血细胞检测试剂及血细胞处理方法和识别方法
【技术领域】
[0001] 本申请涉及血细胞检测领域，特别是涉及一种血细胞检测试剂，W及利用该试剂 对血细胞进行处理、识别的方法。
【背景技术】
[0002] 外周血中的血细胞由造血干细胞增殖、分化、发育而成。血细胞逐渐成熟并进入外 周血行使特定的功能：其中网织红细胞（Reticulocytes, RET)是尚未完全成熟的红细胞。 未成熟白细胞是指未完成分化、发育的白细胞（未成熟白细胞也称为幼稚白细胞，主要包 括原始细胞（Blast)、幼稚粒细胞（IG)、幼稚淋己细胞等）。临床上，需要检验血液样本中的 网织红细胞和未成熟白细胞。
[0003]美国专利5492833公开了一种利用红细胞影化试剂去除红细胞内血红蛋白，并通 过光散射的检测方法实现网织红细胞分类的方法。美国专利589173U5812127公开了可W 染色网织红细胞和白细胞试剂英光染料，可W实现网织红细胞与红细胞的区分，并能够差 异染色白细胞和网织红细胞，去除白细胞的干扰。但该些网织红细胞检测的试剂并不能就 未成熟白细胞进行检测。
[0004] 中国专利CN94102901. 8公开了使幼稚白细胞与其它细胞类群在体积和内部结构 产生差别的试剂，用该试剂处理血液等液体样本，检测电导信号（DC)和高频电流信号（RF) 实现幼稚白细胞的区分。美国专利5958776公开了一种溶解红细胞，损伤成熟白细胞，保护 并维持未成熟细胞形态结构，同时对受损伤的白细胞进行特异性英光染色，实现未成熟细 胞区分。该几种方法均需要溶解红细胞、容易受到红细胞碎片的干扰，同时对白细胞的损伤 破坏了白细胞的内部形态结构信息。
[0005]综上所述，目前的检测方法中无同时检测未成熟白细胞、白细胞及网织红细胞的 方法的报道。如可通过一种试剂，实现在一次检测中对多种细胞进行检测，将会在很大程度 上降低检测成本，并减少仪器的复杂性，对医疗设备的普及和推广具有较大的意义。
【发明内容】
[0006] 针对上述现有技术的不足，本申请的目的在于提供一种可实现同时对多种血细胞 进行检测的试剂，尤其是提供一种可现实同时对未成熟白细胞和网织红细胞进行检测的试 剂。
[0007] 同时，本申请还提供了一种血细胞处理方法和一种血细胞识别方法。
[0008] 为实现上述目的，本申请采用了 W下技术方案。
[0009] 本申请提供了一种血细胞检测试剂，该试剂包括：英光染料、球形化组分和有机 醇。其采用的英光染料具有细胞通透性，且可W对细胞内核酸物质特异性染色。其采用的球 形化组分能够球形化红细胞，保持红细胞膜完整且不对白细胞的内部结构产生破坏作用。 其采用的有机醇能够增加细胞通透性，协助英光染料进入细胞。
[0010] 本申请还公开了一种血细胞处理方法，该方法包括：将待测样品与英光染料、球形 化组分和有机醇混合，得到处理后的样品。该英光染料具有细胞通透性，且可w对细胞内核 酸物质特异性染色。该球形化组分能够球形化红细胞，保持红细胞膜完整且不对白细胞的 内部结构产生破坏作用。该有机醇能够增加细胞通透性，协助英光染料进入细胞。
[0011] 在本申请的【具体实施方式】中，上述处理方法中的混合时间优选为5到60砂，更优 选20-50砂。
[0012] 此外，本申请还公开了一种血细胞识别方法，该识别方法包括（1)将含有血细胞的 待测样品与上述包括英光染料、球形化组分和有机醇的试剂混合反应，使待测样品中的红 细胞球形化，保持红细胞膜完整且不破坏白细胞的内部结构，对细胞内部核酸物质进行英 光染色，该血细胞中含有网织红细胞和未成熟白细胞。（2)检测处理后的血细胞的英光信号 和至少一种散射光信号，根据检测结果同时识别出网织红细胞和未成熟白细胞。
[0013] 在本申请的【具体实施方式】中，上述识别方法中的混合时间优选为5到60砂，更优 选20-50砂。
[0014] 同时，本申请也提供了上述试剂和试剂盒在血细胞检测领域的应用。
[0015] 本申请的有益效果是；本申请提供的试剂中包括英光染料、球形化组分与有机醇， 与血细胞反应时H者配合使用产生协同作用，使得细胞的膜通透性增加，可实现在不破坏 血细胞细胞膜的情况下染色网织红细胞、成熟白细胞和未成熟白细胞等细胞。将待测样品 与本申请提供的试剂混合一定时间再通过光学检测，即可实现通过一种试剂在一次检测中 对不同血细胞，尤其是对未成熟白细胞和网织红细胞的同时检测。
【附图说明】
[0016] 图1是本申请的一种血细胞检测装置的光学检测系统模式图；
[0017] 图2是本申请试剂检测血液样本各细胞类群分布的示意图，图2-A为前向散射 光-侧向英光检测结果示意图，图中通过侧向英光强度和前向散射光强度可W划分为实线 标志区域，分别为红细胞、网织红细胞、血小板、幼稚粒细胞、原始细胞和成熟白细胞分布区 域；图2-B为侧向散射光-侧向英光检测结果示意图，图中通过侧向英光强度和侧向散射光 强度可W划分实线标志区域，分别为红细胞、血小板、幼稚粒细胞、原始细胞、成熟白细胞分 布区域；
[0018] 图3是本申请实施例一中含有网织红细胞与未成熟白细胞的样本与检测试剂赔 育不同时间后的散点图（图3-A的赔育时间为3. 6砂；图3-B的赔育时间为12. 6砂；图3-C 的赔育时间为32. 6砂；图3-D的赔育时间为62. 6砂）；
[001引图4是本申请中实施例二中含有网织红细胞样本检测散点图，图中根据前向散射 光和英光强度差异划分出红细胞、网织红细胞、血小板、成熟白细胞分布区域；成熟白细胞 类群进一步可W划分为中性粒细胞、单核细胞和淋己细胞区域；
[0020]图5是本申请中实施例H含幼稚粒细胞的血液样本检测散点图，图5-A为前向散 射光-侧向英光二维散点图，成熟白细胞英光前方为幼稚粒细胞分布区域；图5-B为侧向散 射光和侧向英光二维散点图，成熟白细胞英光前方为幼稚粒细胞区域，具有高的侧向散射 光信号；
[002。 图6是本申请中实施例四含原始细胞的血液样本检测散点图，图6-A为前向散射 光-侧向英光二维散点图，原始细胞分布类群分布在较成熟白细胞英光信号低的区域；图 6-B为侧向散射光和侧向英光二维散点图，原始细胞分布在侧向散射光相对低的区域，具有 较低的侧向散射光信号；
[0022] 图7是本申请中实施例五含网织红细胞、幼稚粒细胞和原始细胞的血液样本的经 前向散射光、侧向散射光和侧向英光信号检测结果图，图7-A为前向散射光-侧向英光二维 散点图，幼稚粒细胞、原始细胞分布类群分布在较成熟白细胞英光信号低的区域；图7-B为 侧向散射光和侧向英光二维散点图，幼稚粒细胞较原始细胞具有更高的侧向散射光信号；
[0023]图8是本申请中实施例六中含有网织红细胞的样本检测结果与镜检结果对比散 点图，两组结果相关性系数R为0. 99。
【具体实施方式】
[0024] 定义
[0025] 除另有说明外，本文中使用的术语具有W下含义。
[0026] 本文中使用的术语"烷基"，无论是单独使用还是与其他基团结合使用，指包含 1-18、优选1-12,、更优选1-6个碳原子的直链烷基和支链烷基。如提及单个烷基如"正丙 基"，则只特指直链烷基，如提及单个支链烷基如"异丙基"，则只特指支链烷基。例如，"Ci_e 烷基"包括Ci_4烷基、Ci_3烷基、甲基、己基、正丙基、异丙基和叔了基。类似的规则也适用于 本说明书中使用的其他基团。
[0027] 本文中使用的术语"烷基醇"是指至少一个羟基与上述定义的"烷基"结合的醇， 该"烷基"包括直链烷基和支链烷基，该"烷基醇"可包含一个或多个羟基。例如，本文中的 Ci_e烷基醇包括甲醇、己醇、丙醇、下醇、己二醇、丙二醇、丙H醇等。
[0028] 本申请中的血细胞检测试剂和试剂盒，其检测目标为血细胞，该血细胞包括红细 胞、白细胞和血小板，其中红细胞包括成熟红细胞(无核红细胞）和网织红细胞，白细胞包括 成熟白细胞和未成熟白细胞，其中未成熟白细胞主要包括幼稚粒细胞和原始细胞。适用于 本申请的待测样品具体包括但不限于血液样品、骨髓样品和体液等。
[0029] 现有技术中对上述血细胞的检测，通常情况下需