本发明涉及文物检测领域，更具体的说是涉及尤一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法。
背景技术
羊毛是一种非常丰富的天然动物毛纤维，其来源非常丰富，可用于生产各种毛织品，是最为主要的毛纺工业原料。
中国历史悠久，从中国早期的墓葬中出土有大量的羊毛制品，其数量，还是织造之精美程度都让人叹为观止。研究这些出土的毛织品，对于了解古代毛织品的起源和少数民族服饰、民族间文化交流有着举足轻重的作用。但是这些羊毛及羊毛制品的主要成分是蛋白质，长期埋藏在地下环境中，受到水、热、氧气、微生物等环境因素的影响，羊毛角蛋白会发生变性和老化降解。而出土后因环境条件的剧烈变化，进一步加速了纤维的老化，因此，不难想象，在漫长的历史长河中，当年埋入墓葬或者遗址中的毛织品早已经失去原有的形貌，降解成肽段或者氨基酸，已经成为毛织品残片，肉眼无法识别，且年代越早的证据越难寻觅，给羊毛类文物的鉴定和保护研究带来了很大的困难。
目前，普通的分析检测技术，如傅里叶红外光谱，拉曼光谱，x-衍射分析等灵敏度低，受杂质影响较大，不适合对微量文物样品进行检测，国内外对于古代毛织品的鉴定，大多数还停留在对纤维形态的分析上，所得出的鉴定结果也没有十足的准确性；因此如何利用现代先进的自然科学手段，从古代毛织品残片中提取有效信息，对文物鉴定有重要的价值。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法。本发明的提取方法操作简单，能耗较小，溶解率和提取效率高，凝胶电泳选取的染色液灵敏，大大增加了电泳的分辨率。
本发明的技术方案为：一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法，以g和ml计，包括如下步骤：
1）向15-30ml正庚烷中加入摩尔比为18-22:1的水和十二烷基苯磺酸钠，制得油相溶液。
2）向步骤1）所得油相溶液中，加入质量分数为45-55%的生物质焦油水溶液，再加入摩尔比为1.8-2.2:1的正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，用力摇晃，溶液变淡黄色，得到反相微乳液，于室温静置10-13h。
将原本工业生产中应该去除的污染物生物质焦油作为原料，来源丰富，并且解决了污染物处理的问题，起到了变废为宝的作用。
3）向步骤2）所得反相微乳液中加入0.2-0.4g十二胺，室温下超声8-12min；然后向含聚四氟乙烯内胆的反应釜内倒入超声后的混合溶液，在110-130℃马弗炉中放置2-4h，取出，自然冷却至室温；用无水甲醇破乳，洗涤数次，离心，制得碳量子点原始溶液。
用反相微乳液法制备碳量子点溶液，产率远高于一般制备方法，并且碳量子点粒度均匀，尺寸可调。
4）用酒石酸将0.03-0.06mol/l的酒石酸钠溶液的ph调为2.5-2.8，将此溶液与350-450μl步骤3）所得碳量子点原始溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液。
5）称取古代毛织品样品，用去离子水反复清洗，去除表面污渍，放入30-35℃真空烘箱烘干。
6）将步骤5）洗净烘干的样品，加入ph=1.5-2.5的hbr溶液，静置1-2h，用去离子水搓洗至中性，30-35℃真空烘干。
7）将步骤6）烘干的样品，以1：15-25的浴比加入含有0.05-0.15mol/l的libr和0.02-0.04mol/l的十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节ph值到8-11，室温下以190-210w的功率超声30-50min后，放入微波反应器辐射水解6-8min。
十二烷基硫酸钠能够与角蛋白形成巨大的胶束，进而保护生成的-sh被氧化，利于还原反应的发生，防止沉淀，同时由于十二烷基硫酸钠溶液有很大的表面能，从而使羊毛能与还原剂充分接触，使反应时间有效的减少。可以得到分子量高、浓度高的角蛋白溶液。
金属盐libr对羊毛分子中的氢键有极大的破坏作用，与还原性物质共同作用，可以溶解羊毛提取角蛋白。相较于其他金属盐，libr具有更好的溶解率和提取率。
超声可以辅助水解，使浊液分散均匀，提高蛋白的提取率。微波可以促进羊毛的溶胀，使溶剂等分子振动，提高分子内能，加大水解效果，使羊毛更易溶解，从而降低后续还原所需温度。因为提取羊毛体系的复杂性，超声、微波水解的效果不同于提取其他蛋白，不能马上体现，其表现在最终溶解率、提取率的增大，和后续还原温度的降低上。并且因为提取羊毛体系的特殊性，超声微波不能像提取其他蛋白一样简单加入提取步骤，温度和时间也需调整，经过反复试验，优化条件，确定将其放在还原前的水解步骤上。
8）从反应器中取出，倒入三口烧瓶，将三口烧瓶置于恒温水浴锅中，调节水浴温度70-90℃，通氮气10-20分钟，排除氧气，缓缓加入10-25ml的2.5-3.5mol/l三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气搅拌，使羊毛溶解，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质。
三(2-羧乙基)膦是一种非常有效的硫醇类还原剂，该试剂在水溶液中的稳定性和溶解性都很好。在酸性、碱性溶液中的稳定性也不错。与其他类别的硫醇类还原剂相比，三(2-羧乙基)膦是更加高效的二硫键还原剂，其还原效果不易因ph的变化而改变。在使用三(2-羧乙基)膦还原时排除氧气，防止其被空气氧化。
9）加入20-35g硫酸铵，搅拌均匀，调节滤液ph，离心8-15min，将下层溶液在2-6℃条件下用透析袋透析，前9-12h，每隔1-2h换一次水，第12-24h每隔2-5h换一次水，第24-48h每隔5-10h换一次水，第48-72h，每隔10-15h换一次水，除去表面活性剂、金属盐等杂质；低温真空浓缩至原体积的1/4-1/2，得到羊毛角蛋白提取液。
用硫酸铵盐析，温度系数小，溶解度大，不易引起蛋白质变性。
透析时采用，先在较短的时间间隔内换水，后逐渐增加换水间隔的方法，提高了透析效率。在冰箱中透析，防止蛋白质在较高温度下脱盐变性析出，更稳定，回收率更高。
10)组装制胶器，灌注分离胶，加入纯化水，待分离胶的胶面与水形成可见的界面时，轻轻倒出纯化水，擦干纯化水后插上梳子，注入浓缩胶。待浓缩胶完全聚合后，将梳子轻轻拔出。
11)取羊毛角蛋白提取液于2*样品缓冲液按1∶0.8-1.2比例混合，水浴加热于93-97℃下加热1.5-2.5min，使蛋白质变性并确保结合最大量的十二烷基硫酸钠；样品冷却至室温后，取羊毛角蛋白提取液10-20μl加入凝胶点样孔，进行sds-page凝胶电泳；
12)电泳完毕后，切断电源，取出凝胶，浸入步骤4）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡2.5-3.5h，放到凝胶成像仪中，观察样品的电泳图像。
用碳量子点染凝胶，灵敏度高，电泳图像清晰，分辨率高。解决了传统sds-page凝胶电泳图像模糊不清的问题。
13)将经步骤12)所得染色样品的蛋白质条带割下并装入1.0-2.0ml离心管中，加入300-400ul去离子水振荡洗涤，吸出液体，重复一次，加入含10-30％甲醇、4-8%甘油、8-12％乙酸的脱色液40-70ul，静置2-4min，用去离子水终止反应并重复洗涤一次，吸出多余的液体；加入180-220ul35-45mmol/l碳酸氢铵溶液振荡洗涤2-4min，重复一次；加入110-160ul乙腈振荡，待胶块变白，吸弃乙腈，置于真空浓缩仪中干燥8-12min。
14)向步骤13)所得的离心管中加入50-80ul的胰蛋白酶溶液，完全盖住胶粒冰浴40-50min，使胶粒吸收酶解液溶胀，然后在35-40℃烘箱中孵育13-15h进行酶解。
15)采用hplc-ms/ms对其进行质谱分析，根据质谱检测得到的氨基酸序列与氨基酸序列数据库对比得到古代毛织品属于羊毛的结论。
作为优选，步骤8）中，通氮气搅拌具体为向三口烧瓶中持续通入氮气，利用机械搅拌以180-220r/min的速度搅拌1.8-2.2h至羊毛溶解，溶液变澄清。
作为优选，步骤9）中，调节滤液ph具体为用4-5mol/l的硫酸溶液调节步骤9）得到的滤液ph值至羊毛角蛋白等电点4.1-4.3。
盐析和等电点沉淀两种方法结合使用，加大了角蛋白的提取率。
作为优选，步骤9）中，所述透析袋的截留分子量为3500-4000。
选用截留分子量较小的透析袋，减少小分子蛋白的流失，大大增加提取率。因为古代毛织品存在降解现象，很多蛋白质降解成分子量较小的多肽、氨基酸，所以减少小分子蛋白的流失对于古代毛织品检测非常重要。
作为优选，步骤11）中，所述样品缓冲液为1.8-2.2ml0.4-0.6mol/l三（羟甲基）氨基甲烷-hcl，1.8-2.2ml甘油，1.8-2.2ml18-22%十二烷基硫酸钠，0.4-0.6mol0.08-0.12%溴酚蓝，0.8-1.2mlβ-巯基乙醇的混合溶液。
作为优选，三（羟甲基）氨基甲烷-hcl的ph为6.7-6.9。
作为优选，步骤11）中，凝胶电泳具体操作为：将电压调至28-32v电泳18-22min。当样品完全进入分离胶后，再将电压调成80-100v。当样品的溴酚蓝迁移至玻璃胶板底部约0.8-1.2cm时，即可停止电泳。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
（1）本发明优选碳量子点溶液作为sds-page凝胶电泳的染色液，反应灵敏，电泳图像清晰，分辨率高，解决了传统sds-page凝胶电泳图像模糊的问题。
（2）本发明采用反相微乳液法制备碳量子点，产率远高于电弧放电法、水热合成法、激光消蚀法等一般制备方法，并且碳量子点粒度均匀，尺寸可调。选用原料生物质焦油为工业废料，一举解决了原料和污染处理两大难题。
（3）本发明结合利用金属盐法和还原法提取羊毛角蛋白，优选对羊毛分子中的氢键有极大的破坏作用的金属盐libr，与强还原性三(2-羧乙基)膦共同作用，弥补了金属盐法溶解率低的缺陷，溶解率比单用金属盐法和还原法都高。
（4）本发明优选强还原性三(2-羧乙基)膦和阴离子表面活性剂十二烷基硫酸共同使用。三(2-羧乙基)膦溶解性好，稳定性好，还原二硫键的效果比一般还原剂强，配合能够与角蛋白形成巨大的胶束的十二烷基硫酸钠，使十二烷基硫酸钠不仅能发挥原本保护生成的-sh被氧化的功能，同时由于十二烷基硫酸钠溶液有很大的表面能，使羊毛能与还原剂充分接触，更加利于三(2-羧乙基)膦进行还原反应。
（5）本发明利用超声、微波促进水解，使羊毛更易溶胀，使浊液分散均匀，提高分子内能，降低后续还原所需温度，优化了金属盐法和还原法结合提取羊毛角蛋白的方法。
（6）本发明将盐析和等电点沉淀两种方法结合使用，加大了角蛋白的提取率。
（7）本发明用量少，检测角蛋白非常灵敏、准确度高，特别适合鉴定年代久远、降解严重的古代毛织品残片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1：
一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法，包括以下步骤：
1）向20ml有机溶剂正庚烷中，加入摩尔比为20:1的水和十二烷基苯磺酸钠，制备油相溶液。
2）向步骤1）所得油相溶液中，加入质量分数为50%的生物质焦油水溶液，再加入摩尔比为2:1的正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，用力摇晃，溶液变淡黄色，即得到反相微乳液，于室温静置12h。
3）向步骤2）所得反相微乳液中，加入0.3g十二胺，室温下超声10min。然后向含聚四氟乙烯内胆的反应釜内倒入超声后的混合溶液，在120℃马弗炉中放置3h，取出，自然冷却至室温。用无水甲醇破乳，洗涤数次，离心，制得碳量子点原始溶液。
4）用酒石酸将0.04mol/l的酒石酸钠溶液的ph调为2.7，将此溶液与400μl步骤3）所得碳量子点原始溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液。
5）称取古代毛织品样品，用去离子水反复清洗，去除表面污渍，放入32℃真空烘箱烘干。
6）将步骤5）洗净烘干的样品，加入ph=2的hbr溶液，静置1.5h，用去离子水搓洗至中性，32℃真空烘干。
7）将步骤6）烘干的样品，以1：20的浴比加入含有0.1mol/llibr和0.03mol/l十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节ph值到10，室温下以200w的功率超声40min后，放入微波反应器辐射水解6.5min。
8）从反应器中取出，倒入三口烧瓶，将三口烧瓶放在恒温水浴锅中，调节水浴温度80℃，通氮气15分钟，排除氧气，缓缓加入23ml的3mol/l三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气，以200r/min的速度搅拌搅拌2h使羊毛溶解，溶液变澄清，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质。
9）加入33g硫酸铵，搅拌均匀，用4.5mol/l的硫酸溶液调节滤液ph至羊毛角蛋白等电点4.1-4.3。离心12min，将下层溶液在3℃条件下用用截留分子量为3500的透析袋透析，前9-12h，每隔1.5h换一次水，第12-24h每隔3h换一次水，第24-48h每隔7h换一次水，第48-72h，每隔12h换一次水，除去表面活性剂、金属盐等杂质。低温真空浓缩至原体积的1/3，得到羊毛角蛋白提取液。
10)组装制胶器，灌注分离胶，加入纯化水，待分离胶的胶面与水形成可见的界面时，轻轻倒出纯化水，擦干纯化水后插上梳子，注入浓缩胶。待浓缩胶完全聚合后，将梳子轻轻拔出。
11)取羊毛角蛋白提取液于2*样品缓冲液（2mlph为6.8的0.5mol/l三（羟甲基）氨基甲烷-hcl，2ml甘油，2ml20%十二烷基硫酸钠，0.5mol0.1%溴酚蓝，1mlβ-巯基乙醇的混合溶液）按1∶1比例混合，水浴加热于95℃下加热2min，使蛋白质变性并确保结合最大量的十二烷基硫酸钠。样品冷却至室温后，取羊毛角蛋白15μl加入凝胶点样孔，进行sds-page凝胶电泳。
其中，凝胶电泳具体操作为：将电压调至30v电泳20min。当样品完全进入分离胶后，再将电压调成90v。当样品的溴酚蓝迁移至玻璃胶板底部约1cm时，即可停止电泳。
12)电泳完毕后，切断电源，取出凝胶，浸入步骤4）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡3h，放到凝胶成像仪中，观察样品的电泳图像。
13)将经步骤12)染色样品的蛋白质条带割下来装入1.5ml离心管中，加入350ul去离子水振荡洗涤，吸出液体，重复一次，加入含20％甲醇、6%甘油、10％乙酸的脱色液50ul，静置3min，用去离子水终止反应并重复洗涤一次，吸出多余的液体。加入200ul40mmol/l碳酸氢铵溶液振荡洗涤3min，重复一次。加入130ul乙腈振荡，待胶块变白，吸弃乙腈，置于真空浓缩仪中干燥10min。
14)向步骤13)所得的样品离心管中加入70ul的胰蛋白酶溶液，完全盖住胶粒冰浴45min，使胶粒吸收酶解液溶胀，然后在37℃烘箱中孵育14h进行酶解。
15)采用hplc-ms/ms对其进行质谱分析，根据质谱检测得到的氨基酸序列与氨基酸序列数据库对比得到古代毛织品属于羊毛。
实施例2：
一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法，包括以下步骤：
1）向15ml有机溶剂正庚烷中，加入摩尔比为18:1的水和十二烷基苯磺酸钠，制备油相溶液。
2）向步骤1）所得油相溶液中，加入质量分数为45%的生物质焦油水溶液，再加入摩尔比为1.8:1的正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，用力摇晃，溶液变淡黄色，即得到反相微乳液，于室温静置10h。
3）向步骤2）所得反相微乳液中，加入0.2g十二胺，室温下超声8min。然后向含聚四氟乙烯内胆的反应釜内倒入超声后的混合溶液，在110℃马弗炉中放置2h，取出，自然冷却至室温。用无水甲醇破乳，洗涤数次，离心，制得碳量子点原始溶液。
4）用酒石酸将0.03mol/l的酒石酸钠溶液的ph调为2.5，将此溶液与350μl步骤3）所得碳量子点原始溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液。
5）称取古代毛织品样品，用去离子水反复清洗，去除表面污渍，放入30℃真空烘箱烘干。
6）将步骤5）洗净烘干的样品，加入ph=1.5的hbr溶液，静置1h，用去离子水搓洗至中性，30℃真空烘干。
7）将步骤6）烘干的样品，以1：15的浴比加入含有0.05mol/llibr和0.02mol/l十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节ph值到8，室温下以190w的功率超声30min后，放入微波反应器辐射水解6min。
8）从反应器中取出，倒入三口烧瓶，将三口烧瓶放在恒温水浴锅中，调节水浴温度70℃，通氮气10分钟，排除氧气，缓缓加入10ml的2.5mol/l三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气，以180r/min的速度搅拌搅拌1.8h使羊毛溶解，溶液变澄清，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质。
9）加入20g硫酸铵，搅拌均匀，用4mol/l的硫酸溶液调节滤液ph至羊毛角蛋白等电点4.1-4.3。离心8min，将下层溶液在2℃条件下用用截留分子量为3500的透析袋透析，前9-12h，每隔1h换一次水，第12-24h每隔2h换一次水，第24-48h每隔5h换一次水，第48-72h，每隔10h换一次水，除去表面活性剂、金属盐等杂质。低温真空浓缩至原体积的1/4，得到羊毛角蛋白提取液。
10)组装制胶器，灌注分离胶，加入纯化水，待分离胶的胶面与水形成可见的界面时，轻轻倒出纯化水，擦干纯化水后插上梳子，注入浓缩胶。待浓缩胶完全聚合后，将梳子轻轻拔出。
11)取羊毛角蛋白提取液于2*样品缓冲液（1.8mlph为6.7的0.4mol/l三（羟甲基）氨基甲烷-hcl，1.8ml甘油，1.8ml18%十二烷基硫酸钠，0.4mol0.08%溴酚蓝，0.8mlβ-巯基乙醇的混合溶液）按1∶0.8比例混合，水浴加热于93℃下加热1.5min，使蛋白质变性并确保结合最大量的十二烷基硫酸钠。样品冷却至室温后，取羊毛角蛋白10μl加入凝胶点样孔，进行sds-page凝胶电泳。
其中，凝胶电泳具体操作为：将电压调至28v电泳18min。当样品完全进入分离胶后，再将电压调成80v。当样品的溴酚蓝迁移至玻璃胶板底部约0.8cm时，即可停止电泳。
12)电泳完毕后，切断电源，取出凝胶，浸入步骤4）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡2.5h，放到凝胶成像仪中，观察样品的电泳图像。
13)将经步骤12)染色样品的蛋白质条带割下来装入1ml离心管中，加入300ul去离子水振荡洗涤，吸出液体，重复一次，加入含10％甲醇、4%甘油、8％乙酸的脱色液40ul，静置2min，用去离子水终止反应并重复洗涤一次，吸出多余的液体。加入180ul35mmol/l碳酸氢铵溶液振荡洗涤2min，重复一次。加入110ul乙腈振荡，待胶块变白，吸弃乙腈，置于真空浓缩仪中干燥8min。
14)向步骤13)所得的样品离心管中加入50ul的胰蛋白酶溶液，完全盖住胶粒冰浴40min，使胶粒吸收酶解液溶胀，然后在35℃烘箱中孵育13h进行酶解。
15)采用hplc-ms/ms对其进行质谱分析，根据质谱检测得到的氨基酸序列与氨基酸序列数据库对比得到古代毛织品属于羊毛。
实施例3：
一种利用碳量子点染色的凝胶电泳检测古代毛织品的方法，包括以下步骤：
1）向30ml有机溶剂正庚烷中，加入摩尔比为22:1的水和十二烷基苯磺酸钠，制备油相溶液。
2）向步骤1）所得油相溶液中，加入质量分数为55%的生物质焦油水溶液，再加入摩尔比为2.2:1的正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，用力摇晃，溶液变淡黄色，即得到反相微乳液，于室温静置13h。
3）向步骤2）所得反相微乳液中，加入0.4g十二胺，室温下超声12min。然后向含聚四氟乙烯内胆的反应釜内倒入超声后的混合溶液，在130℃马弗炉中放置4h，取出，自然冷却至室温。用无水甲醇破乳，洗涤数次，离心，制得碳量子点原始溶液。
4）用酒石酸将0.06mol/l的酒石酸钠溶液的ph调为2.8，将此溶液与450μl步骤3）所得碳量子点原始溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液。
5）称取古代毛织品样品，用去离子水反复清洗，去除表面污渍，放入35℃真空烘箱烘干。
6）将步骤5）洗净烘干的样品，加入ph=2.5的hbr溶液，静置2h，用去离子水搓洗至中性，35℃真空烘干。
7）将步骤6）烘干的样品，以1：25的浴比加入含有0.15mol/llibr和0.04mol/l十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节ph值到11，室温下以210w的功率超声50min后，放入微波反应器辐射水解8min。
8）从反应器中取出，倒入三口烧瓶，将三口烧瓶放在恒温水浴锅中，调节水浴温度90℃，通氮气20分钟，排除氧气，缓缓加入25ml的3.5mol/l三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气，以220r/min的速度搅拌搅拌2.2h使羊毛溶解，溶液变澄清，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质。
9）加入35g硫酸铵，搅拌均匀，用5mol/l的硫酸溶液调节滤液ph至羊毛角蛋白等电点4.1-4.3。离心15min，将下层溶液在6℃条件下用用截留分子量为4000的透析袋透析，前9-12h，每隔2h换一次水，第12-24h每隔5h换一次水，第24-48h每隔10h换一次水，第48-72h，每隔15h换一次水，除去表面活性剂、金属盐等杂质。低温真空浓缩至原体积的1/2，得到羊毛角蛋白提取液。
10)组装制胶器，灌注分离胶，加入纯化水，待分离胶的胶面与水形成可见的界面时，轻轻倒出纯化水，擦干纯化水后插上梳子，注入浓缩胶。待浓缩胶完全聚合后，将梳子轻轻拔出。
11)取羊毛角蛋白提取液于2*样品缓冲液（2.2mlph为6.9的0.6mol/l三（羟甲基）氨基甲烷-hcl，2.2ml甘油，2.2ml22%十二烷基硫酸钠，0.6mol0.12%溴酚蓝，1.2mlβ-巯基乙醇的混合溶液）按1∶1.2比例混合，水浴加热于97℃下加热2.5min，使蛋白质变性并确保结合最大量的十二烷基硫酸钠。样品冷却至室温后，取羊毛角蛋白20μl加入凝胶点样孔，进行sds-page凝胶电泳。
其中，凝胶电泳具体操作为：将电压调至32v电泳22min。当样品完全进入分离胶后，再将电压调成100v。当样品的溴酚蓝迁移至玻璃胶板底部约1.2cm时，即可停止电泳。
12)电泳完毕后，切断电源，取出凝胶，浸入步骤4）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡3.5h，放到凝胶成像仪中，观察样品的电泳图像。
13)将经步骤12)染色样品的蛋白质条带割下来装入2ml离心管中，加入400ul去离子水振荡洗涤，吸出液体，重复一次，加入含30％甲醇、8%甘油、12％乙酸的脱色液70ul，静置4min，用去离子水终止反应并重复洗涤一次，吸出多余的液体。加入220ul45mmol/l碳酸氢铵溶液振荡洗涤4min，重复一次。加入160ul乙腈振荡，待胶块变白，吸弃乙腈，置于真空浓缩仪中干燥12min。
14)向步骤13)所得的样品离心管中加入80ul的胰蛋白酶溶液，完全盖住胶粒冰浴50min，使胶粒吸收酶解液溶胀，然后在40℃烘箱中孵育15h进行酶解。
15)采用hplc-ms/ms对其进行质谱分析，根据质谱检测得到的氨基酸序列与氨基酸序列数据库对比得到古代毛织品属于羊毛。
本发明中采用的反向微乳液法制备碳量子点，产率在80%以上，是普通方法的3倍。所用提取羊毛角蛋白方法，溶解率在95%以上，提取率在67%以上，好于原有方法。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。