一种猪苓配方颗粒质量检测方法与流程

本发明属于中药材质量控制，具体涉及一种猪苓配方颗粒质量检测方法。

背景技术：

1、现代药物需要具有稳定均一、安全和有效的三大特性，对于中成药而言，需要采用多种手段进行检测，保证检测结果的可靠性和稳定性。中药配方颗粒是采用现代科学技术，仿照传统中药汤剂煎煮的方式，将中药饮片经浸提、浓缩、干燥等工艺精制而成的单味中药产品。产品保持了中药饮片的性味与功效，质量稳定，应用于中医临诊处方的调配，适应辨证施治、处方变化的需要，且有不需煎煮，服用方便、吸收快捷、剂量准确、安全清洁、携带便利等优点。单味药材经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制得配方颗粒，与传统的药材相比，配方颗粒的形态特征发生明显改变，其产品真伪和质量无法用肉眼观察得到。因此，有必要建立中药配方颗粒质量评价体系，以此全面反映配方颗粒的内在品质。

2、多孔菌科真菌猪苓polyporusumbellatus(pers.)fries，性味平、甘、淡，有利小便，渗湿之功能；近年来发现猪苓有抗癌作用；用于急性肾炎，全身浮肿，水肿，小便不利，热淋，尿急，尿频，尿道痛，口渴，饮水则吐，受暑水泻，黄疸等病症。目前，关于猪苓的配方颗粒还未形成一个系统的质量检测方法，仅采用现有的检测手段来检测猪苓配方颗粒是不够全面的，不能反映出猪苓配方颗粒的整体内在质量，无法达到中药配方颗粒质量控制要求，因此，建立一种用于药材质量控制的猪苓配方颗粒质量检测方法十分必要。

技术实现思路

1、本发明的目的就是要解决现有技术的不足，提供一种全面反映配方颗粒的内在品质及更好的控制配方颗粒质量的猪苓配方颗粒质量检测方法。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、一种猪苓配方颗粒质量检测方法，包括如下检测方法：

4、对猪苓配方颗粒进行薄层鉴别、特征图谱构建和猪苓酸含量测定，将猪苓配方颗粒的猪苓酸含量标准限定为每1g含猪苓酸为0.12-1.25mg，其中，薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别，特征图谱构建和猪苓酸含量测定均采用液相色谱法测定，猪苓酸含量测定包括猪苓酮a和猪苓酮b的含量测定；

5、其中，液相色谱法测定特征图谱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以0.05％磷酸溶液为流动相b，按表a的规定进行梯度洗脱：

6、表a梯度洗脱程序

7、

8、

9、流速为每分钟1.0ml；柱温为25℃；检测波长为254nm；

10、所述液相色谱法测定特征图谱的步骤包括：

11、s11：制备对照药材参照物溶液a：取猪苓对照药材1.0g，加入80％甲醇20ml，加热回流20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液a；另取猪苓酮a对照品、猪苓酮b对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含猪苓酮a、猪苓酮b各20μg的溶液，作为对照品参照物溶液a；

12、s12：制备供试品溶液a：精密称量研细的猪苓配方颗粒0.3g，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇20ml，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

13、s13：分别精密吸取对照药材参照物溶液a、对照品参照物溶液a与供试品溶液a各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

14、进一步的，所述照薄层色谱法包括如下步骤：

15、s21：取猪苓配方颗粒样品1.0g，加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加体积比为3:1的乙酸乙酯-乙醇1ml，作为供试品溶液b；

16、s22：取麦芽糊精1.0g，加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加体积比为3:1的乙酸乙酯-乙醇1ml，作为阴性样品溶液b；

17、s23：取猪苓对照药材2.0g，加水60ml，煎煮并保持微沸30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加体积比为3:1的乙酸乙酯-乙醇1ml，作为对照药材溶液b；

18、s24：进行薄层色谱分析：薄层色谱条件为，薄层板：硅胶g薄层板；点样量：供试品溶液b20ul，阴性样品溶液b、对照药材溶液b各10ul；展开剂：体积比为3:1的石油醚-乙酸乙酯，所述石油醚沸点在60～90℃，在365nm紫外灯下检视。

19、进一步的，所述液相色谱法测定猪苓酸含量包括：进行液相色谱仪分析，以猪苓酮a对照品、猪苓酮b对照品制成的溶液作为对照品溶液c，以猪苓配方颗粒样品制成的溶液作为供试品溶液c，分别精密吸取对照品溶液c和供试品溶液c，分别注入液相色谱仪，测定，即得；其中，液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以0.05％磷酸溶液为流动相b，按表a的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为25℃；检测波长为254nm。

20、进一步的，所述液相色谱法测定猪苓酸含量还包括如下步骤：

21、s31：对照品溶液c的制备：取猪苓酮a对照品、猪苓酮b对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml各含20μg的溶液；

22、s32：供试品溶液c的制备：取0.3g猪苓配方颗粒，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

23、s33：分别精密吸取对照品溶液c与供试品溶液c各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

24、进一步的，所述液相色谱测定的供试品色谱图中呈现5个特征峰，并与对照药材参照物色谱中的5个特征峰保留时间相对应；其中与猪苓酮a对照品参照物相对应的峰为峰3，以猪苓酮a对照品参照物峰为s峰，计算其余各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内；规定值为：峰1相对保留时间0.53、峰2相对保留时间0.90、峰4相对保留时间1.34、峰5相对保留时间1.61。

25、进一步的，还包括如下检测方法：对猪苓配方颗粒进行性状鉴别、颗粒剂通则项检查、浸出物检查，其中，浸出物采用热浸法测定。

26、进一步的，所述热浸法以乙醇为溶剂，采用醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定浸出物范围。

27、进一步的，所述颗粒剂通则项检查包括水分、粒度、溶化性、微生物限度、装量差异检查。进一步的，所述猪苓配方颗粒的制法：取猪苓饮片25000g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏(干浸膏出膏率为2.0％～3.8％)，加入辅料适量，干燥(或干燥，粉碎)，再加入辅料适量，混匀，制粒，制成1000g，即得。

28、本发明的有益效果是，对猪苓配方颗粒进行性状、薄层鉴别、特征图谱、颗粒剂通则项检查、浸出物、猪苓酸含量测定，其中薄层鉴别采用照薄层色谱法进行鉴别；颗粒剂通则项检查包括水分、粒度、溶化性、微生物限度、装量差异检查；浸出物采用热浸法测定；特征图谱和猪苓酸含量测定均采用液相色谱法测定；本发明的猪苓配方颗粒质量检测方法，通过多个方面的指标来检测猪苓配方颗粒的质量，能够建立可行的猪苓配方颗粒的质量标准，实现猪苓配方颗粒质量的有效控制，为猪苓配方颗粒质量的稳定奠定了坚实的基础，并且，采用本技术的色谱条件进行液相分析，可以得到分离度更好更清晰的特征图谱，方法稳定性较好，精密度高，重现性较好。

29、本品每1g含猪苓酮a(c28h46o6)和猪苓酮b(c28h44o6)总量应为0.12mg～1.25mg。