检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与流程

文档序号:24232233发布日期:2021-03-12 13:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试纸条,包括pvc底板,其特征在于:

所述pvc底板上从左到右依次搭接样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸;

所述胶体金垫上包被有胶体金标记的重组新型冠状病毒rbd蛋白;

所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2检测线,以及包被有鼠抗鸡igg抗体作为质控线。

2.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述胶体金标记的重组新型冠状病毒rbd蛋白的浓度为500μg/ml-5mg/ml,其在胶体金垫上的包被量为400ul;

所述血管紧张素转化酶2的浓度为0.5-2.6mg/ml,包被量为30ul;

所述鼠抗鸡igg抗体的浓度为0.5-3mg/ml,包被量为30ul。

3.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述胶体金垫上还包括分离剂,所述分离剂为酪蛋白、bsa或peg6000中的任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求3所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述分离剂为浓度10%的peg6000。

5.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述胶体金垫上的胶体金颗粒的粒径为30-40nm。

6.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述检测线的距离为3-5cm,所述检测线与质控线的距离为3-5cm,检测线和质控线相互不受干扰。

7.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于:所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜;所述胶体金垫为玻璃纤维膜。

8.根据权利要求1-7任一项所述的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)制备胶体金垫,在胶体金垫上包被胶体金标记的重组新型冠状病毒rbd蛋白;

(2)制备硝酸纤维素膜,在硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2检测线,以及包被有鼠抗鸡igg抗体作为质控线;

(3)在pvc底板上从左到右依次搭接样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸,即得。

9.根据权利要求8所述的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于:所述胶体金垫的制备,包括以下步骤:

(1)器皿洗干净,采用硝酸钾将胶体金颗粒的ph值调整至8.5,加入器皿中,再向其中加入终浓度10%的分离剂,再加入重组新型冠状病毒rbd蛋白至终浓度30μg/ml,搅拌40min,得到胶体金溶液;

(2)向步骤(1)得到的胶体金溶液中加入10%封闭液至终浓度到1%进行封闭15min;

所述封闭液为酪蛋白和/或bsa溶液;

(3)将步骤(2)得到的胶体金溶液使用4℃、12000rpm进行离心40min,离心后去上清,使用复溶液复溶沉淀,得到重组新型冠状病毒rbd蛋白标记液;

所述复溶液为吐温20和bsa两种的混合;

(4)将步骤(3)得到的重组新型冠状病毒rbd蛋白标记液使用喷金划膜仪按0.1μl/mm进行喷涂到胶体金垫上;

(5)将步骤(4)的胶体金垫在37℃烘箱中干燥240min,干燥后加干燥剂密封保存,即得到胶体金垫。

10.一种检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括权利要求1-7任一项所述的胶体金免疫层析试纸条。


技术总结
本发明公开了一种检测新冠疫苗注射后体内分泌中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法,试纸条包括PVC底板,所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸;所述胶体金垫上包被有胶体金标记的重组新型冠状病毒RBD蛋白;所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)检测线,以及包被有鼠抗鸡IgG抗体作为质控线。本发明胶体金免疫层析试纸条采用竞争法检测人体内中和抗体,具有较好的敏感性、特异性、重复性和稳定性,对目标化合物的回收率较高,检验结果准确可靠。实现了注射新冠疫苗后对人体内的中和抗体快速定性检测,且灵敏度高,批内、批间差异小,为临床使用提供了极大便利。

技术研发人员:陈真诚;申琳;张启韩;赵飞骏;肖皓霖;操良丽
受保护的技术使用者:桂林电子科技大学
技术研发日:2020.11.09
技术公布日:2021.03.12
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