急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒的制作方法

本发明属于急性呼吸窘迫综合征诊断领域。

背景技术：

急性呼吸窘迫综合征(ards)是由肺内原因和/或肺外原因引起的，以顽固性低氧血症为显著特征的临床综合征，因高病死率而倍受关注。

ards诊断现行的标准是柏林ards标准，该标准从起病时间、氧合指数、肺水肿来源和x线胸片共4个方面对ards进行诊断(具体可参考“唐朝霞，管向东，急性呼吸窘迫综合征诊断标准，中国实用内科杂志，2013年第33卷第11期”)，较为复杂和耗时。在医疗资源紧缺的今天，ards患者有时会因为医疗资源挤兑而得不到及时诊断，导致病情延误。因此，开发耗时更短的ards诊断工具具有十分重大的现实意义。

tnf相关凋亡诱导配体的受体2，也称死亡受体5(dr5)，在uniprotkb数据库中编号为o14763，是细胞毒性配体tnfsf10/trail的受体，负责招募caspase-8并起始caspase介导的细胞凋亡。由于dr5与配体结合后可迅速诱导细胞凋亡，目前研究者们主要关注如何利用该原理，对肿瘤细胞进行特异性的杀灭。

而dr5与癌症以外的肺病的关系，目前还未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种诊断ards的试剂盒。

本发明的技术方案包括：

检测血清中dr5蛋白含量的试剂在制备急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒中的用途。

如前述的用途，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为酶联免疫吸附检测试剂。

如前述的用途，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为液相色谱方法用试剂或胶体金检测试剂。

如前述的用途，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为r&dsystemsluminex液相芯片检测试剂。

一种急性呼吸窘迫综合征检测试剂盒，它包括检测血清中dr5蛋白含量的试剂。

如前述的检测试剂盒，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为酶联免疫吸附检测试剂。

如前述的检测试剂盒，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为液相色谱方法用试剂或胶体金检测试剂。

如前述的检测试剂盒，所述检测血清中dr5蛋白含量的试剂为r&dsystemsluminex液相芯片检测试剂。

发明人发现，ards患者与健康人的血清中dr5蛋白的含量存在显著性区别，ards患者血清中dr5蛋白含量远高于健康人。常规蛋白检测方法例如液相色谱(比如高效液相色谱、超高效液相色谱)、酶联免疫吸附检测、胶体金均可对dr5蛋白进行检测，用已有健康人和或ards患者的dr5蛋白水平数据作为参照，即可进行诊断ards。

进一步地，本发明实施例1中使用的r&dsystemsluminex液相芯片，检测了ards患者与健康人的血清中dr5蛋白的水平，并作出了roc分析，得到的曲线下面积(auc)为0.992，当检测临界值(cut-off值)为79.69pg/ml时，其特异性为100％，灵敏度为96.2％，表明理论上误诊可能性为0，漏诊可能性仅3.8％，准确性很高。在所有检测单个生化指标的疾病诊断技术中，很少能达到如此高的准确性，说明本发明检测试剂盒的性能非常优良。

本发明的试剂盒是根据前述发现发明的试剂盒，该试剂盒可以通过检测血清中dr5蛋白，实现ards客观、准确、快速的诊断。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1是两组中血清dr5蛋白的水平比较的散点图。

图2是dr5蛋白浓度与ards的roc曲线图。

具体实施方式

实施例1ards患者血清中dr5蛋白检测

1.被检对象

ards患者(a组)56人，健康人(b组)32人。被检对象人群在实验前均已经知情并同意。

2.方法

留取被检对象的血液，收集血清，针对dr5蛋白进行r&dsystemsluminex液相芯片检测，具体地，包括如下步骤：

(1)重悬混匀稀释的检测混合液，向每个酶标板孔内加入50μl混合液；

(2)加入50μl标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；

(3)100μl洗板液洗板3次；

(4)每孔内加入50μl生物素标记的抗体混合物，封膜后室温摇晃孵育30min；

(5)100μl洗板液洗板3次；

(6)向每孔中加入100μl显色液，室温摇晃混匀2min；

(7)90min内读板(bio-rad)；

3.结果

(1)ards患者血清中dr5水平显著高于健康人

对a、b两组血清中dr5蛋白的检测结果如图1所示，ards患者血清中dr5的平均值显著高于健康人血清中dr5，统计p值＜0.001；

(2)血清dr5蛋白在ards的诊断中具有较大价值

对a、b组血清中dr5蛋白含量的roc分析结果如图2所示，roc的曲线下面积(auc)高达0.992；当检测临界值(cut-off值)为79.69pg/ml时，其特异性为100％，灵敏度为96.2％。

实验结果说明，通过检测血清中dr5蛋白的水平，理论上误诊可能性为0，漏诊可能性仅3.8％，准确性很高；本发明的试剂盒性能十分优秀。

实施例2本发明的试剂盒

1.本发明试剂盒的组成

2.试剂盒使用方法

(1)向96孔板中每孔内加入50μl标准品或样本，封膜后，室温摇晃孵育2小时；

(2)100μl洗板液洗板3次；

(3)每孔内加入50μl生物素标记的二抗，封膜后室温摇晃孵育30min；

(4)100μl洗板液洗板3次；

(5)向每孔中加入50μl显色底物，室温摇晃混匀2min；

(6)酶标仪读数；

当血清中dr5蛋白的检测值为79.69pg/ml(即cut-off值)以上，可判别为ards。

综上，本发明的试剂盒通过对dr5蛋白的定量检测，可实现对ards的快速、准确的诊断，应用前景良好。