检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的试纸条组件的制作方法

本实用新型涉及动物病毒抗体检测领域。更具体地说，本实用新型涉及一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的试纸条组件。

背景技术：

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)由PRRS病毒(PRRSV)引起，以母猪流产、死产和产木乃伊胎及新生仔猪和保育猪呼吸困难为主要特征。在体内，PRRSV感染主要位于肺和淋巴器官的巨噬细胞，并破坏巨噬细胞。通过引起病猪免疫抑制，PRRSV在病猪体内造成持续性感染及其它病原体的继发感染，导致母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸困难和死亡，给养猪业造成重大经济损失。而快速有效监测猪群中PRRSV流行，可为PRRS的防控提供理论依据。NS1是猪繁殖与呼吸综合征病毒的重要非结构蛋白，只有在病毒感染、复制过程中表达，因此，猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒感染猪体内会产生NS1抗体，而PRRSV灭活疫苗、NS1缺失PRRSV弱毒疫苗免疫猪，体内不会产生NS1抗体，这样通过检测NS1抗体，可以鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒感染和疫苗免疫。目前，虽然ELISA可以检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体，但是检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速检测需要。采用试纸条检测将会带来非常大的便利。

目前，市场上有检测早孕、血糖、尿液等多种类型的试纸条，但是该些试纸条的具体层结构在应用于针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的检测时，为避免外界污染，将试纸条设置在试纸壳内检测，然而，猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的检测具有批量化的特点，但具有该层结构的试纸条进行批量检测时，由于试纸壳结构复杂，更换试纸非常繁琐，降低了检测效率。

因此，开发一种能够快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的设备十分必要。

技术实现要素：

本实用新型的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本实用新型还有一个目的是提供一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的试纸条组件，其操作简单方便，易于更换试纸条，适于批量检测，提高检测效率。

为了实现根据本实用新型的这些目的和其它优点，提供了一种快速检测检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的试纸条组件，试纸条包括：水平设置的支撑层，平铺固设在支撑层上顺次拼接的吸附纤维层、金标纤维层、纤维素膜层、吸水层，其中，所述试纸条通过卡固壳固定，所述卡固壳包括：

固定板，其为长方形板体，所述固定板的长度方向的一端设有握持部和夹紧件，所述夹紧件包括固定片、夹片以及扭力弹簧，所述固定片固设在所述固定板的一端、并与所述固定板处于同一平面内，所述夹片的一端通过所述扭力弹簧与所述固定片连接，当所述夹紧件夹设所述试纸条的吸水层所在的端部后，所述夹片的另一端与所述试纸条的吸水层接触，所述固定板的长度方向的另一端设置一对卡位柱，一对卡位柱垂直于所述固定板设置，一对卡位柱之间的间距与所述试纸条的宽度相同，一对卡位柱的高度高于所述试纸条的厚度，所述试纸条的吸附纤维层所在的端部伸出所述固定板；

扣合板，其为长条形的弧形板，其弧度设置为当所述扣合板扣合在所述固定板上时，一对卡位柱与所述扣合板接触，所述扣合板与所述固定板在长度方向一侧铰接，所述扣合板上开设椭圆形通孔，所述椭圆形通孔正对所述纤维素膜层上的检测印记线和对照印记线，所述椭圆形通孔内密封设有透明塑料片；

锁紧件，其包括锁紧柱、套筒以及锁紧环，所述锁紧柱设置在所述扣合板背离所述固定板的侧面上，所述锁紧柱沿其周向设有凹槽，所述套筒轴向垂直于所述固定板的长度方向设置在所述夹片的一端，并与所述扭力弹簧分别位于所述夹片的两侧，所述锁紧环活动穿设于所述套筒，其中，所述锁紧柱的角度设置为：当所述扣合板与所述固定板扣合时，所述锁紧柱平行于所述夹片，且所述锁紧环卡设在所述锁紧柱的凹槽上。

优选的是，还包括一对保护膜，其中一个保护膜敷设在吸附纤维层和金标纤维层的上表面、另一个保护膜敷设在吸水层的上表面。

优选的是，吸附纤维层与金标纤维层之间、金标纤维层与纤维素膜层之间、纤维素膜层与吸水层之间的拼接处设置为彼此咬合的凹凸结构。

优选的是，所述纤维素膜层上以纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液设置检测印迹线，以兔/羊抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1IgG溶液设置对照印迹线，检测印迹线与对照印迹线间隔排列，所述金标纤维层上附着有以胶体金标记的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白抗原液。

优选的是，位于吸附纤维层和金标纤维层上表面是保护膜上设有样品标记线，该样品标记线位于吸附纤维层上方距离金标纤维层0.3～0.7cm。

优选的是，所述检测印迹线靠近所述金标纤维层设置，所述对照印迹线远离所述金标纤维层设置。

优选的是，所述吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述金标纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述纤维素膜层由硝酸纤维素、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟乙烯制成；所述吸水层由吸水纸制成。

优选的是，一对保护膜的颜色不相同。

优选的是，所述样品标记线位于吸附纤维层上方距离金标纤维层0.5cm。

优选的是，所述样品标记线处于所述卡固壳内部。

本实用新型至少包括以下有益效果：

本实用新型将试纸条与卡固壳配合使用，防止试纸条在检测时受到来自于外界不明液体或气体的意外污染，确保检测的准确性，试纸条安装在卡固壳时简单方便，易于更换试纸条，适于批量检测，提高检测效率。

本实用新型的试纸条检测特异性强，敏感性高，结果显示直观、准确，不易出现假阴性和假阳性误判，本实用新型提供的试纸条操作简单，成“一步式”或“傻瓜式”，应用范围广，便于普遍推广应用，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较好的经济、社会效益。

本实用新型的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本实用新型的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本实用新型的其中一个技术方案的所述试纸条的结构示意图；

图2为本实用新型其中一个技术方案的所述卡固壳的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

如图1-2所示，本实用新型提供了一种快速检测检测猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的试纸条组件，试纸条包括：水平设置的支撑层1，平铺固设在支撑层1上顺次拼接的吸附纤维层2、金标纤维层3、纤维素膜层4、吸水层5，其中，所述试纸条通过卡固壳固定，所述卡固壳包括：

固定板10，其为长方形板体，所述固定板10的长度方向的一端设有握持部11和夹紧件，所述夹紧件包括固定片12、夹片13以及扭力弹簧14，所述固定片12固设在所述固定板10的一端、并与所述固定板10处于同一平面内，所述夹片13的一端通过所述扭力弹簧14与所述固定片12连接，当所述夹紧件夹设所述试纸条的吸水层5所在的端部后，所述夹片13的另一端与所述试纸条的吸水层5接触，所述固定板10的长度方向的另一端设置一对卡位柱15，一对卡位柱15垂直于所述固定板10设置，一对卡位柱15之间的间距与所述试纸条的宽度相同，一对卡位柱15的高度高于所述试纸条的厚度，所述试纸条的吸附纤维层2所在的端部伸出所述固定板10；

扣合板16，其为长条形的弧形板，其弧度设置为当所述扣合板16扣合在所述固定板10上时，一对卡位柱15与所述扣合板16接触，所述扣合板16与所述固定板10在长度方向一侧铰接，所述扣合板16上开设椭圆形通孔17，所述椭圆形通孔17正对所述纤维素膜层4上的检测印记线6和对照印记线7，所述椭圆形通孔17内密封设有透明塑料片；

锁紧件，其包括锁紧柱18、套筒19以及锁紧环20，所述锁紧柱18设置在所述扣合板16背离所述固定板10的侧面上，所述锁紧柱18沿其周向设有凹槽21，所述套筒19轴向垂直于所述固定板10的长度方向设置在所述夹片13的一端，并与所述扭力弹簧14分别位于所述夹片13的两侧，所述锁紧环20活动穿设于所述套筒19，即锁紧环20能够以套筒19为轴线来回摆动，其中，所述锁紧柱18的角度设置为：当所述扣合板16与所述固定板10扣合时，所述锁紧柱18平行于所述夹片13，且所述锁紧环20卡设在所述锁紧柱18的凹槽21上。

本实用新型在使用时，用力捏住固定板10和夹片13，使夹片13远离固定板10，与固定板10产生间隙，将试纸条的吸水层5所在的端部插入间隙中，放松固定板10和夹片13，是夹片13与试纸条接触，实现夹紧试纸条，然后将试纸条的吸附纤维层2所在的端部穿过一对卡位柱15伸出于固定板10，再将扣合板16扣合在固定板10上，此时扣合板16覆盖夹片13的一部分，转动夹片13上的锁紧环20使之套设在锁紧柱18上并卡在凹槽21内，使得扣合板16稳定地扣合在固定板10上，形成容纳试纸条的腔体，并将试纸条遮盖，然后手持握持部11将试纸条即卡固壳竖直，使露在卡固壳外部的试纸条(试纸条的吸附纤维层2所在的端部)插入待检测样品溶液中，进行检测。

本实用新型的试纸条为顺次拼接，表面平整，利于被检测溶液层析，检测特异性强，敏感性高。本实用新型将试纸条与卡固壳配合使用，防止试纸条在检测时受到来自于外界不明液体或气体的意外污染，确保检测的准确性，试纸条安装在卡固壳时简单方便，易于更换试纸条，适于批量检测，提高检测效率。

在另一技术方案中，还包括一对保护膜8，其中一个保护膜8敷设在吸附纤维层2和金标纤维层3的上表面、另一个保护膜8敷设在吸水层5的上表面，保护吸附纤维层2、金标纤维层3、吸水层5，防止该些层受到不必要的意外污染而使试纸条的失效，无法检测。

在另一技术方案中，吸附纤维层2与金标纤维层3之间、金标纤维层3与纤维素膜层4之间、纤维素膜层4与吸水层5之间的拼接处设置为彼此咬合的凹凸结构，当检测样品时，可使样品液沿吸附纤维层2顺利渗析至吸水层5。

在另一技术方案中，所述纤维素膜层4上以纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液设置检测印迹线，以兔/羊抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1IgG溶液设置对照印迹线，检测印迹线与对照印迹线间隔排列，所述金标纤维层3上附着有以胶体金标记的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白抗原液。

此技术方案中，检测印迹线和对照印迹线均显示棕红色，即在纤维素膜层4上显示两条棕红色印迹，表示在被检测样品中有病毒抗体检出，结果为阳性；在纤维素膜层4上只显示一条棕红色对照印迹，表示在被检测样品液中未检出病毒抗体，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。金标纤维层3以胶体金标记重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白为基础制备而成，金标NS1蛋白中金颗粒与蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率，检测特异性强，敏感性高。

检测时的原理为：当试纸条测试端(即试纸条的吸附纤维层2所在的端部)插入待检测样品溶液后，待检测样品溶液通过层析作用带动待检测样品溶液中的猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体及金标纤维层3中的金标抗原(即重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白抗原液)一起向纤维素膜层4扩散，并最终渗入试纸条的吸水层5中，扩散过程中待检测样品溶液中的猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体可与该抗体相对应的胶体金标记的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白抗原液相结合，进而与纤维素膜层4上的检测印迹线中的纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液结合，从而显示出棕红色的检测印迹线，以T表示；而对照印迹线中的兔/羊抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1IgG溶液则可与以胶体金标记的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1蛋白抗原液结合，形成棕红色对照印迹，以C表示。如果待检测样品液中没有猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体，试纸条的纤维素膜层4上只显示出一条棕红色对照印迹线C；如果纤维素膜层4上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作失误。

检测操作方法为：a、检测样品液的制备：无菌取被检动物的血液，并分离血清，以生理盐水作1:200倍的稀释血清，得到待测样品；b、检测操作：将该试纸条测试端(即试纸条的吸附纤维层2所在的端部)插入待检测样品中，插入深度不超过样品印迹线，约30秒后取出试纸条，水平放置约1-5分钟，同时观察结果；c结果判断：如果在试纸条的纤维素膜层4上只显示出一条棕红色对照印迹C，表示测检结果呈阴性，说明在被检样品液中未检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体；如果试纸条上的纤维素膜层4出现棕红色的对照印迹C和检测印迹T，表示检测结果呈阳性，即在待检样品中检出猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作有误。

纤维素膜层4上含有一条/个检测印迹时，检测印迹、对照印迹的排列形式为“||”、“十十”、“┬┬”、“┴┴”、“├├”、“┤┤”和“●●”中的任一种；纤维素膜层4上含有两条/个检测印迹时，检测印迹、对照印迹的排列形式为“|||”、“十十十”、“┬┬┬”、“┴┴┴”、“├├├”、“┤┤┤”和“●●●”中的任一种。

本实用新型根据ELISA的基本原理，用免疫层析试纸检测病毒抗体，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测结果，因此该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。

在另一技术方案中，位于吸附纤维层2和金标纤维层3上表面是保护膜8上设有样品标记线9，便于确定试纸条的插入样品的深度，该样品标记线9位于吸附纤维层2上方距离金标纤维层30.3～0.7cm，考虑到试纸条的长度即检测效果的合理间距。样品标记线9与试纸条的吸附纤维层2所在的端部之间印有箭头及MAX字样。

在另一技术方案中，所述检测印迹线靠近所述金标纤维层3设置，所述对照印迹线远离所述金标纤维层3设置，根据检测时的检测原理的需要进行的合理设置。

在另一技术方案中，所述吸附纤维层2由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述金标纤维层3由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述纤维素膜层4由硝酸纤维素、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟乙烯制成；所述吸水层5由吸水纸制成。该些原料均来源广泛、成本低。

在另一技术方案中，一对保护膜8的颜色不相同，有助于区别吸水层5所在的端部和吸附纤维层2所在的端部，避免试纸条安装错误而导致检测错误或检测不出结果，优选吸水层5所在的端部的保护膜8为黄色，吸附纤维层2所在的端部的保护膜8为白色。

在另一技术方案中，所述样品标记线9位于吸附纤维层2上方距离金标纤维层30.5cm，优选的合理间距。

在另一技术方案中，所述样品标记线9处于所述卡固壳内部，扣合板16扣合在固定板10上时，形成容纳试纸条的容纳腔，样品标记线9处于该容纳腔内，便于检测时直接控制卡固壳不与待检测样品溶液接触即可，无须费力寻找样品标记线9。

尽管本实用新型的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本实用新型的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本实用新型并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。