含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药残留检测的动物源性食品基体标准物质技术领域，更具体涉及一 种含金刚焼胺和利己韦林的鸡肉基体标准物质及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 金刚焼胺（amantadine)又称金刚胺、S环癸胺，CAS号=768-94-5,分子量； 151.2487。利己韦林（Ribavirin)化学名称为；1-B-D-巧喃核糖基-1H-1，2,4-H氮 哇-3-駿醜胺，又名H氮哇核巧、病毒哇。
[0003] 金刚焼胺和利己韦林均为人用主要抗病毒类药物，目前还没有专口针对抗动物病 毒的药物，市场上大部分药物都是人用抗病毒药物移植兽用，鉴于人用抗病毒药物移植兽 用存在抗药性W及残留等问题，许多国家都禁止使用抗病毒类药物用来预防和治疗鸡、猪 流感等病毒性疾病。2006年美国FDA发布新规，禁止金刚焼胺抗流感病毒药品用于禽类；力口 拿大等国也因为金刚焼胺的抗药性等问题，建议不将其用于禽类流感的预防和治疗；日本 也加强了对此类药物的监控；中华人民共和国农业部公告第560号中明确规定抗病毒药物 为禁用兽药，其中包括；金刚焼胺，利己韦林等。但是，近年来，抗病毒药已扩大应用于其他 领域，如畜禽、商业养殖、水产业等，养殖企业为了防治病毒感染和经济效益，在动物养殖过 程中违禁使用抗病毒药物时有发生，对消费者健康和对外贸易均产生很大危害。根据央视 报道，40天"速成鸡"的饲养过程中，滥用药物的情况令人触目梅也！其中就有使用金刚焼 胺、利己韦林等的报道。基于抗病毒类药物目前在我国水产和畜禽养殖中的滥用状况，对动 物源性食品中抗病毒类药物残留进行质量控制非常有必要，除了开展对此类药物进行残留 监控与代谢研究，有效的检测抗病毒药物残留方法是监督控制抗病毒类药物滥用的关键。
[0004] 在兽药残留分析中，分析基体多样性和本身的差别使得在分析过程中不能简单地 采用传统的纯品标准物质来校准或进行质量控制，需要采用基体标准物质两类标准物质W 满足要求，包括证明检测工作与所要求的标准操作程序相符或参加能力验证中、校准仪器、 用于质量控制、解决分析中遇到的问题W及保证结果的准确。欧洲委员会对标准物质有明 确定义，欧盟有关农、兽药残留检测的法规性文件均提到了要采用标准物质作为质量控制 手段，对检测方法进行验证；因此标准物质对于兽药残留分析是十分重要的。另外，现有的 残留分析质量控制手段多采用基质加标的形式，该种形式存在基质差异大、目标化合物结 合状态不一样等缺陷，据现有的研究表明，利己韦林在动物和人体肝脏内主要W原药、单磯 酸醋、二磯酸醋和H磯酸醋等形式存在，该就使得对该类化合物的分析质量控制难度加大。 因此，本专利采用喂食原药而使肉鸡自然污染的方式制备一批含金刚焼胺和利己韦林的鸡 肉基体标准物质，该标准物质的目标物结合状态与实际检测样完全一致。
[0005] 发明目的 本发明的目的是提供一种含金刚焼胺和利己韦林的鸡肉基体标准物质及其制备方法。 该基体标准物质含合适浓度的金刚焼胺和利己韦林的鸡肉自然污染基体（目标物结合状态 与实际检样完全一致）的实物标样，可作为实物标样在日常检测工作中用于建立分析方法、 确定实验准确度与精密度及在检测质量控制，使用方便、浓度适中、品质好。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种含金刚焼胺和利己韦林的鸡肉基体标准物质：金刚焼胺和利己韦林的浓度均为 7 ?13 y g/kg。
[0007] -种制备如权利要求1所述的含金刚焼胺和利己韦林的鸡肉基体标准物质的方 法，包括W下步骤： 1) 采用含金刚焼胺和利己韦林的水对肉鸡进行口服喂养，当肉鸡肌肉中金刚焼胺和利 己韦林经代谢后浓度变为7?13 y g/kg时，停止喂药； 2) 将步骤1)喂养合格的活鸡进行宰杀，取鸡前胸肉，捣碎组织、匀浆后过四分筛； 3) 真空包装、封口、贴标签； 4 )福照灭菌，制得成品，0-4 C冰箱中储存。
[0008] 所述的步骤1)中具体的喂养方法为：选取体重0. 95?1. 05 kg的肉鸡200只，每 次给药剂量为利己韦林6g/100 kg水，金刚焼胺3g/100 kg水，每日给药1次，连续给药4 日，停药后第3天取样。
[0009] 所述的步骤2)中匀浆具体为：将捣碎的鸡肉置于匀浆机中，30(K)rpm转速揽成酱 样并匀浆5min 4kg/次的鸡肉量揽拌3次，混合后再揽拌3次；再采用拍击式均质器进 行二次混匀；将样品装入拍击袋，置于拍击式均质器中，按180拍/min的频率，每次拍击5 min后取出，再进行更换拍击，如此反复拍击3次。
[0010] 所述步骤3)中，先装入内袋中，再套上外袋；所述内袋为聚己帰袋，外包装袋为食 品级铅铅包装袋，规格为宽9畑1，长13畑1，厚度双面20丝，每袋重量为25 g。
[0011] 所述步骤4)中福照灭菌；60C〇- Y福照，剂量为9KGy。
[0012] 本发明的显著优点： 1) 本发明制备了含合适浓度的金刚焼胺和利己韦林的鸡肉自然污染基体（目标物结合 状态与实际检样完全一致)，可作为实物标样在日常检测工作中用于建立分析方法、确定实 验准确度与精密度及在检测质量控制，使用方便、浓度适中、品质好； 2) 制备方法科学合理，可操作性强。
【附图说明】
[0013] 图1是本发明的制备流程图。
【具体实施方式】
[0014] 本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实 施例。
[001引 实施例1 一种含金刚焼胺和利己韦林的鸡肉基体标准物质的制备方法： (1)采用金刚焼胺和利己韦林多剂量口服给药，选取体重约1公斤的白羽肉鸡200只， 每次给药剂量为利己韦林6g/100kg水，金刚焼胺3g/100kg水，每日给药1次，连续给药4 日，停药后第3天取样，使金刚焼胺和利己韦林药物在肉鸡体内代谢，对其代谢曲线进行测 定，获得肌肉中金刚焼胺和利己韦林浓度在7?13 y g/kg的活鸡，将肉鸡宰杀、去毛、去皮 骨，取前胸肉，得含有金刚焼胺和利己韦林的鸡肉； (2) 取步骤（1)按规定饲养时间完成后的肉鸡，宰杀、去毛、去皮骨，取前胸肉；捣碎匀 浆，将鸡肉置于匀浆机中，300化pm转速揽成酱样并匀浆5min，W 4kg/次的鸡肉量揽拌3 次，混合后再揽拌3次； (3) 再采用拍击式均质器将步骤（2)进行二次混匀；将步骤（2)的样品装入拍击袋，置 于拍击式均质器中，按180拍/min的频率，每次拍击5 min后取出，再进行更换拍击，如此 反复拍击3次； (4) 将步骤（3)中制得的样装入内袋中，再套上外袋；用真空封口机，对装好样品的外 袋热封口； (5) 贴上对应的标识；福照灭菌；将包装好的样品福照灭菌，采用60CO-Y福照，福照剂 量为9KGy ; (6) 所述步骤（4)中包装袋内袋为聚己帰袋，外包装袋为食品级铅铅包装袋，规格为宽 9畑1，长13畑1，厚度双面20丝，每袋重量为25 g ; (7) 所述步骤（5)灭菌后样品置于0-4C冰箱中储存。
[0016] 鸡肉中金刚焼胺与利己韦林残留检测 由于目前对金刚焼胺和利己韦林的残留检测方法尚未有正式发布的国家或相关行业 标准，因此，本实验室对此类药物的检测参照W下文献方法[1-3]，并对此方法进行实验室 细化和相关技术验证，结果见表1，该方法在1. 0,2. 0,10. 0 y g/kg的3个添加水平内室内平 均回收率在88. 5%~92. 22%，精密度RSD均为12% W内（n=6)，符合SN/T0001-1995《出口商 品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》的相关要求。金刚焼胺的 保留时间为5. 31min左右，利己韦林的保留时间为2. 12min左右。具体检测方法见下面所 附检测方法。说明该检测方法稳定、可靠。
[0017] [1]刘正才，杨方，余孔捷，林永辉，刘素珍，张琼，苏芝娇，液相色谱-电喷 雾串联质谱法同时检测鸡组织中5种抗病毒类药物的残留量[J]，色谱，2012，30(12): 1253-1259. 巧]DB 32/T 1165-2007,《鸡肝中利己韦林及其代谢物残留总量的测定液相色谱--串 联质谱法》.江苏省地方标准.
[3]Li-Tain Yeh, Mai Nguyen, and Chin-Chung Lin, A Sensitive and Specific Method for the Determination of Total Ribavirin in Human Red Blood Cells by Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry[J]，Journal of Chromatographic Science, 2003, 41, 256-260。
[0018] 表1鸡肉基质中金刚焼胺与利己韦林的添加回收率和精密度数据（n=6)
【主权项】
1. 一种含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质，其特征在于：所述的鸡肉基体标 准物质中，金刚烷胺和利巴韦林的浓度均为7?13 y g/kg。
2. -种制备权利要求1所述的含金刚烧胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质的方法，其 特征在于：包括以下步骤： 1) 采用含金刚烷胺和利巴韦林的水对肉鸡进行口服喂养，当肉鸡肌肉中金刚烷胺和利 巴韦林经代谢后浓度变为7?13 y g/kg时，停止喂药； 2) 将步骤1)喂养合格的活鸡进行宰杀，取鸡前胸肉，捣碎组织、匀浆后过四分筛； 3) 真空包装、封口、贴标签； 4) 辐照灭菌，制得成品，0_4°C冰箱中储存。
3. 根据权利要求2所述的含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质的制备方法，其 特征在于：所述的步骤1)中具体使用的肉鸡品种为白羽肉鸡；具体的喂养方法为：选取体 重0. 95~1.05 kg的肉鸡200只，每次给药剂量为利巴韦林6g/100 kg水，金刚烷胺3g/100 kg水，每日给药1次，连续给药4日，停药后第3天取样。
4. 根据权利要求2所述的含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质的制备方法，其 特征在于：所述的步骤2)中匀浆具体为：将捣碎的鸡肉置于匀浆机中，3000rpm转速搅成 酱样并匀浆5min ;以4kg/次的鸡肉量搅拌3次，混合后再搅拌3次；再采用拍击式均质器 进行二次混匀：将样品装入拍击袋，置于拍击式均质器中，按180拍/min的频率，每次拍击 5 min后取出，再进行更换拍击，如此反复拍击3次。
5. 根据权利要求2所述的含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质的制备方法，其 特征在于：所述步骤3)中，先装入内袋中，再套上外袋；所述内袋为聚乙烯袋，外包装袋为 食品级铝箔包装袋，规格为宽9cm，长13cm，厚度双面20丝，每袋重量为25 g。
6. 根据权利要求2所述的含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质的制备方法，其 特征在于：所述步骤4)中辐照灭菌：60C〇-y辐照，剂量为9KGy。
【专利摘要】本发明公开了一种含金刚烷胺和利巴韦林的鸡肉基体标准物质及其制备方法。通过对活白羽肉鸡喂养含金刚烷胺和利巴韦林的水，使得金刚烷胺和利巴韦林在活鸡体内代谢至合适浓度后，将活鸡宰杀，取前胸肉，经匀浆、灭菌后制得基体标准物质。该物质属于自然污染标准样品，此标样可用于相关检测分析的质量控制，样品均匀、稳定，运输方便，使用可靠。
【IPC分类】G01N30-02, G01N1-28, G01N30-06
【公开号】CN104596824
【申请号】CN201510080515
【发明人】刘正才, 杨方, 吕小玲
【申请人】福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年2月14日