尤其是，本发明的检测方 法及检测试剂盒能够有效地适用于肾癌的早期诊断、肾细胞癌类型中占大多数的透明细胞 型肾细胞癌的诊断。
【附图说明】
[0061] 图1示出了肾癌血液生物标志物NNMT、LCP1及醒23A的血中浓度的平均值在正常 人群与肾癌群的比较结果。
[0062] 图2示出了肾癌血液生物标志物NNMT、LCP1及NM23A各自的ROC曲线与该些标志 物组合（适用了逐步逻辑回归分析法（stepwiselogisticregressionanalysis)的标志 物组合与适用了计分法的标志物组合）的ROC曲线。
【具体实施方式】
[0063] 下面结合实施例说明本发明。但，本发明的范围并不局限于该实施例及实验例。
[0064]〈实施例〉针对紀合梳虎物的腎痛诊断能力的分析
[0065] <1>实验立法
[006引 <1-1〉血液试剂的取得及化理
[0067] 所有的血液试剂取样均在书面同意下根据延世大学医科大学的临床试验审查委 员会（IRB)所批准的程序进行。肾癌患者的试剂从通过影像学诊断方法与细胞病理学方法 被诊断为患者的129人中得到。肾癌患者群的平均年龄为55. 9岁，根据肾癌类型区分时， 透明细胞型肾细胞癌（clearrenalcellcarcinoma,clearRCC)患者为89人、乳头状肾 细胞癌（papillaryRCC)患者为6人、嫌色性肾细胞癌（C虹omo地obeRCC)患者为7人、肾 孟移行细胞癌化i化巧transitionalcellcarcinoma,TCC)患者为8人、尤文肉瘤（Ewing sarcoma)患者为1人、未分类肾细胞癌（unclassifiedRCC)患者为3人。其余者则是被判 定为肾嗜酸细胞癌（ranaloncocytoma)所导致的良性肿瘤或肾癌阴性患者为6人、良性肿 瘤化enign)患者为9人。根据肾癌发展阶段区分肾癌患者129人时，患者59人为la^b 期、患者13人为II期、患者29人为IIIa/IIIb期、患者2人为IV期、其余患者则没有归类。
[0068] 正常人试剂则从到延世大学医科大学诊断学科受诊的120人中取得，此时正常人 群的平均年龄为25岁。血浆试剂则收集了 15个月，取自肾癌患者100人与正常人90人的 初期试剂用于分析标志物的诊断能力的预备实验（traininggroupsampleS化dy)，后期 取得的患者28人与正常人30人的试剂则用来进行测试实验，该测试实验针对通过预备实 验得到的标志物的诊断能力进行有效性检查。
[0069] 下列[表1]整理了试剂的整体内容。
[0070]表1
[0071]
【主权项】
1. 一种肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，其包括下列步骤： 步骤（a)，让取自受检人的血液试剂或其加工试剂与特异于各个肾癌血液生物标志物NNMT、LCP1及匪23A的结合分子反应，让存在于上述试剂的肾癌血液生物标志物NNMT、LCP1 及NM23A各自和特异于它的结合分子形成结合体；及 步骤（b)，检测上述结合体。
2. 根据权利要求1所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，上述血液加 工试剂是血浆或血清。
3. 根据权利要求1所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，特异于上述 肾癌血液生物标志物的结合分子是抗体。
4. 根据权利要求1所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，上述步骤（a) 的形成肾癌血液生物标志物和特异于它的结合分子的结合体的步骤包括下列步骤： 步骤（a-i)，把作为捕获抗体（capturingantibody)而特异于肾癌血液生物标志物的 抗体固定到支撑体的表面；及 步骤（a-ii)，在固定了上述捕获抗体的支撑体上处理血液试剂或其加工试剂而诱导形 成上述捕获抗体与肾癌血液生物标志物的结合体； 上述步骤（b)的结合体检测步骤包括下列步骤： 步骤（b-i)，在上述试剂处理后，针对结合了标记或酶的检测抗体（detection antibody)进行处理，该标记或酶则为信号的测量作业给予中介或者使信号的测量变成可 能；及 步骤（b-ii)，对上述标记或酶所中介或提供的信号进行测量。
5. 根据权利要求4所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，上述支撑体 为微球体（microsphere)，该微球体为树脂颗粒。
6. 根据权利要求4所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，中介或者使 信号的测量变成可能的上述标记为生物素。
7. 根据权利要求1所述的肾癌血液生物标志物的检测方法，其特征在于，上述步骤（a) 的形成肾癌血液生物标志物和特异于它的结合分子的结合体的步骤包括下列步骤： 步骤（a-i)，把血液试剂或其加工试剂结合到支撑体的表面；及步骤（a-ii)，作为一抗 把针对肾癌血液生物标志物的抗体进行处理； 上述步骤（b)的的结合体的检测步骤则包括下列步骤： 步骤（b-i)，在上述一抗处理后，对结合了酶的二抗进行处理；及 步骤（b-ii)，测量上述酶的活性。
8. -种肾癌血液生物标志物检测试剂盒，其特征在于， (a) 包括特异于肾癌血液生物标志物NNMT的结合分子、特异于肾癌血液生物标志物 LCP1的结合分子及特异于肾癌血液生物标志物NM23A的结合分子； (b) 包括说明书，该说明书教导了把利用这些肾癌血液生物标志物检测到的NNMT、 LCP1及匪23A的血中浓度应用于肾癌诊断的方法。
9. 根据权利要求8所述的肾癌血液生物标志物检测试剂盒，其特征在于，特异于上述 肾癌血液生物标志物的结合分子为抗体。
10. 根据权利要求8所述的肾癌血液生物标志物检测试剂盒，其特征在于，上述试剂盒 还包括支撑体，该支撑体固定了抗体或者没有固定抗体。
11. 根据权利要求8所述的肾癌血液生物标志物检测试剂盒，其特征在于，上述试剂盒 还包括二抗或检测抗体，该二抗或检测抗体以下形态被包含，亦即，该二抗或检测抗体和让 信号的测量变成可能的标记或酶呈结合的形态，或者和该标记或酶呈分离的形态。
12. 根据权利要求1所述的肾癌血液生物标志物检测试剂盒，其特征在于，上述试剂盒 还包括清洗缓冲液、试剂稀释液、酶底物、终止液。
13. -种肾癌血液生物标志物LCP1的检测方法，其特征在于， 其包括下列步骤： 步骤（a)，让取自受检人的血液试剂或其加工试剂与特异于肾癌血液生物标志物LCP1 的结合分子进行反应，从而形成存在于上述试剂的肾癌血液生物标志物LCP1和特异于它 的结合分子的结合体；及步骤（b)，检测上述结合体。
14. 一种肾癌血液生物标志物NM23A的检测方法，其特征在于， 其包括下列步骤： 步骤（a)，让取自受检人的血液试剂或其加工试剂与特异于肾癌血液生物标志物 匪23A的结合分子进行反应，从而形成存在于上述试剂的肾癌血液生物标志物匪23A和特 异于它的结合分子的结合体；及 步骤（b)，检测上述结合体。
【专利摘要】本发明提供一种肾癌血液生物标志物的检测方法及试剂盒。具体地说，本发明涉及一种对肾癌血液生物标志物NNMT、LCP1及NM23A全部进行检测的方法及试剂盒，这些检测结果能由医师之类的医疗专家有效地用来判断肾癌罹患与否、肾癌发展程度、肾癌治疗经过，尤其是能够有效地适用于肾癌的早期诊断、肾细胞癌类型中占大多数的透明细胞型肾细胞癌的诊断。
【IPC分类】G01N33-551, G01N33-68
【公开号】CN104718455
【申请号】CN201280075692
【发明人】金东寿, 文美香, 罗炯珍, 金烱敏
【申请人】基诺麦因有限公司
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2012年9月27日
【公告号】EP2894474A1, WO2014038744A1