专利cn1910237a描述了2-苯并噻唑基硫代乙酸可作为非铁金属防锈的理想组分。目前，尚未发现有关于2-苯并噻唑基硫代乙酸含量检测方法的报道，因此建立快速高效的检测分析方法具有非常重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提出一种2-苯并噻唑基硫代乙酸含量的检测方法，采用高效液相色谱法，简便快速、通用性强，出峰快，省时省力，经济环保。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种2-苯并噻唑基硫代乙酸含量的检测方法，包括以下步骤：

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，制备系列浓度标准溶液，用高效液相色谱方法进行检测，分别获得系列浓度标准溶液高效液相色谱图，根据高效液相色谱图的峰面积及标准溶液的浓度获得标准曲线；

b、取待检样品，制备试样溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算获得待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量。

所述的步骤a中系列浓度标准溶液的制备方法为：精密称取标准品，使用流动相进行溶解并定容，过滤，制备获得系列浓度标准溶液。

在本发明中，所述2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线的制备原理无特殊的要求，按照本领域技术人员熟知的标准曲线制作原理和方法制备即可，本发明优选：称取标准品，用液相色谱检测所用流动相溶解并定容过滤，配制成高质量浓度的标准母液，再将所述标准母液用流动相按梯度稀释法稀释成系列浓度的2-苯并噻唑基硫代乙酸标准溶液，将所述系列浓度的2-苯并噻唑基硫代乙酸标准溶液按照上述所述的高效液相色谱条件进行高效液相色谱检测，分别得到系列浓度2-苯并噻唑基硫代乙酸标准溶液的高效液相色谱图，根据所述高效液相色谱图和标准溶液的浓度，以标准溶液的高效液相色谱图的峰面积为纵坐标，以其对应的标准溶液的质量浓度为横坐标，得到标准曲线。本发明中系列浓度的2-苯并噻唑基硫代乙酸标准溶液的浓度为0.01-0.5mg/ml，优选为0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml。

所述的步骤b中试样溶液的制备方法为：精密称取待检样品，使用流动相进行溶解并定容，过滤，获得试样溶液。在本发明中，所述的试样溶液的制备，优选将待检样品用流动相溶解、定容、过滤制备试样溶液。制备试样溶液后，按照上述所述的高效液相色谱条件用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图。

本发明对所述高效液相色谱仪没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的高效液相色谱仪即可。所述的步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，流动相流速为0.5-1.5ml/min，柱温20-40℃，检测器为紫外可见双波长检测器，检测波长200-300nm。

所述的流动相流速优选为0.8ml/min。

所述的柱温优选为25-35℃。

所述的检测波长优选为200-250nm。

所述步骤a和步骤b所用的色谱条件中，进样量为5-20μl，优选为10-20μl。

所述流动相中乙酸水溶液的质量分数为0.05％-0.5％，优选为0.1-0.3％。

所述流动相中甲醇的体积分数为40％-70％，优选为40-70％。

使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，通用性强，传统液相色谱法流动相中，有机溶剂使用比例大，且噪声大，基线不平稳，检测结果重现性不好，本发明的流动相降低了有机溶剂的使用比例，出峰快，省时省力，经济环保。

本发明实验结果表明，本发明提供的方法得到标准曲线的相关系数r2为0.9999，这说明本发明提供的方法中，2-苯并噻唑基硫代乙酸的峰面积与其质量浓度间存在良好的线性关系，从而使得到的2-苯并噻唑基硫代乙酸溶液含量的检测结果具有较高的准确度。

目前尚未发现有关于2-苯并噻唑基硫代乙酸含量检测方法的报道，本发明采用高效液相色谱法，为了得到合适的检测条件，对流动相的组成、缓冲液的选配、流动相的速度、色谱柱的种类以及柱温等，都进行了大量的筛选优化。本方法通用性强；样品处理稀释方便快捷、检测灵敏度高、出峰快、线性好、成本低廉，在分析检测中有很好的利用价值。

附图说明

图1为本发明采用高效液相色谱方法检测待检试样获得的色谱图；

图2为实施例1中所获得的标准曲线图；

图3为实施例2中所获得的标准曲线图；

图4为实施例3中所获得的标准曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

实施例1

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

实验步骤：

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.03g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.1％，甲醇的体积分数60％，流动相流速为0.75ml/min，柱温为25℃，检测波长225nm，检测时进样量为15μl。

图1为本发明采用高效液相色谱方法检测待检试样获得的色谱图，从图中可以看出，本发明获得的色谱图基线平稳、峰形尖锐且对称、保留时间7.5min。

本实施例获得的标准曲线见图2，根据图2拟合得到的计算公式为：y＝141236691.2x+65045，r²＝0.9999。

实施例2

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.03mg/ml、0.10mg/ml、0.17mg/ml、0.24mg/ml、0.31mg/ml、0.38mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.02g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.15％，甲醇的体积分数55％，流动相流速为0.8ml/min，柱温为25℃，检测波长225nm，检测时进样量为10μl。

本实施例获得的标准曲线见图3，根据图3拟合得到的计算公式为：y＝140758984.5x+218434，r²＝0.9999。

实施例3

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.02mg/ml、0.10mg/ml、0.18mg/ml、0.26mg/ml、0.34mg/ml、0.42mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.01g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.18％，甲醇的体积分数65％，流动相流速为1.0ml/min，柱温为20℃，检测波长250nm检测时进样量为20μl。

本实施例获得的标准曲线见图4，根据图4拟合得到的计算公式为：y＝140479278.6x–153669，r²＝0.9999。

实施例4

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.02g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.05％，甲醇的体积分数70％，流动相流速为0.5ml/min，柱温为30℃，检测波长200nm检测时进样量为20μl。

实施例5

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.03g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.3％，甲醇的体积分数50％，流动相流速为1.5ml/min，柱温为35℃，检测波长225nm检测时进样量为15μl。

实施例6

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.03g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.5％，甲醇的体积分数55％，流动相流速为0.8ml/min，柱温为35℃，检测波长225nm检测时进样量为15μl。

实施例7

仪器：岛津lc-16高效液相色谱仪系统，包括lc-16输液泵，spd-16紫外可见双波长检测器和labsolutions工作站

试剂：甲醇，乙酸，水，均为色谱纯

a、取2-苯并噻唑基硫代乙酸标准品，用流动相溶解定容，配制0.04mg/ml、0.08mg/ml、0.16mg/ml、0.24mg/ml、0.32mg/ml、0.4mg/ml系列浓度标准液，用高效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。

b、取待检样品0.04g于100ml容量瓶，使用流动相溶解稀释并定容、用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；

c、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和2-苯并噻唑基硫代乙酸标准曲线，用外标法计算待检样品中2-苯并噻唑基硫代乙酸的含量；

步骤a和b所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇–乙酸水溶液，乙酸溶液的质量分数为0.4％，甲醇的体积分数55％，流动相流速为0.8ml/min，柱温为30℃，检测波长300nm检测时进样量为15μl。

经上述多次检测试验验证，本发明提供的高效液相色谱法检测2-苯并噻唑基硫代乙酸原料及其制剂含量的方法，样品处理方便快捷；检测限为0.02μg/ml、定量限为0.07μg/ml，检测灵敏度高；重复进样结果的rsd≤0.1％，重现性好；在测定范围内拟合回归曲线，r²＝0.9999，线性好。

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。