与实施例12的检测试剂盒基本相同，不同之处在于：该试剂 盒的组分中没有酸性处理剂和免疫干扰物结合剂。
[0176] -种HIV检测的方法，与实施例12中的检测方法基本相同，不同之处在于：采用本 对比例的检测试剂盒进行检测，并且没有1)预处理步骤，以及在加样反应中没有加入免疫 干扰物结合剂步骤。
[0177] 对比例3
[0178] -种HIV检测试剂盒，与实施例1的检测试剂盒基本相同，不同之处在于：该试剂 盒的组分中没有酸性处理剂。
[0179] -种HIV检测的方法，与实施例1中的检测方法基本相同，不同之处在于：采用本 对比例的检测试剂盒进行检测，并且没有1)预处理步骤。
[0180] 对比例4
[0181] -种HIV检测试剂盒，与实施例12的检测试剂盒基本相同，不同之处在于：该试剂 盒的组分中没有酸性处理剂。
[0182] -种HIV检测的方法，与实施例12中的检测方法基本相同，不同之处在于：采用本 对比例的检测试剂盒进行检测，并且没有1)预处理步骤。
[0183] 对比例5
[0184] -种HIV检测试剂盒，与实施例10的检测试剂盒基本相同，不同之处在于：
[0185] 1)酸性处理剂：浓度为0.0 lmol/L的乙酸溶液，该酸性处理剂的pH值为2. 5。
[0186] -种HIV检测的方法，与实施例10中的检测方法基本相同，不同之处在于：采用本 实施例的检测试剂盒进行检测。
[0187] 实验例
[0188] 采用上述实施例、对比例中的检测试剂盒和检测方法在化学发光分析仪（制造 商：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，仪器型号：Maglumi 2000)上进行测定实 验，测试样本包括：采购自中国药品生物制品检定所的HIV抗体和HIV p24抗原的国家参考 品。结果如下：
[0189] 表1灵敏度检测结果
[0190]
【主权项】
1. 一种用于HIV检测的酸性处理剂，其特征在于，主要由浓度为0. 1-1.Omol/L的有机 酸溶液和浓度为0. 01-0.lmol/L的无机酸溶液混合而成，或为浓度为0. 1-1. 2mol/L的有机 酸溶液，该酸性处理剂的pH值为2. 5-4. 5。
2. 根据权利要求1所述的用于HIV检测的酸性处理剂，其特征在于，所述有机酸和一元 无机酸的摩尔比为1-20:1 ;或所述有机酸和二元无机酸的摩尔比为0. 5-10:1 ;或所述有机 酸和三元无机酸的摩尔比为0. 3-6. 6:1。
3. 根据权利要求1所述的用于HIV检测的酸性处理剂，其特征在于，所述有机酸和一元 无机酸的摩尔比为7-13:1 ;或所述有机酸和二元无机酸的摩尔比为3. 5-6. 5:1 ;或所述有 机酸和三元无机酸的摩尔比为2. 3-4. 3:1。
4. 根据权利要求1所述的用于HIV检测的酸性处理剂，其特征在于，所述有机酸为乙 酸、苯甲酸、乙二酸、丁二酸、苹果酸、柠檬酸、水杨酸中的至少一种。
5. 根据权利要求1所述的用于HIV检测的酸性处理剂，其特征在于，所述无机酸为硫 酸、盐酸、硝酸、氢氟酸、亚硫酸、亚硝酸中的至少一种。
6. -种HIV待测样本的预处理方法，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述的酸性 处理剂，将待测样本与所述酸性处理剂按照〇. 5-5:1的体积比混合，得到待测溶液。
7. 根据权利要求6所述的HIV待测样本的预处理方法，其特征在于，将待测样本与所述 酸性处理剂混合后，还将待测溶液在20-60°C下温育1-30分钟。
8. -种HIV检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分： 1) 酸性处理剂：权利要求1-5任一项所述的酸性处理剂； 2) 磁性微球体系：包括直接连接或间接连接HIV重组抗原1的磁性微球，和/或直接 连接或间接连接抗HIV抗体A的磁性微球； 3) 标记物体系：包括相应的直接连接或间接连接标记示踪物的HIV重组抗原2,和/或 直接连接或间接连接标记示踪物的抗HIV抗体B; 所述HIV重组抗原1和HIV重组抗原2与待测抗体结合的位点互不相同，所述抗HIV抗体A和抗HIV抗体B与待测抗原结合的位点互不相同。
9. 根据权利要求8所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，还包括以下组份： 4) 免疫干扰物结合剂：包括结合剂和辅助成分；所述结合剂为新生牛血清、羊血清、马 血清、牛血清白蛋白、羊抗人IgG/IgM、兔抗人IgG/IgM、鼠抗人IgG/IgM中的至少一种；所述 辅助成分为甘油、乙二醇、聚乙二醇、蔗糖、氯化钠、乙二胺四乙酸盐中的至少一种。
10. 根据权利要求9所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，所述结合剂的浓度为 0?l-20g/L，所述辅助成分的浓度为0? 2-10g/L。
11. 根据权利要求8所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，所述HIV重组抗原为HIV1+2 型重组抗原，所述抗HIV抗体为抗HIVp24抗体。
12. 根据权利要求8所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，所述标记示踪物为发光标记 物，选自：金刚烷，鲁米诺及其衍生物，异鲁米诺及其衍生物，叮啶酯； 或所述标记示踪物为化学发光催化剂，选自：碱性磷酸酶，过氧化物酶。
13. 根据权利要求8所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，所述2)磁性微球体系中，所 述间接连接HIV重组抗原1的磁性微球由包被抗异硫氰酸荧光素抗体的磁性微球，和标记 异硫氰酸荧光素的HIV重组抗原1组成；或所述间接连接HIV重组抗原1的磁性微球由包 被链霉亲和素的磁性微球，和标记生物素的HIV重组抗原1组成；或所述间接连接HIV重组 抗原1的磁性微球由包被抗标签蛋白抗体的磁性微球，和具有标签蛋白的HIV重组抗原1 组成； 所述间接连接抗HIV抗体A的磁性微球由包被抗异硫氰酸荧光素抗体的磁性微球，和 标记异硫氰酸荧光素的抗HIV抗体A组成；或所述间接连接抗HIV抗体A的磁性微球由包 被链霉亲和素的磁性微球，和标记生物素的抗HIV抗体A组成；或所述间接连接抗HIV抗体 A的磁性微球由包被抗标签蛋白抗体的磁性微球，和具有标签蛋白的抗HIV抗体A组成。
14. 根据权利要求8所述的HIV检测试剂盒，其特征在于，所述3)标记物体系中，所述 间接连接标记示踪物的HIV重组抗原2由标记生物素的HIV重组抗原2,和标记链霉亲和素 的标记示踪物组成；或所述间接连接标记示踪物的HIV重组抗原2由标记异硫氰酸荧光素 的HIV重组抗原2,和标记抗异硫氰酸荧光素抗体的标记示踪物组成；或所述间接连接标记 示踪物的HIV重组抗原2由具有标签蛋白的HIV重组抗原2,和标记抗标签蛋白抗体的标记 示踪物组成； 所述间接连接标记示踪物的抗HIV抗体B由标记生物素的抗HIV抗体B，和标记链霉亲 和素的标记示踪物组成；或所述间接连接标记示踪物的抗HIV抗体B由标记异硫氰酸荧光 素的抗HIV抗体B，和标记抗异硫氰酸荧光素抗体的标记示踪物组成；或所述间接连接标记 示踪物的抗HIV抗体B由具有标签蛋白的抗HIV抗体B，和标记抗标签蛋白抗体的标记示踪 物组成。
15. -种HIV检测方法，其特征在于，采用权利要求8-14任一项所述的检测试剂盒，包 括以下步骤： 1) 预处理：按照权利要求6-7任一项所述的预处理方法进行样本预处理； 2) 反应：在上述待测溶液中加入磁性微球体系和标记物体系，形成发光免疫复合物； 3) 检测：外加磁场将上述发光免疫复合物沉淀，去除上清液，清洗后，加入发光底物， 检测发出的相对光强度，计算得到待测抗体和/或待测抗原的含量。
16. 根据权利要求15所述的HIV检测方法，其特征在于，所述步骤2)反应中，还加入权 利要求9-10任一项所述的免疫干扰物结合剂。
17. 权利要求8-14任一项所述的HIV检测试剂盒在化学发光分析仪上的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种用于HIV检测的酸性处理剂、样本预处理方法、试剂盒及检测方法，属于体外诊断检测技术领域。该酸性处理剂主要由浓度为0.1-1.0mol/L的有机酸溶液和浓度为0.01-0.1mol/L的无机酸溶液混合而成，或为浓度为0.1-1.2mol/L的有机酸溶液，该酸性处理剂的pH值为2.5-4.5。采用上述的酸性处理剂，可以很好的分离样本中的p24抗原和p24抗体。采用上述酸性处理剂的HIV检测试剂盒及样本预处理方法和检测方法，具有灵敏度高的优点。
【IPC分类】G01N1-28, G01N33-571
【公开号】CN104697830
【申请号】CN201510069549
【发明人】饶微, 袁锦云, 方中刚, 刘晓森, 罗凯, 李婷华
【申请人】深圳市新产业生物医学工程股份有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年2月10日