一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法与流程

本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法。

背景技术：

盐酸右美托咪定是一高选择性的α2受体激动剂，具有镇静催眠、抗焦虑作用的同时也具有镇痛、阻滞交感神经的作用，是一种有效的镇静、镇痛，麻醉辅助药物。提供了独特的镇静类型即“保留意识的镇静”，并能减少术中麻醉、镇痛药物的用量，有效抑制围麻醉期的应激状态，改善患者血液动力学，且没有明显的呼吸抑制，同时可以预防术后恶心呕吐及寒战，并对神经、心脏和肾脏保护具有潜在的益处。盐酸右美托咪定最早由美国雅培与芬兰奥利安公司共同研制成功，1999年在美国上市，2004年在日本上市，2009年在国内上市，目前已在全球30多个国家和地区上市销售。

在国内，盐酸右美托咪定原料或制剂还没有国家标准，有关物质的检测方法至今没有统一的标准。目前多是参考美国药典usp40、相关专利和文献报道，经比对，有关物质检测方法多是流动相的不同。比如美国药典usp40，流动相为缓冲盐(0.89g/l磷酸氢二钠约900ml，用16g/l磷酸二氢钠调ph为7.0，稀释至1000ml)与甲醇的重量份比为40:60，由于usp40中的杂质谱与盐酸右美托咪定原料或制剂中的杂质谱不同，usp40检测方法对盐酸右美托咪定原料或制剂中小极性杂质的检出能力有限，分离度达不到要求，经检测主峰与相邻杂质峰不能分开，有明显的包杂质现象。

相关文献报道了“hplc法测定盐酸右美托咪定有关物质”，采用流动相a：乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾4.08g，置1000ml水中，加2ml三乙胺)＝20:80，流动相b：乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾4.08g，置1000ml水中，加2ml三乙胺)＝80:20，高浓度的磷酸盐缓冲液导致色谱柱的耐受差，同时流动相a、b均为混合溶液，配制较复杂。

专利2016103410755公开了测定盐酸右美托咪定原料药中有关物质含量的方法，流动相a为：0.04-0.06mol/l的磷酸二氢钾溶液，流动相b为：乙腈；专利2016107910596公开了一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，同样以磷酸盐缓冲液和乙腈各作为流动相a、b，所述磷酸盐缓冲液均为取磷酸氢二铵2.64g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节ph值至7.3所得。上述2项专利技术均采用单一的有机相和水相两种流动相直接混合，因极性的差异溶解不彻底、混合不均匀，使噪声偏大，从而导致检测结果灵敏度低。

技术实现要素：

本发明为了解决上述背景技术中的技术问题，提供一种分离度好、操作简便、灵敏度高且能够有效的检测出有关物质的盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种盐酸右美托咪定原料或制剂中有关物质的检测方法，有关物质是式1-式5所示的化合物，分别为杂质c、杂质d、杂质e、杂质f和杂质g，其化学名称和结构式如下：

杂质c

杂质d

杂质e

杂质f

杂质g

将待检测的盐酸右美托咪定在36-38℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置20-30min,然后通过高效液相色谱法进行检测，检测波长为215-220nm,柱温为30-40℃，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相a，乙腈为流动相b，在梯度混合器和进样器之间安装捕集小柱，按下表进行梯度洗脱：

本发明的有益效果是：在本发明中，将待检测的盐酸右美托咪定在36-38℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置20-30min，使得待检测的盐酸右美托咪定在氮气隔绝空气的状态下，在适宜的温度下进行静置一定时间，通过此预处理的盐酸右美托咪定能够很好的保持其稳定性，保护了盐酸右美托咪定内的杂质不受干扰，提升检测结果的稳定性。以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相a，乙腈为流动相b，避免单一的有机相和水相在高效液相色谱仪中进行混合，出现微量结晶析出的问题，导致设备磨损，色谱图中基线噪声相对偏大，检测限和定量限也随之增大，最终导致检测灵敏度降低。本发明采用的方法分离度好、灵敏度高。同时在进样器的前面加装一个捕集小柱，该捕集小柱安装在梯度混合器和进样器之间，可以有效吸附去除流动相中的杂质，同时还可以去除管路和混合器中的杂质，使产品检测的色谱基线平稳，提高准确性。在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述乙腈-磷酸盐缓冲液为取0.01-0.02mol/l的磷酸二氢钾，所述乙腈与磷酸二氢钾的体积比为20:80，用三乙胺调节ph至6.5-7.0。

采用上述进一步方案的有益效果是，乙腈-磷酸盐缓冲液采用上述含量和浓度并且提交至上述ph范围，能够得到更好更准确地检测结果。

进一步，所述乙腈-磷酸盐缓冲液为取0.02mol/l的磷酸二氢钾，所述乙腈与磷酸二氢钾的体积比为20:80，用三乙胺调节ph至6.9。

采用上述进一步方案的有益效果是，上述含量能够得到更好的检测效果，提高了检测的准确性。

进一步，所述检测波长为220nm,柱温为35℃，流速1ml/min。

采用上述进一步方案的有益效果是上述波长、柱温和流速能够更好的提供良好的检测环境。

进一步，所述按下表进行梯度洗脱：

采用上述进一步方案的有益效果是，精确的流动相a和流动相b的体积百分比，能够得到分离度更好的色谱图，为本发明中盐酸右美托咪定的原料及制剂有关物质的检测提供很好的实验检测结果。

本发明可以很好的将盐酸右美托咪定与其他的非活性物质分离，可以准确的测定其杂质的含量，利用本发明的检测方法能够将盐酸右美托咪定与其最难分离的氧化降解产物很好的分离，同时主峰的峰纯度符合要求，较难洗脱的杂质峰也能较快的洗脱下来，本发明的检测方法可以用于盐酸右美托咪定原料或制剂的质量控制。为该产品的质量控制及标准的统一建立提供良好的推进作用。

附图说明

图1是使用本发明检测方法的杂质c的色谱图；

图2是使用本发明检测方法的杂质d的色谱图；

图3是使用本发明检测方法的杂质e的色谱图；

图4是使用本发明检测方法的杂质f的色谱图；

图5是使用本发明检测方法的杂质g的色谱图；

图6是使用本发明检测方法的盐酸右美托咪定对照品的色谱图；

图7是使用本发明检测方法的盐酸右美托咪定及其杂质c、d、e、f、g混合后进样的色谱图；

图8是使用背景技术中的usp40检测方法的色谱图；

图9是使用背景技术中的usp40检测方法检测盐酸右美托咪定(中间体1)的色谱图；

图10是使用本发明检测方法检测盐酸右美托咪定(中间体1)的色谱图；

图11使用背景技术中相关文献中的方法进行检测的色谱图；

图12是使用专利2016103410755的检测方法的色谱图(由于基线噪音需放大纵坐标进行观察，故色谱图只包含基线部分)；

图13是使用本发明检测方法的色谱图(由于基线噪音需放大纵坐标进行观察，故色谱图只包含基线部分)；

图14是使用本发明检测方法的色谱图(没有安装捕集小柱)；

图15是使用本发明检测方法的色谱图(安装捕集小柱)。

ret.time：保留时间，height:高度，area：峰面积，rel.area：峰面积百分比，resol：分离度，asy：拖尾因子，plates：理论塔板数

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1、

如图1-7，盐酸右美托咪定对照品溶液、各盐酸右美托咪定的杂质定位液(c、d、e、f、g)和盐酸右美托咪定与各杂质混合后溶液分别进行检测，将待检测的盐酸右美托咪定在36℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置30min,然后通过高效液相色谱法进行检测，均采用相同的液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—磷酸盐缓冲液(取0.02mol/l的磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9)为(20:80，v/v)流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220nm，柱温为35℃,流速为1ml/min，填充柱内径3.9mm,柱长20cm,在进样器前加装一个捕集小柱，所述捕集小柱采用ghost-bustercolumn,规格大小采用长为4.6mm,直径为50mm，均按照按下表进行梯度洗脱(v/v)：

检测结果见表1，图谱见图1-7。

表1

结论：盐酸右美托咪定峰与各杂质对照品峰及各杂质对照品峰之间分离度均大于1.5，符合有关物质检测要求，说明本发明的检测结果准确。

实施例2、

如图8所示，采用美国药典usp40的方法对盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质进行检测，采用高效液相色谱法，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(0.89g/l磷酸氢二钠约900ml，用16g/l磷酸二氢钠调ph为7.0，稀释至1000ml)-甲醇＝40:60为流动相，检测波长220nm，柱温为30℃，流速为1.0ml/min。填充柱内径4.6mm,柱长10cm。

色谱图结果见图8。在图中可以明显看出，横坐标供试品中主峰(10.568min)与相邻杂质峰(11.465min)未分开，有明显的包杂质现象，该检测方法分离度达不到要求。

对美国药典usp40有关物质检测方法与本发明专利有关物质检测方法进行杂质检出能力对比，本发明的检测步骤和条件与实施例1中相同，对美国药典usp40有关物质检测方法与背景技术中叙述的美国药典usp40的检测方法相同，结果见表2，图谱分别见图9、图10。

表2

从图8和表2可以看出：美国药典usp40方法中主峰与杂质c达不到基线分离，由于为等度方法，检杂能力相对本专利方法较弱；本专利方法采用梯度方法，杂质c与主峰分离度大于1.5，满足检测要求。从分离度及检杂能力结果来看，本专利方法较usp40方法更优。

实施例3、

如图11所示，采用文献方法对盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质进行检测，采用高效液相色谱法，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.03mol/l磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾4.08g，加1000ml水使溶解，加2ml三乙胺)：乙腈(80:20)为流动相a，磷酸盐缓冲液：乙腈(20:80)为流动相b，检测波长220nm，柱温为35℃，流速为1.0ml/min。按下表进行梯度洗脱(v/v)：

色谱图结果见图11。该方法检测样品为经过破坏后的样品，故色谱柱的杂质峰较多，在图11中可以看出，杂质峰分离度不如本发明。而且在实际操作过程中，由于0.03mol/l的磷酸盐缓冲液浓度较大，对色谱柱的损害也较大，色谱柱的使用寿命缩短，增加实验成本，并且流动相a、b均为混合溶液，配制较复杂。

实施例4、

采用背景技术中的专利2016103410755，对盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质进行检测，采用高效液相色谱法，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取0.02mol/l的磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9)为流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速为1.0ml/min。按下表进行梯度洗脱(v/v)：

色谱图结果见图12。从图中可以明显看出，采用单一的有机相和水相在高效液相色谱仪中进行混合，会出现微量结晶析出的现象，导致设备磨损，色谱图中基线噪声相对偏大，检测限和定量限也随之增大，最终导致检测灵敏度降低。与采用本发明检测方法的图13进行对比，可以明显看出，色谱图中基线噪声大。

本发明的方法为将待检测的盐酸右美托咪定在36℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置30min,然后通过高效液相色谱法进行检测，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—磷酸盐缓冲液(取0.02mol/l的磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9)为(20:80，v/v)流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速为1.0ml/min，在进样器前加装一个捕集小柱，所述捕集小柱采用ghost-bustercolumn,规格大小采用长为4.6mm,直径为50mm。按下表进行梯度洗脱(v/v)：

得到的色谱图为图13。

实施例5、

盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测，将待检测的盐酸右美托咪定在36℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置30min,然后通过高效液相色谱法进行检测，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—磷酸盐缓冲液(取0.02mol/l的磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9)为(20:80，v/v)流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速为1ml/min。按下表进行梯度洗脱(v/v)：

色谱图结果见图14。在图中可以明显看出在横坐标55-80min流动相变换梯度时，基线上出现很多毛刺，影响杂质峰的判断。所以同样采用本发明方法进行检测却没有安装捕集小柱，对检测结果的影响比较大，不利于检测的准确性和稳定性。

实施例6、

采用本发明方法对盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质进行检测，将待检测的盐酸右美托咪定在36℃的温度下在充满氮气的储物瓶中静置30min,然后通过高效液相色谱法进行检测，液相色谱法条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—磷酸盐缓冲液(取0.02mol/l的磷酸二氢钾，用三乙胺调节ph至6.9)为(20:80，v/v)流动相a，乙腈为流动相b，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速为1ml/min，在进样器前加装一个捕集小柱，所述捕集小柱采用ghost-bustercolumn,规格大小采用长为4.6mm,直径为50mm，按下表进行梯度洗脱(v/v)：

色谱图结果见图15。在图中可以明显看出安装了捕集小柱后，图谱基线平稳。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。