一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法与流程

本发明涉及药物检测领域，尤其涉及一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法。
背景技术：
：盐酸利多卡因（lidocainehydrochloride）为酰胺类局麻药，主要用于阻滞麻醉、硬外膜麻醉，也被用于抗心率失常。有关物质，也称为杂质，主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。目前，盐酸利多卡因可制成多种制剂形式，如注射剂、胶浆、凝胶等，现有公开的有关物质的测定方法，不能实现对盐酸利多卡因有关物质的测定，为严格控制药物的质量，提高药物的安全性，减少对人体和环境造成的危害，因此需要提供一种盐酸利多卡因有关物质的测定方法。技术实现要素：本发明的目的是解决现有盐酸利多卡因有关物质测定困难的问题，提供一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法，该方法能够检测到更多杂质，而且经过方法学验证，检测结果准确可靠。为了实现以上目的，本发明采用的技术方案是：一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法，色谱条件如下：固定相选用键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶选用为填充剂；色谱柱粒径为5μm；检测波长：225～235nm；流速：0.8～1.2ml/min；柱温：30～40℃，流动相：以质量份数计，由50～80份0.035mol/l的磷酸盐缓冲液、20~50份有机溶剂组成；采用的检测器为高效液相色谱仪。为了进一步优化本发明，可优先选用以下技术方案：优选的，所述色谱柱选用安捷伦agilent5hc-c18色谱柱、月旭ultimatexb-c18色谱柱、watersxterrac18色谱柱、德国mnnucleosil100-5c18色谱柱中的一种。优选的，所述方法的流动相以质量份数计，由70份磷酸二氢钾溶液、30份乙腈组成。优选的，所述磷酸二氢钾溶液ph为8.0，用10%氢氧化钠溶液来调节ph值。优选的，所述方法的流速为1.0ml/min。优选的，所述方法的柱温为35℃。本发明的有益效果是：该方法能检测到11个杂质，而且各杂质峰、杂质峰与盐酸达克罗宁峰之间的分离度均大于1.5，各杂质相关系数r2均大于0.9990，各杂质平均回收率均在90~108%之间，表明此方法专属性好、重现性高，更适合用于测定盐酸利多卡因有关物质，结果准确可靠。附图说明图1是本发明一种盐酸利多卡因系统适用性色谱图；图2是杂质a的结构图；图3是杂质b的结构图；图4是杂质c的结构图；图5是杂质d的结构图；图6是杂质e的结构图；图7是杂质f的结构图；图8是杂质g的结构图；图9是杂质h的结构图；图10是杂质i的结构图；图11是杂质j的结构图；图12是杂质k的结构图。具体实施方式实施例1：一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法，色谱条件如下：固定相选用键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶选用为填充剂；色谱柱粒径为5μm；检测波长：225nm；流速：0.8ml/min；柱温：30℃，流动相：以质量份数计，由50ml0.035mol/l的磷酸盐缓冲液、20ml有机溶剂组成；磷酸二氢钾溶液用10%氢氧化钠溶液来调节ph值至8.0，采用的检测器为高效液相色谱仪。实施例2：一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法，色谱条件如下：固定相选用键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶选用为填充剂；色谱柱粒径为5μm；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃，流动相：以质量份数计，由70ml0.035mol/l磷酸二氢钾溶液、30ml乙腈组成，采用的检测器为高效液相色谱仪。实施例3：一种高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法，色谱条件如下：固定相选用键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶选用为填充剂；色谱柱粒径为5μm；检测波长：235nm；流速：1.2ml/min；柱温：40℃，流动相：以质量份数计，由80ml0.035mol/l的磷酸盐缓冲液、50ml份有机溶剂组成；采用的检测器为高效液相色谱仪。实验一：系统适用性试验各杂质溶液贮备液的配制：取杂质a～k各适量，分别加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含上述杂质500μg的溶液，作为各杂质溶液贮备液。各杂质定位溶液的配制：精密量取上述各杂质溶液贮备液1ml分别置不同100ml量瓶中，加流动相稀释制成每1ml中各约含上述杂质5μg的溶液，作为各杂质定位溶液。混合对照溶液的配制：精密量取上述各杂质溶液贮备液1ml共置于同一100ml量瓶中，取盐酸利多卡因适量共置于同一100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含杂质a～k及盐酸利多卡因5μg的溶液，作为混合对照溶液。供试品溶液的配制：精密称取盐酸利多卡因适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸利多卡因5mg的溶液，摇匀，即得。对照溶液的配制：精密量取上述供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。测定：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾4.85g，加水1000ml溶解，用10%氢氧化钠溶液调节ph值至8.0）：甲醇：乙腈=60:10:30；柱温为35℃；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min。精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表1，系统适用性色谱图见附图1。表1有关物质方法学-专属性-混合对照结果结论：空白稀释液不干扰供试品溶液中有关物质的检测，混合对照溶液中各峰与其相邻色谱峰之间的分离度均符合规定，表明本发明提供的高效液相色谱法测定盐酸利多卡因有关物质的方法的专属性良好。实验二：线性与范围试验及检测限与定量限试验各杂质溶液贮备液的配制：精密称取杂质a~k各10mg，分别置不同量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含杂质a50μg/ml，约含杂质b~k500μg/ml，分别作为杂质a~k溶液贮备液。线性溶液的配制：分别精密量取上述各杂质溶液贮备液1ml置同一50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得线性200%溶液；逐步稀释制成线性150%、线性100%、线性40%、线性20%、线性10%、线性4%、线性2%、线性1%、线性0.5%、线性0.125%溶液。精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2、表3。表2有关物质方法学-线性结果表3有关物质方法学-检测限与定量限结果杂质名称检测限（μg/ml）定量限（μg/ml）杂质a0.006250.0125杂质b0.050.1杂质c0.0250.05杂质d0.0031250.00625杂质e0.0250.1杂质f0.050.2杂质g0.0250.1杂质h0.0250.05杂质i0.050.2杂质j0.050.2杂质k0.0250.1结论：杂质a在0.0125~1.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的2.5%~200%），线性方程为y=85054x-1381.5，相关系数r2为0.9993>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质b在0.1~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的2%~200%），线性方程为y=19675x-1425.2，相关系数r2为0.9993>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质c在0.05~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的1%~200%），线性方程为y=21838x-3521.9，相关系数r2为0.9989>0.990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质d在0.00625~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的0.125%~200%），线性方程为y=14535x+216.62，相关系数r2为1>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质e在0.1~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的2%~200%），线性方程为y=18466x-1756.2，相关系数r2为0.9997>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质f在0.2~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的4%~200%），线性方程为y=27460x-3523.2，相关系数r2为0.9998>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质g在0.05~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的1%~200%），线性方程为y=15029x-620.06，相关系数r2为0.9999>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质h在0.05~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的1%~200%），线性方程为y=17147x-852.24，相关系数r2为0.9999>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质i在0.2~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的4%~200%），线性方程为y=33885x-4640.5，相关系数r2为0.9997>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质j在0.2~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的4%~200%），线性方程为y=26859x-3157.1，相关系数r2为0.9999>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。杂质k在0.1~10.0μg/ml浓度范围内（相当于限度浓度的2%~200%），线性方程为y=16565x-185.88，相关系数r2为1>0.9990，峰面积与浓度线性关系良好。实验三：回收率试验供试品溶液贮备液：精密称取盐酸利多卡因适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含50mg的溶液。供试品溶液：精密量取供试品溶液贮备液1ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。各杂质溶液贮备液：精密称取杂质a~k各10mg，分别置不同量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含杂质a50μg/ml，约含杂质b~k500μg/ml，分别作为杂质a~k溶液贮备液。混合杂质对照溶液贮备液：分别精密量取上述各杂质溶液贮备1ml置同一量瓶中，摇匀，即得。回收率对照品溶液：精密量取上述混合杂质对照溶液贮备液0.5ml、1ml、1.5ml置不同10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得50%、100%、150%回收率对照品溶液。回收率供试品溶液：精密量取供试品溶液贮备液1ml置10ml量瓶中，平行量取9份，平均分为3组，分别精密加入上述混合杂质对照溶液贮备液0.5ml、1ml、1.5ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得50%、100%、150%回收率供试品溶液。精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表4。表4有关物质方法学-回收率结果名称相当于限度50%相当于限度100%相当于限度150%平均回收率%杂质a97.598.4101.899.2杂质b100.5100.598.9100.0杂质c102.098.6101.0100.5杂质d98.599.1100.099.2杂质e102.1101.098.6100.6杂质f99.798.1100.899.5杂质g96.9106.1102.1101.7杂质h97.8104.499.9100.7杂质i99.297.999.498.8杂质j98.599.3101.399.7杂质k99.7101.1100.3100.4结论：50%、100%、150%浓度下，杂质a～k组内平均回收率及组间平均回收率在90%~108%之间，表明本方法用于检测杂质a~k，准确度良好。实验四：耐用性试验供试品溶液：精密称取盐酸利多卡因适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含5mg的溶液。精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表5。表5有关物质方法学-耐用性结果结论：色谱条件有微小变动（柱温变化±5℃、流速变化±0.05ml/min、波长变化±2nm、水相ph变化±0.2、流动相比例变化±2%）时，杂质分离情况良好，杂质检出量均无明显差异，表明本色谱条件耐用性良好。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12