体外诊断装置及其使用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及体外诊断装置，其用于从血液或其一种组成成分的样本检测红细胞抗 原和专门抵抗这些抗原的抗体之间的反应。
[0002] 本发明还致力于这种装置对于识别和确定血型的使用。
【背景技术】
[0003] 血液免疫诊断的目标是提供或诊断由抗体对红血球的攻击。为此，必要的是具有 用于确定在红血球的表面处存在的抗原的工具，其存在或其缺失限定血型，但是还识别血 液是否含有针对红血球已知抗原的一个或多个抗体，抗体的存在意味着不相容性的可能。
[0004] 因此通常的技术包括在红细胞表面处搜索和识别血型抗原的存在或缺失，和/或 搜索和识别在血衆中血型抗抗原抗体（anti-antigen antibody)的存在或缺失。
[0005] 例如，对于ABO系统，Beth - Vincent测试确定通过红血球携带的抗原，且补充的 Simonin - Michon测试或血清交叉检验确定血清中流动的抗体。
[0006] 在Beth - Vincent测试中，个体的红血球与具有已知特性的抗体试剂在一起。通 常，在抗体识别相应的红细胞抗原时，该测试通过对红血球凝聚的观察而是可见的。
[0007] 在Simonin测试中，个体的血衆与红血球测试一起，所述红血球测试每一个属于 ABO系统的精确抗原组。这是通过个体血浆的红血球细胞凝聚测试。
[0008] 对所谓的不规则抗体的搜索检测对抗各种红细胞抗原的免疫球蛋白的个体在血 液中的存在或缺失。在自身抗体研宄的情况下，在直接测试中直接在个体中搜索已经固定 在体内的抗体。在同种抗体搜索的情况下，目标是通过间接的Coombs技术发现在红血球测 试上这些免疫球蛋白的固定，其中抗原是已知的。
[0009] 存在大量过程和装置以用于血液免疫学领域中的表型分析（phenotyping)，但是 血型的现有表型分析技术具有许多缺点。
[0010] 例如微平板技术（Microplating technique)需要离心阶段，随后是搅动步骤。搅 动步骤是关键的，因为同时存在于载体上的多种反应不具有相同的再悬浮动力学特征。因 此存在解开弱凝聚而不能继续再悬浮的强凝聚的风险。必须在可使检查下执行，且必须特 别注意一些试剂的粘合现象。
[0011] 类似地，在执行通过凝胶测试进行的过滤技术的同时，还存在的风险是，无法检测 由于因小凝聚在其进入凝胶时剪切作用而造成的分离造成的ABO血型的血浆测试期间的 一些凝聚。
[0012] 还有，所有这些技术存在一主要缺陷，因为它们需要离心步骤以将红血球移除，或 让它们经过凝胶，还需要限流步骤（restricting step)，该步骤增加了大量时间和分析成 本且需要使用难以操作的大体积离心器。
[0013] 免疫过滤方法也是已知的，例如申请EP- 2. 167. 967中描述的，其包括在样本经 过带有捕获元素的多孔薄膜时捕获存在于样本中的分析物且通过显示元素（revelation element)显示其存在。这类装置包括样本的沉淀区域，亲水性多孔薄膜，在所述亲水性多孔 薄膜上沉淀捕获试剂且在所述亲水性多孔薄膜下面设置吸收剂薄膜。在样本沉淀区域中执 行包括沉淀纯或稀释样本的这类测试，所述样本经过多孔薄膜，以在吸收剂薄膜中完成。在 经由毛细作用进入多孔薄膜的这种行进过程中，如果对应于捕获元素的分析物存在于样本 中，则后者被捕获试剂固定。此外，必要的是通过能检测捕获区域上分析物存在的显示试剂 显示优选分析物的捕获点上的存在，且其带有一种元素，该元素让其能被视觉地检测（被 着色产物）或通过物理或化学方法被发现。
[0014] 但是，该方法具有显著的敏感性和特性问题，因为在样本被沉淀时，其使得多孔薄 膜展开和吸收，且许多分析物在多孔薄膜的死亡体积中损失且经过捕获区域以外。对于发 现溶液有相同问题。因此必要的是使得吸收系统尺寸过大，以能沉淀要被测试的更大量的 样本和发现溶液，防止执行微型化测试，其动力特点被控制，不必接收显示试剂且可被机器 人吸液管利用。
[0015] 试图解决该问题和集中信号，其已经在申请CA1312265或W002052263中提出，在 亲水性多孔薄膜的上方和下方插入疏水结构，其迫使流动经过捕获点。但是，这些装置仍然 存在的问题是从点的离心扩散，经过捕获点且不被固定至其的显示元素将能在亲水性多孔 薄膜中离心扩散和存储在点的周围。显示元素将随后避免针对所述点的清洗。存在显示元 素的返回现象，其形式是通过朝向所述点的向心扩散的返回，使得即使在缺失优选分析物 的情况下也能进行点着色。这种现象能非常快速地防止测试读取（通常在5到15分钟之 间），因为会出现假的阳性结果。这是非常有问题的，因为在有疑问、人的错误或信息损失的 情况下，这些装置不再随后解读装置。
[0016] 现有免疫过滤的另一主要问题是运动速度的控制和在一些情况下的预培养 (pre - incubation)时间。这些时间是重要的，因为捕获元素和分析物之间的相互作用以及 分析物和显示元素之间的相互作用具有特定的动力学特点。这些动力学特点描述了按时间 函数执行的反应数量。因此根据捕获试剂/分析物耦合剂和发现/分析物试剂，对于每一 个耦合剂，用于获得足够信号的大量相互反应必须被确保。在捕获试剂/分析物之间的相 互作用被减慢的情况下，经过薄膜的样本的通过速度必须因此进行调整。在显示元素和分 析物之间的相互作用被限制的情况下，必要的是进行预培养，其中显示元素和分析物在捕 获点上混合。在没有具体系统的情况下，通过亲水性薄膜是很快的（500 μ 1/min)。
[0017] 为了控制流动，已经提出了利用活塞，特别是在申请US2008318342中。
[0018] 为了控制预培养时间，已经在申请W003016902中提出使用具有两个部分的装置： 上部部分，包括样本收集区域和多孔薄膜；和下部部分，包括多孔薄膜和吸收剂薄膜。在最 初位置中，这两个块不连通，因为流体不能经由毛细作用传输。在机械处理之后，两个区域 接触且流体可经由毛细作用流动。已经提出在疏水薄膜上沉淀捕获元素和通过增加表面活 化剂而激励这种通过。
[0019] 使用机器人难以执行机械方法，因为其需要开发和使用专用系统。在处理期间其 还使得专业人员暴露于投射。
[0020] 在测试被执行时增加表面活化剂以优化系统是非常有害的，因为其在捕获试剂/ 分析物相互作用方面会显著干扰。还有，在血液免疫的具体情况下，用作显示试剂的红血球 不与液体形式的表面活性剂相容，因为红血球的细胞膜溶解且其使得其血红蛋白清空。
[0021] 描述在EP0334015中的另一方法，包括使用第一薄膜下方的额外薄膜以控制流 动，但是所提出的装置无法解决亲水性的多孔薄膜中的显示元素和样本扩散的问题。
[0022] 现有的血液免疫诊断因此具有许多缺点。
【发明内容】
[0023] 此外，本发明目的是通过提供适于通过毛细作用进行体外血液免疫诊断的装置克 服现有技术的缺陷，其是可靠、快速、可移动且经济的，制造和使用简单，且能被小型化和自 动化，具有很高敏感性。
[0024] 为了该目标，本发明提出一种用于从血液或其组成成分中之一的样本检测红细胞 的表型的抗原和与该抗原相关的抗体之间至少一个反应的体外诊断装置，其特征在于包 括：
[0025] -支撑件，和
[0026] -疏水多孔薄膜，厚度为0· 05mm到I. 5mm之间且其孔的直径为2到30 μ m之间，所 述薄膜包括用于接收所述样本的至少一个亲水反应区域，所述反应区域的表