一种粘液细胞的快速染色方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞染色领域，具体涉及一种粘液细胞的快速染色方法。
【背景技术】
[0002]对细胞或细菌进行涂片染色制片是医学检验和生物学研宄的重要环节，目前有三种方法对细胞或细菌进行涂片、染色、制片:一是传统的人工操作涂片、染色、制片；另一种是利用仪器设备自动涂片，然后再采取传统的人工操作染色、制片；第三种是利用仪器设备自动制片。第一种方法人工操作涂片、染色、制片，其仪器设备需要少、投资小，但存在以下缺陷:1、涂片厚薄依赖操作人员的工作经验，难以控制。2、在用于细胞学制片时，标本中的杂质如血液、黏液、细菌、坏死退化细胞等无法除去。3、凭操作人员的经验滴加染色液，随意性较大，不能定量，染色效果的重复性差。4、染色时间、温度只能粗略估计，不能确保染色效果。第二种方法利用仪器设备自动涂片，然后再采取传统的人工操作染色制片的工作过程是:利用负压将收集并经过处理后的标本吸入到安装有过滤膜的过滤装置中，标本中的液体部分通过过滤膜排除掉，有形成份分布于过滤膜上，然后利用设备将过滤膜上的有形成份，也就是细胞转移到玻片上，这样就完成了自动涂片，之后利用人工操作的方法进行染色和制片。其缺点是:1、只适用于细胞制片，不能用于细菌制片。原因是细菌太小，在通过过滤膜收集后无法将其转移玻片上；2、在将过滤膜上收集到的细胞转移到玻片上时有一个挤压的过程，容易造成细胞破裂或变形，影响制片效果；3、凭操作人员的经验滴加染色液，随意性较大，不能定量，染色效果的重复性差。4、染色时间、温度只能粗略估计，不能确保染色效果。第三种方法利用仪器设备自动制片。具有细胞学自动涂片、染色功能的仪器设备目前只有美国能生产，其机型有Auto-Cyte PREP仪器等，其工作原理为:将标本进行梯度分离，离心浓集细胞标本，将标本转移到安装有玻片的特殊装置中，由细胞自然沉降到玻片上，利用玻片上的黏附涂层将细胞固定，然后自动染色完成制片过程。利用该设备制片效果良好，但不能自动对标本进行稀释处理等；制片的细胞厚度不能控制；功能少，只能完成巴氏染色一种染色方法；操作复杂，设备昂贵，一套上述设备国内报价在百万元以上，消耗品价格贵，使用费用高。
【发明内容】
[0003]为解决上述问题，本发明提供了一种粘液细胞的快速染色方法。
[0004]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0005]一种粘液细胞的快速染色方法，包括如下步骤:
[0006]步骤1、将组织切片放入染色架依次置于100% 二甲苯1、100% 二甲苯II中各8min ；
[0007]步骤2、将组织切片按浓度为100%二甲苯I 5min、浓度为100%二甲苯II 5min浓度为95%的酒精5min、浓度为85%的酒精5min、浓度为75%的酒精5min的梯度进行复水后，置于自来水中流水冲洗5min ；
[0008]步骤3、取2张切片用蒸馏水滴洗组织切片3次，甩干；
[0009]步骤4、用滴管取浓度为1%、PH为2.5的I %阿利新蓝染液滴染步骤3所得的两个组织切片，染色5min。
[0010]步骤5、将步骤4所得的组织切片用慢速流水冲洗2min后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干；
[0011]步骤6、用滴管取浓度为0.5%的I %高碘酸溶液滴染步骤5所得组织切片，氧化2min ；
[0012]步骤7、将步骤6所得的组织切片用慢速流水冲洗Imin后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干；
[0013]步骤8、用滴管取0.5%雪夫试剂滴染组织切片，染色5min ；
[0014]步骤9、甩掉切片上多余雪夫试剂，将切片放入染色架置于烧杯中，滴水返红9-llmin，通过显微镜观察上色效果，若效果不佳，继续进行返红，直至上色；(注:烧杯中先加少量自来水淹没组织，滴水返红时尽量避免液体流出烧杯，使组织处于返红水环境中，返红效果才好，返红后可不冲洗，直接脱水)。
[0015]步骤10、按浓度为75%的酒精10s、浓度为85%的酒精30s、浓度为95%的酒精2min、浓度为100%的二甲苯I 5min、浓度为100%的二甲苯II 5min的梯度对组织切片进行脱水，放入烘箱5min，加速酒精挥发；
[0016]步骤11、将烘干后的组织切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，进行透明处理后，采用中性树脂封片。
[0017]优选的，所述的阿利新蓝染液由阿利新蓝lg，加3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
[0018]本发明的有益效果是:
[0019]染色效果好，上色所需时间短。
【具体实施方式】
[0020]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0021]本发明实施例提供了一种粘液细胞的快速染色方法，包括如下步骤:
[0022]步骤1、将组织切片放入染色架依次置于100% 二甲苯1、100% 二甲苯II中各8min ；
[0023]步骤2、将组织切片按浓度为100%二甲苯I 5min、浓度为100%二甲苯II 5min浓度为95%的酒精5min、浓度为85%的酒精5min、浓度为75%的酒精5min的梯度进行复水后，置于自来水中流水冲洗5min ；
[0024]步骤3、取2张切片用蒸馏水滴洗组织切片3次，甩干；
[0025]步骤4、用滴管取浓度为I %、PH为2.5的I %阿利新蓝染液滴染步骤3所得的两个组织切片，染色5min。
[0026]步骤5、将步骤4所得的组织切片用慢速流水冲洗2min后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干；
[0027]步骤6、用滴管取浓度为0.5%的I %高碘酸溶液滴染步骤5所得组织切片，氧化2min ；
[0028]步骤7、将步骤6所得的组织切片用慢速流水冲洗Imin后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干；
[0029]步骤8、用滴管取0.5%雪夫试剂滴染组织切片，染色5min ；
[0030]步骤9、甩掉切片上多余雪夫试剂，将切片放入染色架置于烧杯中，滴水返红9-llmin，通过显微镜观察上色效果，若效果不佳，继续进行返红，直至上色；(注:烧杯中先加少量自来水淹没组织，滴水返红时尽量避免液体流出烧杯，使组织处于返红水环境中，返红效果才好，返红后可不冲洗，直接脱水)。
[0031]步骤10、按浓度为75%的酒精10s、浓度为85%的酒精30s、浓度为95%的酒精2min、浓度为100%的二甲苯I 5min、浓度为100%的二甲苯II 5min的梯度对组织切片进行脱水，放入烘箱5min，加速酒精挥发；
[0032]步骤11、将烘干后的组织切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，进行透明处理后，采用中性树脂封片。
[0033]所述的阿利新蓝染液由阿利新蓝lg，加3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
[0034]经检测，AB-PAS染杯状细胞结果分成4种类型:
[0035]I型呈红色，AB阴性，PAS阳性，含中性粘多糖。
[0036]II型呈蓝色，AB阳性，PAS阴性，含酸性粘多糖。
[0037]III型呈紫红色，AB与PAS均为阳性，主要含有PAS阳性的中性粘多糖，同时含有少量AB阳性的酸性粘多糖。
[0038]IV型呈蓝紫色，AB与PAS均为阳性，主要含有AB阳性的酸性粘多糖，同时含有少量PAS阳性的中性粘多糖。
[0039]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种粘液细胞的快速染色方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤1、将组织切片放入染色架依次置于100%二甲苯1、100%二甲苯II中各8min ；步骤2、将组织切片按浓度为100%二甲苯I 5min、浓度为100%二甲苯II 5min浓度为95%的酒精5min、浓度为85%的酒精5min、浓度为75%的酒精5min的梯度进行复水后，置于自来水中流水冲洗5min ； 步骤3、取2张切片用蒸馏水滴洗组织切片3次，甩干； 步骤4、用滴管取浓度为1%、PH为2.5的I %阿利新蓝染液滴染步骤3所得的两个组织切片，染色5min。 步骤5、将步骤4所得的组织切片用慢速流水冲洗2min后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干； 步骤6、用滴管取浓度为0.5 %的I %高碘酸溶液滴染步骤5所得组织切片，氧化2min ；步骤7、将步骤6所得的组织切片用慢速流水冲洗Imin后，用蒸馏水滴洗组织3次，用洗耳球将组织周围水分吹干； 步骤8、用滴管取0.5%雪夫试剂滴染组织切片，染色5min ； 步骤9、甩掉切片上多余雪夫试剂，将切片放入染色架置于烧杯中，滴水返红9-llmin，通过显微镜观察上色效果，若效果不佳，继续进行返红，直至上色； 步骤10、按浓度为75%的酒精10s、浓度为85%的酒精30s、浓度为95%的酒精2min、浓度为100%的二甲苯I 5min、浓度为100%的二甲苯II 5min的梯度对组织切片进行脱水，放入烘箱5min，加速酒精挥发； 步骤11、将烘干后的组织切片依次置于二甲苯1、和二甲苯II中各8min，进行透明处理后，采用中性树脂封片。
2.根据权利要求1所述的一种粘液细胞的快速染色方法，其特征在于，所述的阿利新蓝染液由阿利新蓝Ig^P 3%醋酸水溶液定容至10ml所得。
【专利摘要】本发明公开了一种粘液细胞的快速染色方法，包括如下步骤：将组织切片放入染色架依次置于100％二甲苯I、100％二甲苯II中各8min；将组织切片按100％二甲苯I5min、100％二甲苯II5min95％的酒精5min、85％的酒精5min、75％的酒精5min的梯度进行复水后，冲洗；取2张切片用蒸馏水滴洗组织切片3次，甩干；用滴管取1-2滴1％阿利新蓝染液滴染组织切片后，冲洗，用蒸馏水滴洗组织3次；再用滴管取1-2滴1％高碘酸溶液滴染后，冲洗，用蒸馏水滴洗组织3次；再用滴管取1-2滴0.5％雪夫试剂滴染组织切片，甩掉切片上多余雪夫试剂，将切片放入染色架置于烧杯中，滴水返红，脱水烘干后，进行透明处理后，采用中性树脂封片。
【IPC分类】G01N1-30
【公开号】CN104849126
【申请号】CN201510275278
【发明人】何敏, 梁晓霞, 汪开毓, 方静, 陈正礼, 耿毅, 彭西, 唐丽, 潘康成, 赖为民
【申请人】四川农业大学
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月20日