夹心阻断ELISA试剂在制备口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用

文档序号:35675926发布日期:2023-10-08 06:10阅读:来源:国知局

技术特征:

1.夹心阻断elisa试剂在制备口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用,其特征在于:在已包被口蹄疫型特异抗体的elisa板上将被检血清和阴阳性对照血清进行系列稀释后紧接着加入酶标抗体,然后加入稀释至工作浓度的口蹄疫病毒抗原,设置至少4孔病毒抗原对照,经孵育洗涤后加入tmb底物,显色终止后od450nm波长读取吸光值;

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述夹心阻断elisa反应体系为200ul/孔;其中,被检血清或阴阳性对照血清为50ul/孔,酶标抗体为50ul/孔,口蹄疫灭活病毒抗原为100ul/孔。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:在所述夹心阻断elisa反应体系中,酶标抗体与已包被在elisa板内的多克隆抗体形成双抗夹心法结合反应体系中的抗原,被检血清及阴阳性对照血清中的口蹄疫抗体阻断反应体系中的抗原参与夹心法的进行,样品中的抗体水平与抗原阻断率成正比。

4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述口蹄疫病毒抗原为血清型特异的口蹄疫病毒抗原,是经口蹄疫病毒灭活得到或经口蹄疫灭活疫苗破乳后得到。

5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述口蹄疫病毒抗原包括o型fmdv抗原及a型fmdv抗原。

6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述酶标抗体,是1株及以上单克隆抗体标记hrp后混合使用,或是146s抗原免疫制备多克隆抗体标记hrp后使用。

7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:利用夹心阻断elisa试剂制备口蹄疫病毒抗体检测试剂盒的方法,包括以下步骤:


技术总结
本发明涉及夹心阻断ELISA试剂在制备口蹄疫病毒抗体检测试剂盒中的应用,属于生物技术领域,本发明将阴阳性血清及被检血清直接在已包被捕获抗体的ELISA板上稀释后紧接着加入酶标抗体,最后加入病毒抗原,同时设置病毒抗原对照,被检血清及阴阳性血清中口蹄疫型特异抗体阻断病毒抗原参与酶标单抗与ELISA板上的捕获抗体的双抗夹心ELISA反应的进行,判定参照液相阻断ELISA,以病毒抗原对照孔OD值平均值的50%作为病毒抗原被50%阻断的临界值,成功建立阻断夹心ELISA方法,也称为液相阻断ELISA一步法,可用于定性、定量检测口蹄疫抗体,为口蹄疫疫苗免疫抗体监测、疫苗免疫效果评估等方面提供新的技术支持。

技术研发人员:周广青,常惠芸,刘伟,龚真莉,祁淑芸,邵军军,吕律,郭慧琛,高闪电,何继军
受保护的技术使用者:中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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