地结合的抗 体或污染物质等而使用Tween20之类的清洗用缓冲液或蒸馈水之类的清洗剂加W清洗。
[0035] 在上述内容中，标记可W是生物素化iotin)之类的化学物质、异硫氯酸巧光素、 四甲若丹明异硫氯酸盐之类的巧光物质、舰1251，1231，1211)、磯（32巧、硫（35巧之类 的福射能物质等，上述酶可W是过氧化物酶（POD)、碱性磯酸酶、0-半乳糖巧酶、辣根过 氧化物酶、脈酶、过氧化氨酶、葡萄糖氧化酶，乳酸脱氨酶、淀粉酶、巧光素酶等促进发色 反应、巧光反应、发光反应之类的反应的酶。更具体的内容请参阅文献圧dHarlowand DavidLane,UsingAntibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory Press, 1999]等，该文献也被视为本说明书的一部分。
[0036] 优选地，上述标记或酶可W和抗体进行共价结合。
[0037] 在上述内容中，检测抗体可W举例为识别抗体（捕获抗体）的化部分者，该检 测抗体可W把化部分对鸟类、哺乳动物之类的动物予W免疫化后从该动物的血液加W分 离?提炼后得到。
[003引在上述内容中，信号的测量方法可W使用本领域的公知方法得到，例如，标 记使用生物素时可W利用结合到信号的抗生物素蛋白（avidin)或抗生蛋白链菌素 (streptavidin)测量信号，使用酶时则可W添加该酶的底物后测量信号。例如，酶使用巧光 素酶时则使用虫巧光素。
[0039] 优选地，在上述内容中，在上述（a-ii)步骤诱导了肾癌血液生物标志物与捕获抗 体的结合后，及/或化-1)处理了检测抗体后，还包括下列步骤，为了清除非特异地结合的 抗体等物或者清除污染物质等物而如前所述地使用Tween20之类的清洗缓冲液或蒸馈水 等清洗剂清洗的步骤。
[0040] 在较佳实施形态中，本发明的方法可W由化ISA法进行。由化ISA法进行时，上述 (a)步骤的形成肾癌血液生物标志物和特异于它的结合分子的结合体的步骤包括下列步 骤；步骤（a-i)，把血液试剂或其加工试剂固定到支撑体的表面；及步骤（a-ii)，作为一抗 把针对肾癌血液生物标志物的抗体进行处理。上述步骤化）的结合体检测步骤则包括下列 步骤；步骤化-i)，在上述一抗处理后，对结合了酶的二抗进行处理；及步骤化-ii)，测量上 述酶的活性。
[0041] 对于在上述支撑体上固定（例如涂敷）试剂的方法，前面所说明的内容依然有效。
[0042] 在上述内容中，酶如前所述地可W使用促进发色反应、巧光反应、发光反应等的 酶。
[0043] 在上述内容中，如同针对上述检测抗体所进行的说明一样地，二抗可W把一抗作 为抗原使用而在哺乳动物等予W免疫化并且从该动物的血液分离?提炼后得到。
[0044] 在上述内容中，测量酶活性的步骤可W通过添加该酶的底物并测量其反应程度而 得W实现。
[0045] 在本发明的方法的其它实施形态中，特异于上述肾癌血液生物标志物的结 合分子可W不使用抗体而使用和本发明的肾癌血液生物标志物特异地结合的适体 (aptamer)。适体是寡核巧酸（oligonucleotide)或肤（P巧tide)分子，适体的一般内容 可W参阅文献liBock LC et 31.,化1:脚6355(6360):5646(1992)]、文献出0卵e-Se}der F,ButzK"Peptideaptamers:powerfulnewtoolsformolecularmedicine".JMolMed. 78(8):42630(2000)]、文献[CohenBA，ColasP，BrentR/'Anartificial cell-cycleinhibitorisolatedfromacombinatoriallibrary".ProcNatlAcadSci USA. 95 (24) : 142727 (1998)]等。
[0046] 另一方面，本发明还设及一种肾癌血液生物标志物的检测试剂盒。
[0047] 本发明的试剂盒的特征在于，（a)包括特异于肾癌血液生物标志物NNMT的结合分 子、特异于肾癌血液生物标志物LCP1的结合分子及特异于肾癌血液生物标志物NM23A的结 合分子，化）包括说明书，该说明书教导了把利用该些肾癌血液生物标志物检测到的NNMT、 LCP1及醒23A的血中浓度应用于肾癌诊断的方法。
[0048] 上述本发明的试剂盒中特异于肾癌血液生物标志物的分子是抗体或适体，其中W 抗体较佳。
[0049] 在上述本发明的试剂盒中，作为上述特异于肾癌血液生物标志物的分子，抗体能 够W固定到支撑体的形态或者和支撑体分离的形态被包含在本发明的试剂盒。抗体W和支 撑体分离的形态被包含时，本发明的试剂盒可W进一步包含支撑体。在此，支撑体可W是微 球体、粒子、基板等，W微球体较佳，如果是微球体中的树脂颗粒则更佳。
[0050] 在上述本发明的试剂盒中，能W下列形态另行包含二抗或检测抗体，该二抗或检 测抗体和让信号的测量变成可能的标记或酶呈结合的形态、或者和该标记或酶呈分离的形 态，W分离的形态被包含时本发明的试剂盒能够进一步包含标记或酶。
[0化1] 在上述本发明的试剂盒中，还能包括其它清洗缓冲液、试剂或抗体稀释液、酶底 物、终止液等。
[0化2] 上述说明书所教导的方法，亦即把利用肾癌血液生物标志物检测到的NNMT、LCP1 及醒23A的血中浓度应用于肾癌诊断的方法具有各种方法，例如，把NNMT的浓度值、LCP1的 浓度值及醒23A的浓度值直接和逻辑回归运算出来的值的截止值（cut-offvalue)进行比 较，如果是截止值W上的值则将受检人区分为肾癌患者，如果是截止值W下的值则区分为 正常人；或者，也可W对利用诸如下列实施例的计分法（scoringmethod)得到的结果值和 截止值进行比较，如果是截止值W上的值则将受检人区分为肾癌患者，如果是截止值W下 的值则区分为正常人。在此，截止值是一种能够把受检人区分成患者或正常人的值，可W根 据特异度、灵敏度之类的诊断尺度设定成任何值。例如，可W设定成通过R0C曲线分析呈现 出95%的特异度的值，或者设定成R0C曲线上AUC成为最大时的值（亦即，在R0C曲线上的 一个位置画出水平及垂直的虚拟直线时，该虚拟直线所围起来的面积成为最大面积的该位 置上的值）等。
[0化3] 另一方面，本发明设及一种肾癌血液生物标志物LCP1的检测方法，本发明的检测 方法包括下列步骤；步骤（a)，让取自受检人的血液试剂或其加工试剂与特异于肾癌血液 生物标志物LCP1的结合分子进行反应，从而形成存在于上述试剂的肾癌血液生物标志物 LCP1和特异于它的结合分子的结合体；及步骤化），检测上述结合体。
[0化4] 另一方面，本发明设及一种肾癌血液生物标志物醒23A的检测方法，发明的检测 方法包括下列步骤；步骤（a)，让取自受检人的血液试剂或其加工试剂与特异于肾癌血液 生物标志物NM23A的结合分子进行反应，从而形成存在于上述试剂的肾癌血液生物标志物 NM23A和特异于它的结合分子的结合体；及步骤化），检测上述结合体。
[0化5] 上述肾癌血液生物标志物LCPl及醒23A虽然在组织试剂中被认为肾癌生物标志 物（韩国公开专利第10-2009-0014979号），但是在血液却没有被认为生物标志物。
[0化6] 对于上述肾癌血液生物标志物LCP1或醒23A的检测方法的具体内容，可W直接适 用前述内容。
[0057]有益效果
[005引本发明可W具有下列优点。
[0化9] 本发明提供一种肾癌血液生物标志物的检测方法与检测试剂盒。
[0060] 本发明的肾癌血液生物标志物的检测方法与检测试剂盒可W实现血液中的肾癌 血液生物标志物NNMT、LCP1及醒23A的定量，从而能够提供让医师之类的医疗专家用来判 断肾癌罹患与否、肾癌发展程度及/或肾癌治疗经过的有用信息。